黑麦特异性PCR反应体系的建立

[目的]建立黑麦特异性PCR反应优化体系。[方法]以普通小麦＂中国春＂、S165、黑麦、八倍体小黑麦、六倍体小黑麦为试验材料,研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对黑麦特异性PCR反应体系的影响。[结果]采用改良的CTAB DNA微量提取法可以得到高质量的基因组DNA,满足PCR反应模板的要求,黑麦特异PCR扩增反应体系为：在25μl反应体系中,10×缓冲液,1.5 mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTP,40 ng引物,40~60 ng模板DNA,1 UTaq酶。[结论]建立了适宜的黑麦特异PCR扩增反应体系,为小麦背景下黑麦外源种质的检测奠定了基础。     

黑麦特异性PCR反应体系的建立（摘要）

[目的]建立黑麦特异性PCR反应优化体系。[方法]以普通小麦＂中国春＂、S165、黑麦、八倍体小黑麦、六倍体小黑麦为试验材料,研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对黑麦特异性PCR反应体系的影响。[结果]采用改良的CTABDNA微量提取法可以得到高质量的基因组DNA,满足PCR反应模板的要求,黑麦特异PCR扩增反应体系为：在25μl反应体系中,10×缓冲液,1.5mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTP,40ng引物,40～60ng模板DNA,1UTaq酶。[结论]建立了适宜的黑麦特异PCR扩增反应体系,可为小麦背景下黑麦外源种质的检测奠定基础。     

啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系的建立与优化

为建立及优化啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系,以35个啤酒大麦品种(系)为试验材料,利用L16(44)正交试验设计研究DNA、Taq酶、dNTPs及引物浓度对啤酒大麦SSR扩增效果的影响。结果表明:模板DNA 2.0ng、10×PCR buffer 1.0μL、dNTPs 0.6μL、引物(0.25mmol·L-1)1.5μL、Taq酶(2.5U·μL-1)0.45μL的扩增效果最优,扩增结果重复性好且稳定。     

滑叶藤ISSR PCR反应体系建立及优化

 为建立和优化滑叶藤 ISSR PCR反应体系,运用正交试验和单因子试验分析模板DNA,TagDNA聚合酶,Primer,Mg2+和dNTPs 5个因子对滑叶藤ISSR PCR反应影响。结果表明了滑叶藤 ISSR PCR 25μL反应体系中5个因子最佳水平：DNA模板为84ng,TagDNA聚合酶为20u,Primer浓度为08mmol/L,dNTPs浓度为068mmol/L,M2+浓度为24mmol/L。该反应体系为利用ISSR分子标记技术研究铁线莲属植物提供了可靠方法。     

松毛虫mtDNA PCR反应体系优化

为了应用线粒体DNA研究松毛虫种群的遗传结构,本研究采用正交试验设计法L16(45)对影响松毛虫mtDNA PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验并对PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了单因素梯度比较优化。建立了松毛虫mtDNA PCR反应的最佳体系即在50μL体系中含模板150 ng、0.10μmol/L引物、0.4 mmol/L dNTP、1.0UTaq DNA聚合酶、2.5 mmol/LMg2+。同时通过PCR比较,确定最佳循环次数为35个循环,最佳退火温度为56℃,获得了松毛虫mtDNA PCR反应的最佳扩增程序。     

滩羊生长激素基因PCR—RFLPs反应体系的优化

以宁夏滩羊基因组DNA为模板，研究影响滩羊PCR—RFLPs扩增的因素，实验结果表明：特异性引物的浓度、Mg^ 浓度、模板DNA的完整性，浓度、纯度、TaqDNA聚合酶、变性温度、退火温度和循环次数等诸多因素对PCR—RFLPs扩增影响较大。为此我们对PCR—RFLPs的反应体系和反应程序进行了研究和浓度梯度对比试验，建立了滩羊GH基因PCR—RFLPs扩增的反应体系和操作技术。     

三七ISSR-PCR反应体系建立及优化

 为建立和优化三七 ISSR PCR反应体系,运用正交试验和单因子试验分析模板DNA,TaqDNA聚合酶、引物、Mg2+和dNTPs 5个因子对ISSR PCR反应影响。结果发现,三七 ISSR PCR 25μL反应体系中5个因子最佳水平：DNA模板为9.6ng,TaqDNA聚合酶为2.0u, Primer浓度为1.0mmol/L,dNTPs浓度为0.68mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L。研究结果为利用ISSR分子标记技术研究三七提供了理论支持。     

国槐SSR-PCR反应体系的建立与优化

利用单因素试验结合L₁₆（4⁵）正交试验设计对国槐SSR-PCR反应体系中的5个主要影响因素(Mg²⁺、引物、dNTPs、ExTaq酶、模板DNA用量)进行优化,确定最佳反应体系为（10μL）:25 mmol/L Mg²⁺1.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 0.2μL,10μmol/L上下游引物共0.5μL,5 U/μL ExTaq酶0.05μL,30 ng/μL模板DNA 1.0μL,10×PCR Buffer 1.0μL,ddH₂O 6.25μL。随机挑选4对SSR引物和8个国槐种质对试验确定的最佳反应体系进行验证,均能获得清晰、稳定的条带。该优化反应体系的建立为利用SSR标记对国槐种质资源进行深入研究和利用奠定了基础。     

蓝莓ISSR PCR反应体系建立与优化

以蓝莓为材料,通过正交试验设计和单因子优化试验对影响ISSR-PCR扩增结果的5个因素进行探讨,建立了适合蓝莓ISSR-PCR分析的反应体系和扩增程序,即在50μL反应总体积中,包含模板DNA20 ng、ISSR引物0.4μmol.L-1、dNTPs 0.15 mmol.L-1、Mg2+1.5 mmol.L-1、1.25 UTaqDNA聚合酶和10×buffer 5.0μL。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,47℃退火30 s,72℃延伸1 min,30个循环;72℃延伸7 min。该体系的建立为利用ISSR标记进行蓝莓遗传分析奠定了基础。     

油茶SSR-PCR反应体系建立与优化

油茶是我国特有的木本食用油料树种,本研究采用正交试验和单因素试验,建立并优化了油茶SSR-PCR反应体系。结果表明,油茶最适SSR-PCR反应体系为模板DNA(5~10 ng.μL-1)1.0μL,Mg2+(25 mmol.L-1)0.7μL,dNTP(10 mmol.L-1)0.15μL,正反向引物均为(10μmol.L-1)0.2μL,Taq DNA聚合酶(5 U.μL-1)0.1μL,10×PCR缓冲液1.0μL,HPLC水6.65μL,总体积10.0μL;同时证明了微卫星位点在山茶属(Camellia L.)植物的种间通用性。研究结果将为油茶遗传多样性研究、品种鉴定、亲缘关系分析以及重要农艺性状的QTL研究提供重要的理论依据和技术支持。     

天麻蜜环菌研究综述

综述了天麻蜜环菌的培养研究进展,分析了天麻与蜜环菌的共生关系,并探讨了蜜环菌对天麻产量的影响.     

乌天麻和红天麻在台州地区的开花习性及人工繁种试验

[目的]观察乌天麻和红天麻在台州当地的开花习性。[方法]以乌天麻和红天麻作为研究对象,考查2种天麻在台州地区进行有性繁殖期间的各项生物学特性,并开展了人工繁种试验。[结果]红天麻种子和红×乌杂交天麻种子在当地繁育效果显著优于乌天麻种子及乌×红杂交天麻种子,其中以红天麻种子的种麻产量最高,可达6.97 kg/m~2。[结论]该研究为在台州当地推广天麻有性繁殖技术提供参考。     

贵州省天麻产业技术专利的计量分析

为相关部门全面了解天麻产业开发现状,进一步提升贵州省科技创新对天麻产业发展的支撑能力,采用文献计量学方法,从专利申请的类型、趋势、区域、申请人、技术领域及主要机构等方面对全国及贵州省天麻产业技术专利申请状况进行分析。结果表明:1989—2016年贵州省天麻专利申请量为102件,占全国申请量的14.80%。贵州省天麻外观设计专利和实用新型专利申请量占比较高,较全国分别提高17.38%和2.11%,发明专利申请占比低,较全国降低19.49%。其中,贵州省天麻产业的发明专利申请以天麻资源及种植领域、天麻药品领域的申请量居多,分别为22件(39.92%)和13件(23.21%)。     

不同方法提取天麻DNA的研究

[目的]探索适合于天麻DNA的提取方法。[方法]采用3种方法提取天麻DNA,测定提取的天麻DNA纯度与产量,并对其扩增产物进行电泳分析。[结果]改进的CTAB法提取的天麻DNA产量和纯度均较高,扩增产物的电泳条带也较明显。[结论]改进的CTAB法较适合用于天麻DNA的提取。     

西藏仿野生种植天麻与野生天麻中天麻素含量的对比分析

[目的]分析西藏仿野生种植天麻Gastrodiaelata中天麻素含量,并将其与野生天麻中天麻素的含量进行对比。[方法]采用HPLC测定天麻素含量。[结果]西藏波密县仿野生种植天麻的天麻素介于0.41～2.28 g/kg,其平均含量为0.88 g/kg,比当地野生天麻高4倍。[结论]在生长的生态环境、生长年限、采挖季节相同或较接近情况下,仿野生种植天麻品质高于当地野生天麻。在波密县推广仿野生种植天麻技术切实可行,该项目有较强的经济价值。     

核桃林下套种天麻技术

从选林、选穴、选菌材、培养菌材、选天麻种、播种、管理、收获、轮作等方面总结了核桃林下套种天麻技术,以期促进种植户收益的增加。     

天麻的栽培及其临床应用

天麻是无根、叶的兰科植物，土中的块茎靠蜜环菌供给养料，其栽培关键是良种、优菌、凉爽、湿润。以活性成分1～10克／日的用量将其用于镇痛、抗惊厥（对照是甲基多巴，0．5～2．0克／日），临床研究表明：天麻能明目、降血压、缓心率、增加心输出量：天麻蜜环菌片可治疗神经衰弱、高血压、冠心病所致的头晕、头痛、心绞痛等症，有效率达80％以上。并指出繁育优质种源利于提高天麻产量并保持药性。     

分子标记技术在中药天麻研究中的应用

综述了几种常用的分子标记技术及分子标记技术在天麻遗传多态性分析、分类鉴定、种质资源亲缘关系研究、天麻抗真菌蛋白基因克隆等的应用现状,同时指出了存在的问题及新的研究方向。     

天麻不同种质过氧化物同工酶分析

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,对陕西汉王略阳中药科技有限公司天麻基地的3个天麻不同种质,同一生长期花茎中过氧化物酶(POD)同工酶酶谱进行比较研究及相似性系数数据处理分析.结果显示:不同天麻种质过氧化物同工酶活性不同,且各具有特征谱带,其中卵果天麻、绿秆天麻、红秆天麻的酶谱条带数分别为7条、8条和9条.从POD酶谱上分析,卵果天麻最原始,红秆天麻分化程度较大,是3种种质中最为进化的一种.研究表明过氧化物酶同工酶谱在天麻不同种质之间,有着很高的多态性,除少数共有的特征谱带外,各个种质之间存在较明显的谱带差异.     

贵州乌天麻的营养成分分析

为了解贵州乌天麻的食用营养价值和开发贵州特色食品资源,采用常规分析法分析贵州乌天麻的营养成分。结果表明：乌天麻的营养成分为蛋白质含量5．8～6．8 g／100g、粗纤维素含量12．3～17．6 g／100g、淀粉含量26．1～31．1 g／100g、天麻素含量0．21％～0．23％、粗脂肪含量1．9 g／100g,氨基酸总量4．05～4．14 g／100 g,其中,必须氨基酸占氨基酸总量的44．93％;乌天麻含有丰富的微量元素,其中 Ca 为389．00～401．00 mg／kg,Fe 为79．99～137．68 mg／kg,Zn 为20．01～21．31 mg／kg,乌天麻中 VC和 VB2含量较高,分别为3．84～9．97 g／100g 和0．14～0．18 mg／kg,结果显示贵州乌天麻有较高的营养价值。