具有质膜ATP酶活力的大豆细胞壁碎片的制备

通过反复洗涤与低速离心，从大豆下胚轴得到的细胞壁碎片具有ＡＴＰ酶活力，酶活依赖于Ｍｇ＾２＋的存在，受Ｋ＾＋刺激和钒酸钠的强烈抑制，经加ＫＩ的悬浮液洗涤，碎片ＡＴＰ酶受叠氮化钠抑制很少，几乎不受硝酸盐抑制，表明所得的ＡＴＰ酶基本上膜ＡＴＰ酶，本方法简化了质膜的制备过程，在质膜及质膜ＡＴＰ酶的生理研究中有较高的应用价值。     

质膜ATP酶介导机械伤害诱导豌豆叶片的防御反应

【目的】研究质膜ATP酶(H+-ATPase)在机械胁迫诱导植物防御反应形成中的作用。【方法】通过酶活性生化测定、Western blot检测和电镜细胞化学观测方法,研究机械伤害对豌豆幼苗质膜H+-ATPase活性的影响;同时结合药理学实验,进一步探讨了质膜H+-ATPase与活性氧积累在伤害防御反应中的关系。【结果】机械胁迫能诱导质膜H+-ATPase活性提高,但并未改变该酶蛋白含量;抑制质膜H+-ATPase活性,伤诱导的H2O2累积和苯丙氨酸解氨酶活性提高随之被抑制,活性氧清除剂处理对伤诱导质膜H+-ATPase活性提高没有影响。【结论】质膜H+-ATPase参与机械胁迫诱导防御反应相关的信号传递,该酶可能作用于活性氧信号上游,并通过蛋白磷酸化调节来诱导下游防御反应形成。     

渗透胁迫下小麦幼苗根质膜ATP酶活性与膜透性的关系

经-1．0MP。聚乙二醇PEG渗透胁迫处理72h的小麦根系质膜透性可逆升高，抗旱品种（陕合6号）增幅小于干旱敏感品种（郑引1号），反复胁迫易导致质膜透性的不可逆伤害；PMH^＋-ATPase活性降低下降比质膜透性严重受伤害早，且不易恢复，可能是渗透胁迫伤害的原初作用点；PMCa^2＋-ATPase活性强弱取决于小麦抗旱性强弱；渗透胁迫下的质膜透性变化与PM ATPase活性变化不呈现直接相关。     

镉胁迫对长春花质膜过氧化、ATP酶及5′-核苷酸酶活性的影响

长春花(Catharanthus roseus)是我国广泛栽培兼具园林绿化和抗癌药源等重要价值的多年生草本花卉植物.为了解镉胁迫下长春花植物体内活性氧清除及其质膜ATP相关酶调控的机理,采用盆栽试验研究了不同镉浓度(0、5、10、25、50、100 mg·kg-1)处理下长春花质膜过氧化、ATP酶及镉富集特性的影响.结果表明:中、低浓度Cd(≤10 mg·kg-1)胁迫下,长春花的丙二醛(MDA)和H2Oz含量、超氧阴离子自由基(O2-·)产生速率及抗氧化酶活性与对照没有显著差异.高浓度Cd(≥25 mg·kg-1)胁迫下,地上部MDA、H2O2含量和O2-·产生速率较对照显著升高,且地下部高于地上部;高浓度Cd处理使地上部过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及地下部POD、SOD活性显著上升,但地下部CAT活性和GSH含量无明显变化.随着Cd处理浓度升高,地上部H+-ATPase活性逐渐降低,地下部H+-ATPase、地上部和地下部Ca2+-ATPase与5'-AMPase活性均先升后降,在高浓度处理下显著降低.同时,长春花对Cd有较强的富集能力,根系的富集能力高于地上部.     

大豆质膜内在水孔蛋白的生物学功能预测

[目的]利用生物信息学方法对大豆质膜内在水孔蛋白（GrnPIP）的亚细胞定位、跨膜区、信号肽和磷酸化住点进行预测,为基因的功能研究提供参考。[方法]从干旱胁迫后磊抗旱大豆品种21的叶片中克隆出GmPIP基因．利用PSLpced、Protcomp Version8．0、WoLF PSORT、CELLO v2．5等亚细胞预测工具进行亚细胞定位预测;利用TMHMM Serverv．2．0进行蛋白跨膜区分析;利用NetPhos 2．0 Server进行磷酸化位点分析;利用SignaIP3．0 Server程序进行信号肽分析。[结果]综合4种工具的预测结果表明,GmPIP蛋白包含6个跨膜区,亚细胞定位预测表明该蛋白位于细胞质膜上,发现该蛋白的第254个氧基酸是一个潜在的糖基化位点和13个磷酸化位点,该蛋白没有明显的信号肽结构。[结论]利用不同方法进行的生物信息学分析结果可相互验证,生物信息学可以对未知蛋白进行初步的功能预测．有助于确定后续试验的方向．     

双酶水解法制备大豆多肽的研究

[目的]研究酶解法制备微苦大豆多肽的新方法,为其在食品和药品领域的广泛应用提供参考。[方法]选择Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶对大豆分离蛋白进行分步水解。采用单因素分析法和正交试验设计,研究pH值、温度、酶浓度和底物浓度等因素对Alca-lase蛋白酶水解效果的影响,确定其最佳的水解条件。并且,对Flavourzyme酶的脱苦作用进行了研究。[结果]Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件是pH值8.0,温度60℃,酶浓度1000U/g、底物浓度3%,水解时间2h,此时的大豆分离蛋白水解度可达46.13%。Flavourzyme酶可明显降低大豆多肽的苦味。[结论]采用Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶分步酶解法制备的大豆多肽无明显苦味,可被广泛应用于食品生产中。     

酶解制备水溶性大豆多糖的研究

[目的]采用植物复合水解酶水解不溶性豆渣粉制备水溶性大豆多糖（SSPS）,研究最佳制备工艺。[方法]用3,5-二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖,通过单因素试验研究料液比、pH、温度、酶添加量和水解时间对ssPs得率的影响,在单因素试验的基础上设计正交试验选出优化的因素组合。[结果]各因素对SSPS得率的影响大小依次为水解温度〉水解时间〉酶添加量〉pH,在料液比l：20（g：m1）、酶添加量1．2％、pH4．5、温度50℃、提取时间25h的最佳条件下,SSPS得率为8．89％。[结论]酶解制备SSPS工艺设备简单,条件温和,但是耗时较长。     

盐碱胁迫下紫丁香根系中质膜ATP酶活性和电阻抗图谱估测研究

本文以2年生紫丁香苗木为试材,研究了不同浓度的NaCl和Na2CO3胁迫对苗木根系质膜ATP酶(PM-ATP ase)和EIS的影响,探寻EIS参数与PM-ATPase之间的相关性,并建立了估算模型,及对模型进行了验证。其中胞外电阻率(re)与PM-ATPase活性呈极显著负相关,相关系数是-0.959,是估测盐碱胁迫处理后紫丁香根系PM-ATPase活性最佳参数,其最佳估测模型为y=-0.0124x3+1.1659x2-36.267x+385.35。研究结果为EIS技术快速评价盐碱胁迫下紫丁香根系的PM-ATPase活性及耐盐碱性具有一定的借鉴意义。     

酶标记大豆甙元的制备和鉴定

本文报道丹贝中生物活性物质大豆甙元同辣根过氧化物酶偶氧及其酶活性、免疫活性和光谱分析鉴定，大豆甙元－－辣根地氧化物酶标记物中两者摩尔比１１：１，标记物工作浓度５０ｍｇ／ｍｌ，３．５ｎｇ／ｍｌ大豆甙元能与氧化酶标记物发生５０％左右竞争。     

干旱胁迫对不同品种大豆下胚轴生理生化特性的影响

研究分别以2种大豆WDD00172(WDD-172)和晋豆21(JD-21)为实验材料,探讨干旱胁迫对不同品种大豆下胚轴生理特性及抗氧化酶活性的影响。结果表明,随着9%PEG6000胁迫时间的延长,大豆下胚轴MDA含量和离子渗漏显著增高,且WDD-172增幅较大;干旱胁迫下GSH含量、CAT和POD活性持续下降,APX活性则先上升后下降,而且WDD-172下降更加明显。研究发现JD-21更加抗旱可能与体内高浓度的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性有关;干旱胁迫下JD-21比WDD-172更加耐受干旱胁迫,可能是由于体内抗氧化酶活性(CAT、POD和APX)和抗氧化物质GSH含量较高的原因。     

NAA处理对大白菜细胞壁成分和Ca~(2 )-ATPase活性的影响

ＮＡＡ处理使大白菜根对４５Ｃａ的吸收增加，提高茎叶中４５Ｃａ的积累，尤其心叶中４５Ｃａ的积累显著提高。同时，ＮＡＡ处理下根细胞壁和叶的细胞壁成分中醛酸含量和总糖含量均明显增加，其中糖和醛酸成分中的ＸＹＬ和ＧＬＣ提高５０％。ＮＡＡ处理激活大白菜根叶细胞膜的Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的活性。     

ATPase activity of pig erythrocytes

ATPase activity of pig erythrocytes depends on age, G-strophanthin, and concentration of Na⁺ and K⁺ ions. Potassium ions play the main regulatory role in enzyme activity, and sodium ions have an insignificant effect.     

破壁方法对葡糖醋杆菌TDY1破壁率及乙醇脱氢酶酶活的影响

分别用超声破碎法、反复冻融法、溶菌酶法和细菌裂解液法等4种不同破壁方法对葡糖醋杆菌TDY1进行破壁处理,通过比较细胞的破碎率和乙醇脱氢酶的活力,确定适合于菌株TDY1的细胞破壁方法和最佳条件.结果表明,超声破碎法获得的乙醇脱氢酶活力最高、为4004(±224)U/mg,破壁率为97.3(±1.26)％,与其他3种方法比较差异极显著;处理2 mL菌数为1.3×1010CFU/mL的菌液时,超声破碎的最佳条件为:超声9s、破碎总时间75 s、功率95 W.     

大豆细胞悬浮培养及其大豆异黄酮和抗毒素诱导积累研究进展

大豆细胞悬浮培养是将大豆细胞及细胞团培养于液体培养基中的方法,应用于大豆多种研究领域。从不同的外植体包括子叶、子叶节、下胚轴、幼胚、茎培养大豆细胞的方法,外源诱导物及前体对细胞积累大豆异黄酮以及诱导物对细胞合成和积累大豆抗毒素诱导效果进行综述。大豆异黄酮和抗毒素是大豆产生的两类具有生物活性的次生代谢物。在此基础上,指出诱导中存在的问题及今后的研究方向,旨在通过增加诱导子的选择而促进大豆细胞合成更高水平抗毒素及异黄酮提供一些思路。     

芦笋茎枯病菌细胞壁降解酶活性的测定及条件优化

为明确芦笋茎枯病菌细胞壁降解酶的活性及测定条件,利用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定7种常见细胞壁降解酶的活性,比较不同底物对3种主要酶的诱导作用,并从温度、时间、pH值等方面优化酶活性的测定条件。结果表明:7种细胞壁降解酶中,多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)的活性较高,其次是果胶甲基半乳糖醛酸酶(polymethylgalacturonase,PMG)和β-1,4-内切葡聚糖酶(endo-β-1,4-glucanase,Cx),其他4种酶活性较低。在3种主要细胞壁降解酶中,Cx以1%羧甲基纤维素钠盐(CMC)作为底物的诱导效果较好,PG和PMG以1%柑橘果胶(pectin)作为底物的诱导效果较好。Cx的最佳反应温度是50℃,PG的最佳反应温度是50~60℃,PMG的最佳反应温度是60℃;Cx的最佳反应时间是50 min,PG和PMG的最佳反应时间是60 min;Cx和PG的最佳反应pH值是4.0,PMG的最佳反应pH值是8.0。     

紫花苜蓿下胚轴高频离体再生体系的建立

【目的】以北极星、阿尔刚金、皇后2000及国产紫花苜蓿4个苜蓿品种下胚轴为外植体,建立其稳定、高效的离体培养再生体系,为基因转化改良苜蓿性状奠定基础。【方法】研究了种子预处理方法、培养基、基因型以及蔗糖质量浓度对苜蓿下胚轴分化特性的影响。【结果】低温4℃预处理有利于提高苜蓿下胚轴愈伤组织的出愈率和绿苗分化率;其最佳诱导激素组合为"MS+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖"和"MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖";愈伤组织分化的最佳培养基为"MS+0.3 mg/L6-BA+3.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+50 g/L蔗糖";最佳蔗糖质量浓度为50 g/L;4个紫花苜蓿品种愈伤组织诱导率的差异不大,但分化特性有较大差异,分化率由高到低依次为北极星、阿尔刚金、皇后2000和国产紫花。【结论】不同的种子预处理方法对4种紫花苜蓿品种的分化率均有一定影响,3种处理中以4℃下浸泡2 h处理的分化率最高,与其他处理间的差异达显著水平(P<0.05)。不同激素组合是影响紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和分化率的主要原因,不同激素组合处理间的差异均达到显著水平(P<0.05),2,4-D与6-BA配合对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织的诱导效果较好,分化培养基中高质量浓度的NAA,不利于愈伤组织的分化;不同基因型对分化率有显著影响(P<0.05),而不同蔗糖质量浓度对分化率的影响不显著(P>0.05)。说明其对离体培养再生体系的影响作用与处理方法、培养基、基因型相比是次要的。     

长杆观赏甘蓝下胚轴离体再生研究

以长杆观赏甘蓝(Brassica oleracea var.longata)实生幼苗下胚轴作为外植体,在附加细胞分裂素6-BA的MS培养基上,通过愈伤组织发生途径获得了再生植株,在研究中发现不同6-BA浓度(1、2、4、6 mg/L)对长杆观赏甘蓝不定芽形成有显著影响,其中在6-BA 4 mg/L培养基上的再生能力最强,每个外植体可再生出25.3个不定芽.此外,还对长杆观赏甘蓝离体培养的愈伤组织冉分化过程进行了组织学观察.