加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脑组织衰老的机制研究

目的从ERK/MAPK通路的角度探讨加味四君子汤对脾虚犬小肠紧密连接蛋白表达的影响。方法将24只1岁龄健康比格犬随机均分为对照组、脾虚组、自然恢复组和加味四君子汤组。采用番泻叶药液复制脾虚模型犬,模型构建成功后,脾虚组犬处死采样,对照组和自然恢复组犬饲喂基础日粮,加味四君子汤组犬在基础日粮中添加2% (以生药计)加味四君子汤。试验期14 d。试验结束时各组试验犬解剖采集十二指肠、空肠和回肠,应用免疫组织化学(IHC)、荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western-blot,WB)检测相关指标。结果脾虚组试验犬小肠ZO-1和Occludin蛋白阳性表达水平,ZO-1和Occludin mRNA相对表达量,ZO-1、Occludin及ERK/MAPK相关通路蛋白表达量均显著低于对照组试验犬(P<0.01);经加味四君子汤治疗后试验犬上述指标较治疗前均显著升高(P<0.01),趋近对照组水平。结论试验犬脾虚证候与小肠紧密连接蛋白的低表达密切相关,小肠机械屏障功能降低;加味四君子汤可以显著提高脾虚犬小肠紧密连接蛋白的表达水平,其调节机制可能是通过活化ERK/MAPK通路来实现。     

CREB转录因子及其磷酸化信号通路的研究进展

cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）是一种真核生物细胞核内调控因子,在神经元再生、突触形成及学习记忆等方面具有重要的调节作用。CREB的磷酸化是实现调节转录的重要途径,胞外信号途径影响CREB的磷酸化来激活多种靶基因转录,表现出多种生理功能。综述了CREB的结构、调控机制,特别是磷酸化的信号通路。     

阿勒泰羊羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织的表达研究

[目的]研究MSTN/Smad信号通路基因在阿勒泰羊2日龄羔羊不同组织中的表达程度的差异.掌握阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因表达规律.[方法]采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达量.[结果]背最长肌MSTN mRNA表量显著高于股三头肌、股二头肌、半腱肌和半膜肌(P＜0.05),各组织Smad2 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05).Smad3 mRNA在股二头肌、半腱肌、背最长肌和脾中的表达量显著高于肺中的表达量(P＜0.05).Smad4 mRNA在心脏中的表达显著高于肺脏中的表达量(P＜0.05).TGFBR1 mRNA在心脏中的相对表达量为最高.TGFBR2 mRNA在心脏、脾脏、肾脏、肝脏中的表达量显著高于股二头肌肉中的表达量(P＜0.05).[结论]对阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达进行了初步的研究,这对今后阿勒泰羊MSTN基因表达规律及调控的研究具有重要意义.     

吐鲁番黑羊羔羊MSTN/smad信号通路基因在不同组织的表达研究

[目的]研究MSTN/Smad信号通路基因(MSTN,Smad2,Smad3,Smad4,TGFBR1,TGFBR2)在新生和一周龄吐鲁番黑羊羔羊不同组织的表达差异.[方法]采用实时荧光定量PCR技术RT-PCR分析MSTN/Smad信号通路基因在新生吐鲁番黑羊羔羊股二头肌,股三头肌,半腱肌,半膜肌,背最长肌,尾脂等6种不同部位组织和一周龄羔羊的肝,肺,脾,肠,心,肾等6种内脏组织的mRNA表达水平进行分析.[结果]经过内参基因校正后,其中TGFBR1基因在肺组织中没有表达以外此基因和其他的基因在股二头肌,股三头肌,半腱肌,半膜肌,背最长肌,尾脂,肝,肺,脾,肠,心,肾等不同组织中均有表达.[结论]MSTN/Smad信号通路基因在各种不同组织中均有表达,对各组织的生长发育有影响.     

乙烯信号通路转录因子EIL1参与番茄单性结实的机制

[目的]本文旨在探究乙烯信号通路转录因子EIL1对番茄果实形成的作用。[方法]以EIL1过量表达转基因番茄(EIL-OX)、EIL1共抑制表达转基因番茄(EIL-CS)、EIL1启动子驱动GUS报告基因的转基因番茄(PE1∷GUS)和DR5启动子驱动GUS报告基因转基因番茄(DR5∷GUS)为材料,采用RT-qPCR和ELISA等技术研究在番茄果实形成过程中EIL1的转录变化和生长素水平变化;通过杂交、Ag+处理以及GUS染色,分析乙烯和生长素在番茄果实形成过程中的互作机制。[结果]RT-qPCR结果显示,在番茄果实形成和成熟的过程中Sl EIL1基因的表达量呈"升高-降低-升高"的趋势。表型分析发现,EIL-OX植株较矮,叶片小且向地生长,出现大量侧枝,部分花蕾凋亡且植株提前衰老; EIL-CS植株自交形成的胚珠发育异常,产生无籽果实,同时ELISA检测表明EIL-CS植株果实发育过程中生长素含量高于EIL-OX和野生型植株。GUS染色结果显示,PE1∷GUS植株EIL1在萼片中大量表达,DR5∷GUS植株生长素主要分布在果柄、萼片处,且授粉后萼片与子房交接处的生长素含量降低。EIL-OX/DR5∷GUS和Ag+处理的野生型植株中生长素主要出现在果柄处。[结论]EIL1能够阻碍生长素从果柄向子房运输,授粉受精或下调表达EIL1均能解除这种阻碍,提高子房生长素水平,形成果实。     

多囊卵巢综合征与PI3K/Akt信号通路的关系

多囊卵巢综合症(PCOS)是女性常见的生殖功能障碍性疾病,主要表现为卵巢的雄激素过多及排卵障碍,是引起女性不排卵性不孕的主要原因。PCOS患者主要表现为胰岛素抵抗和高胰岛素血症,而PI3K/Akt信号通路是胰岛素发挥生理作用的主要信号通路,并且Akt的下游底物GSK-3是糖原合成的主要调控因子,本文就PI3K/Akt与胰岛素抵抗的关系做一综述,并对PCOS的治疗进行了展望。     

PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究

 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞,通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法,观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化,病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性,而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制,表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用,该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。     

家蚕Notch信号通路基因的表达研究

[目的]研究家蚕Notch信号通路基因的表达情况。[方法]在实验室前期工作的基础上,用特异引物对家蚕的Notch信号通路上下游基因进行克隆,并对这些基因在家蚕5龄幼虫不同组织部位的表达进行研究。[结果]这些基因在各组织的表达量不同,其中fringe和groucho在家蚕头部表达量较多,在丝腺、精巢、卵巢中的表达量较少;notch在家蚕尾部表达量较少,在其他组织中表达量无明显差别。[结论]该研究为进一步研究家蚕Notch信号通路奠定了基础。     

核黄素启动植物生长信号通路的初步研究

报道了核黄素促进植物生长的效应及分子反应。在实验室内对7种粮食、蔬菜和经济作物使用核黄素后，植物生长量增加23.8%-85.4%。在田间试验中，烟草使用核黄素后，生长量提高35.9%-108%。烤烟叶产量提高44.7%-110.3%。在拟南芥上，核黄素处理可以诱导PR-3b、PDF1.2、ETR1和EIN2基因的表达；PR-3b和PDF1.2是乙烯信号通路的分子标志，乙烯/茉莉酸信号传导可以调控植物生长发育；ETR1和EIN2是乙烯信号通路上，下游的关键调控基因，其产物分别作为乙烯的受体和转录调控因子起作用。根据以上这些结果，核黄素启动了植物生长信号传导通路的分子反应，促进了植物生长。     

曲阜孔林不同月份黑线仓鼠睾丸组织变化的比较研究

采用形态解剖和组织切片手段,对世界最大的人造园林－－曲阜孔林中不同月份黑线仓鼠睾丸的形态结构及质量变化进行了观察比较。结果表明：黑线仓鼠睾丸质量和曲细精管直径在不同月份呈规律性变化,且二者存在显著的正相关关系。从生殖生物学角度探讨了黑线仓鼠睾丸组织随月份变化的规律。     

PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响

[目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。     

多子小瓜虫感染后草鱼TLR信号通路基因 的表达动态

[目的]明确草鱼Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路基因在防御多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染过程中的免疫作用,为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考.[方法]以多子小瓜虫感染草鱼后,采用实时荧光定量PCR检测分析在不同时间点(感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d)草鱼部分TLRs基因(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化.[结果]草鱼感染多子小瓜虫后,TLR1、TLR2、TLR9、TLR20和TLR21基因在皮肤和脾脏中的表达主要呈上调趋势,TLR4基因在皮肤中主要呈上调表达,在脾脏中则主要呈下调表达;TLR信号通路接头蛋白基因MyD88和TRIF的表达变化趋势明显不同,其中,MyD88基因的表达在感染后第1~3 d均呈显著上调趋势(P<0.05,下同),而TRIF基因的表达在整个试验过程中绝大多数时间点与对照组无显著差异(P>0.05);IRAK4和IRAK1在皮肤和脾脏中的表达也主要呈上调趋势,但在脾脏中IRAK4在感染后第1 d和IRAK1在感染后第6 h的表达呈显著下调趋势;IL-1β和TNF-α在绝大多数时间点均显著上调,但IFN的表达基本没有变化.[结论]草鱼TLR信号通路中的部分TLRs基因(TL1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及下游细胞因子(IL-1β和TNF-α)均参与防御多子小瓜虫感染的免疫反应,尤其是在感染早期和中期发挥关键作用.     

连翘酯苷对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响

 【目的】探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾（CEK）细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。【方法】将连翘酯苷设为3个浓度（100、200和400 μg•mL-1）,采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。【结果】与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量（P＜0.05）;而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。【结论】连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞（chicken embryo kidney cells,CEKs） 上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。     

对兰州市羊球虫感染情况的调查研究

通过对兰州市3县4区的规模羊场和散养户的1040只羊采用漂浮集卵进行了调查,结果表明,兰州市红古区羊球虫的感染率最高,为67.07%,永登县羊球虫的感染率最低为27.80%,其它县区羊球虫的感染率在这两地之间。兰州市羊球虫的平均感染率较高,应引起足够的重视。     

牛、羊、猪人工感染口蹄疫病毒3ABC抗体的变化

利用口蹄疫病毒(FMDV)3ABC抗体间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种病毒牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的变化.实验表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48 h后全数发病,第3天即出现可疑的3ABC抗体,第5天检测到阳性的3ABC抗体,至第8天3ABC抗体全部为阳性;10头同居牛(分别与接种感染猪和羊同居)在同居第7天时未检出3ABC抗体,在同居第15天时,3ABC抗体阳性率仅为30%;肌肉接种病毒羊3ABC抗体产生时间与接种病毒牛一致.同居羊在同居后第8天开始产生3ABC抗体,至第15天时所有表现出临床症状的羊3ABC抗体全部为阳性.猪无论是肌肉注射感染还是同居感染,其3ABC抗体与临床症状均具有很好的对应关系;发病猪最早可于接种病毒后第7天检测到可疑的3ABC抗体,至第15天均为阳性.牛、羊和猪均存在隐性感染的情况,即未出现临床症状,但3ABC抗体为阳性.     

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制,与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁,并发挥重要的作用。近年研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡,卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞,其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一,参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。     

MTB感染对小鼠肺脏上皮细胞NF-κB和p53信号通路的调控

【目的】探讨在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染小鼠早期,其肺脏上皮细胞中NF-κB和p53信号通路参与机体的免疫调控作用。【方法】将C57BL/6 Cnc小鼠30只(雄、雌各15只),按5只/组设空白对照组、阴性对照组(腹腔注射生理盐水)和MTB感染组(腹腔注射牛结核分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)),感染4 d后经安乐死处死小鼠,摘取小鼠肺脏和脾脏进行形态学观察;将小鼠肺脏进行冰冻超薄切片,HE染色分析其肺脏病理变化;利用免疫组织荧光技术和激光共聚焦显微镜,标记SP-C阳性肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的位置,观察NF-κB和p53蛋白在肺泡上皮细胞中的表达情况。提取小鼠肺脏组织细胞总蛋白,以β-actin为内参,通过Western blot分析NF-κB和p53信号通路相关因子TLR4、TRAF6、NF-κB、p53、MDM2和CBP在蛋白水平上的变化。【结果】在MTB感染小鼠4 d后,小鼠肺脏形态无明显变化,脾脏1/3尖部瘀血变黑;HE染色发现肺脏组织炎性细胞浸润。在小鼠肺脏上皮细胞中NF-κB与p53蛋白免疫荧光表达较空白对照组和阴性对照组增强。TLR4、NF-κB、p53、MDM2和CBP蛋白在雄性与雌性小鼠中都呈现出显著上调。【结论】当结核分枝杆菌感染小鼠时,小鼠肺脏上皮细胞通过NF-κB和p53信号通路活化来参与宿主抗结核分枝杆菌病感染的免疫调控作用。     

EGCG通过NF-κB信号通路抑制感染ALV-J病毒的DF-1细胞凋亡

【目的】评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有抗J亚型禽白血病毒(ALV-J)效应,为AVL-J防治药物的研发提供理论依据。【方法】在感染ALV-J病毒的DF-1细胞中分别添加浓度为0,5,10,20和40μg/mL的EGCG溶液后培养的0,24,48,72和96 h,对其细胞活性、细胞中env基因表达量,禽白血病p27抗原水平,NF-κB活性以及NF-κB p50和p65蛋白表达进行了测定。【结果】EGCG对感染ALV-J病毒后DF-1的保护作用具有剂量效应,10μg/mL效果最好。在ALV-J侵染的DF-1细胞中添加10μg/mL的EGCG溶液96 h后,可显著抑制由于ALV-J病毒导致的NF-κB亚基p50和p65跨膜转移,降低由于ALV-J病毒造成的细胞凋亡。【结论】EGCG通过抑制NF-κB信号的激活来提高DF-1细胞对ALV-J病毒的抵御能力,且具有显著的剂量效应,10μg/mL为最佳添加浓度。     

Rho A Rock 1信号通路对传染性脾肾坏死病毒感染的调控及作用

【目的】探究传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）复制增殖与Rho A-Rock 1通路的关系。【方法】采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测ISKNV感染CPB细胞12,24,48,72和96 h后病毒DNA拷贝数的变化;同时采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹方法检测病毒感染CPB细胞12,24,48和72 h后Rho A与Rock 1转录及蛋白表达水平的变化;通过Rho A抑制剂（CCG-1423和Rhosin）、Rock 1抑制剂（Thiazovivin和Y-27632）及siRNA抑制Rho A-Rock 1通路,研究Rho A-Rock 1通路抑制对ISKNV复制增殖的影响。【结果】ISKNV感染12~48 h,病毒的DNA拷贝数无显著变化,感染72 h病毒DNA拷贝数显著上升,感染96 h病毒的拷贝数上升变缓,说明ISKNV感染72 h时病毒正处于复制增殖的高峰期。RT-qPCR及蛋白免疫印迹结果表明,ISKNV感染72 h时,Rho A和Rock 1 mRNA转录水平和蛋白水平均显著上调。Rho A抑制剂Rhosin和CCG-1423及Rock 1抑制剂 Y-27632和Thiazovivin均可使ISKNV基因组拷贝数和病变的CPB细胞数显著下调;利用siRNA敲降Rho A和Rock 1时,ISKNV的基因组拷贝数也显著下调。【结论】Rho A-Rock 1信号通路可正调控ISKNV的感染,抑制Rho A-Rock 1通路可显著抑制ISKNV复制增殖。