2,4-D和BA对黑麦草不同外植体愈伤组织诱导与分化的影响

以多年生黑麦草的芽尖、根尖、下胚轴、成熟种子为外植体进行了愈伤组织诱导和分化的研究,结果表明:不同划割处理的成熟种子的愈伤组织诱导率不同,不同外植体的愈伤组织诱导率也不同,芽尖、根尖愈伤组织的诱导效果较差.纵向划割的成熟种子的愈伤组织诱导率及分化能力均优于下胚轴.2,4-D浓度在7 mg/L、BA浓度为0.1 mg/L时有利于成熟种子诱导产生愈伤组织,2,4-D浓度在5mg/L、BA浓度在0.05mg/L时有利于下胚轴诱导产生愈伤组织.继代培养时间对愈伤组织的分化率有很大影响,成熟种子和下胚轴在继代培养基上继代培养60d和80d时分化率最高,分别达到76%和35%,继代天数过长不利于愈伤组织的生长.     

两个高羊茅品种成熟种子再生体系的建立

以2个高羊茅品种(“Plantation”和“沪坪1号”)的成熟种子为外植体,在MS培养基上分别添加不同浓度的2种植物生长调节剂,探索其愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳激素配比及其相互间的影响,以建立简便高效的再生体系。结果表明,完整高羊茅种子最佳的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,诱导率为71%;而把成熟种子进行纵切后得到的半粒种子的较优的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 2.5 mg/L,诱导率占半粒种子外植体的60%,占完整种子(2个半粒种子)外植体的90%以上;在最优诱导培养基上产生的愈伤组织的最佳继代培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,其胚性愈伤诱导率为70%,而添加6-BA则抑制2,4-D对胚性愈伤组织的诱导;不同品种的最优的分化培养基不同——“Plantation”的最优分化培养基为MS+2,4-D 1 mg/L+6-BA 1 mg/L,而“沪坪1号”的最佳组合是MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,分化率分别达到50%和56%。生根培养基采用已报道的组合1/2MS+NAA 0.5 mg/L,生根率达100%。     

大针茅成熟胚愈伤组织诱导及分化的探索

为摸索大针茅成熟胚诱导、分化的最佳培养基,以大针茅的成熟胚为外植体,采用不同激素配比的培养基进行筛选.结果表明:在大针茅成熟胚胚性愈伤组织诱导和分化过程中,2,4-D,6-BA等激素的浓度对大针茅成熟胚的组织培养影响较大.大针茅愈伤组织诱导最佳培养基:培养基+2,4-D(2.0mg/L),平均出愈率为91.67%;继代培养基:N6+CH(500mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L),愈伤诱导率为80%;添加0.3mg/L ABA对非胚性愈伤组织转化为胚性愈伤组织有一定帮助,诱导率为23.3%.     

不同激素和外植体对柱花草愈伤组织诱导及体细胞胚的影响

以MS为基本培养基,以柱花草无菌苗的幼根、下胚轴、子叶、茎和真叶为材料,采用正交设计方法,研究不同外植体和激素对柱花草愈伤组织诱导和体细胞胚的影响。结果表明:外植体类型及2,4-D、KT、NAA、6-BA浓度对愈伤组织诱导率的影响均达极显著水平(P0.01),其中2,4-D浓度是最主要的影响因素,其次为外植体类型。下胚轴和真叶为柱花草愈伤组织诱导的理想外植体,愈伤诱导培养基的最优配方为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.01mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA。NAA、6-BA浓度对柱花草体细胞胚产生率的影响达极显著水平(P0.01),NAA浓度是主要影响因素,体细胞胚产生的最佳培养基配方为MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+2.0g/L CH。     

激素对白三叶愈伤组织形成的影响及体细胞胚的组织学观察

以白三叶3个品种瑞文德、铺地和海法的子叶和下胚轴为外植体,采用正交设计试验研究2,4-D、6-BA和KT三种生长调节剂的不同浓度水平对白三叶愈伤组织诱导及继代的影响,筛选最佳激素组合并进行体细胞胚的组织学观察.结果表明:同一品种同一时期不同外植体愈伤诱导的最佳激素组合不相同,不同品种间也不一致;瑞文德子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L;铺地子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4 D 5mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L;海法子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L.组织学观察表明,体细胞胚的发育经历球形胚、心形胚、鱼雷胚及子叶胚四个阶段后形成一个完整的体细胞胚.     

2,4-D和6-BA对多年生黑麦草愈伤组织诱导影响的研究

以多年生黑麦草成熟种子作为外植体,MS为培养基,在不同的2,4-D和6-BA浓度下进行愈伤组织的诱导。实验表明:在2,4-D浓度为5mg/L,6-BA浓度为0.05mg/L时,多年生黑麦草各品种愈伤组织的质量和诱导率最高,在相同浓度的2,4-D或6-BA作用下,多年生黑麦草不同品种间愈伤组织诱导率存在显著差异。     

蒙农杂种冰草成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生

以蒙农杂种冰草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的诱导进行植株再生,结果表明:在附加甘露醇(0.2mol/L)和2,4-D(2.0mg/L)的MS培养基中,冰草成熟胚可诱导产生愈伤组织,诱导率为87.6%,但质量较差;将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA的继代培养基中继代改造,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤;将筛选改良的愈伤组织置于分化培养基MS+ZT(3.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)中,分化率为82%;分化小苗在1/2MS培养基上可生根并得到完整植株.本研究还建立了一套有效的以成熟胚为外植体的蒙农杂种冰草组织培养再生体系.     

野生结缕草成熟胚愈伤组织诱导及再生体系的研究

以野生结缕草(Zoysia japonica)的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。试验结果表明,不同的预处理方法对愈伤组织的诱导有较大的影响,经研钵研磨去除种子颖壳,30%NaOH浸泡1min,流水冲洗30 min处理的成熟胚在MS+2,4-D(3 mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)为最佳,愈伤组织诱导率达82.67%。将愈伤组织在2,4-D(2 mg/L)和6-BA(0.2~0.5 mg/L)的继代培养基中继代1~2次,可明显改善愈伤组织状态,增加胚性愈伤数。筛选继代后的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+KT(1 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)中,分化率达86%。分化后的簇状植株移栽成活率达100%。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH 2.0mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO 2.0 mg/L 6-BA 0.5mg/L NAA;成苗培养基为1/2 MS 1% 蔗糖 0.7%琼脂.     

海滨雀稗再生体系的建立

以海滨雀稗(Paspalum vaginatum cv.Sea spray)的成熟种子为外植体,运用正交试验设计,在MS基础培养基上添加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA、KT、CuSO4、AHC等外源物质,分析其对愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化的影响,建立海滨雀稗高频再生体系,为基因工程育种奠定基础.试验结果表明,在MS培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D和0.5g/L AHC 能提高种子的发芽率至97.50％;最佳胚性愈伤诱导培养基为:MS +2,4-D 3.0mg/L+CuSO4 15.0 mg/L+AHC 1.0g/L,其胚性出愈率为66.88％;最佳分化培养基为:MS+6-BA 8.0mg/L+KT 0.05 mg/L+CuSO4 10.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,其分化率为95.00％.     

正交设计在多年生黑麦草组织培养中的应用

以多年生黑麦草的成熟种子为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行了优化筛选。结果表明,愈伤组织诱导的最佳因素组合:2,4-D(7mg/L) 6-BA(0.1mg/L) NAA(0.3mg/L) CH(0.1g/L)(特拉华);2,4-D(7mg/L) 6-BA(0)(尤文图斯、托亚)。特拉华愈伤组织分化的最佳因素组合:6-BA(0.1mg/L) NAA(0.8mg/L) ZT(0.1mg/L) Cu2 (8.96mg/L);6-BA为0.2mg/L时,托亚的愈伤组织分化率最高。比较三个品种的出愈率和分化率:特拉华最高,托亚次之,尤文图斯最低。     

小麦成熟胚离体培养及植株再生技术优化

本实验利用冬小麦品种周麦27成熟胚进行了愈伤组织诱导和植株再生技术的优化,以提高小麦成熟胚离体再生频率,为以成熟胚进行遗传转化奠定基础。探讨了外植体不同接种方法、Dicamba浓度和细胞分裂素种类、转分化时间和愈伤组织干燥处理等因素对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明, 1)小麦成熟胚十字形切割法接种愈伤组织分化率较高,达到66.7%,分别是刮胚法和整胚接种的2.1和4.3倍;2)附加2,4-D 和Dicamba均可以高频率诱导成熟胚愈伤组织的形成,但Dicamba诱导形成的愈伤组织分化率高于2,4-D的达4倍之多,在Dicamba浓度为2.0~4.0 mg/L时愈伤组织诱导和分化效果较好;3)愈伤组织在附加2.0 mg/L 6-BA的分化培养基上分化率最高为45.8%,其次为在不含激素或含KT 2.0 mg/L时分化率分别达到38.5%和37.0%,而在附加TDZ和ZT时分化率较低;4)成熟胚外植体在诱导培养2~3周后进行分化培养,绿苗分化率最高;5)愈伤组织分化前干燥处理6 h愈伤组织分化率略有提高,但与未干燥处理的相比差异不显著,而干燥12 h后分化率却明显降低。     

长穗偃麦草与中间偃麦草杂种成熟胚离体培养与再生体系的建立

以长穗偃麦草(Elytrigia elongata)和中间偃麦草杂交种(Elytrigia hybrid;E. elongata×E. intermedia)的成熟胚为外植体,进行组培再生体系的研究。结果表明:诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+CH(500 mg/L)+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.2 mg/L),其诱导率为73%,适宜分化培养基为MS+6-BA(4.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L),分化率最高,为37.8%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体偃麦草杂种组织培养再生体系。     

应用正交试验法优化‘新农1号’狗牙根再生体系

以‘新农1号’狗牙根(Cynodon dactylon(L.)Pers.)成熟颖果为材料,通过正交法探讨激素、外源添加物等对狗牙根愈伤诱导、继代及分化的影响,优化‘新农1号’狗牙根再生体系。结果表明:各因子对‘新农1号’狗牙根愈伤诱导的影响程度为2,4-D6-BA脯氨酸;优化诱导培养基为添加2,4-D(2.0 mg·L~(-1))+6-BA(0.01mg·L~(-1))+脯氨酸(200mg·L~(-1))的MS培养基,此时愈伤诱导率达69.5%;对继代增殖而言,各因子对胚性愈伤诱导率、愈伤增殖率、褐化率的影响程度不同,对胚性愈伤诱导率的影响程度为2,4-DABA6-BA,对愈伤增殖率的影响程度为6-BAABA2,4-D,对褐化率的影响程度为2,4-D6-BAABA。综合3个指标结果认为,‘新农1号’狗牙根愈伤继代的优化培养基为2,4-D(2.0mg·L~(-1))+6-BA(0.20 mg·L~(-1))+ABA(2.0 mg·L~(-1))的MS培养基,其胚性愈伤率和愈伤增殖率分别可达71.67%和61.67%,且褐化率较低;对分化而言,优化的分化培养基为MS+6-BA(1.0mg·L~(-1)),小植株形成强度可达49.44%。     

不同浓度激素对狗牙根愈伤组织的诱导与分化的影响

以狗牙根成熟种子为外植体,以N6为基本培养基,研究不同浓度2,4 D和6 BA组合对狗牙根愈伤组织诱导与分化的影响。结果表明:(1)1mg/L的2,4 D对愈伤组织诱导有很大的促进作用;(2)种胚愈伤组织的诱导宜采用N6+1mg/L2,4 D+0.7mg/L6 BA的培养基;(3)愈伤组织的分化缓慢,1mg/L2,4 D+0.7mg/L6 BA培养基所产生的愈伤组织分化情况较好。     

扁蓿豆愈伤组织诱导和分化条件的研究

以扁蓿豆3个品系的下胚轴和子叶为外植体,研究不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基对愈伤组织分化的影响.结果表明:下胚轴的愈伤组织诱导率普遍高于子叶;品系B1、B2最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA,品系B3最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.7mg/L 6-BA;适宜分化的培养基均为MS+1mg/L KT+1mg/L 6-BA.     

几种匍匐翦股颖品种植株再生的研究

以匍匐翦股颖Agrostis stolonifera潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体,进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明：在MS培养基上,以不同浓度2,4 D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时,普特的愈伤组织诱导率均高于潘娜1号和海滨。2 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合,3 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45.2%、76.5%和87.0%;MSO(MS培养基的大量、微量元素和铁盐+B5培养基的有机元素)为最适合的分化培养基,分化率分别为50.0%、59.0%和57.6%。1/2 MS +1.0 mg/L IBA为生根培养基。     

多年生黑麦草愈伤组织诱导与芽分化的研究

对多年生黑麦草Lolium perenne的2个品种特拉华(Delaware)与尤文图斯(Juventus)进行了愈伤组织诱导以及芽分化的研究.结果表明,在种子和成熟胚2种外植体中,成熟胚的出愈率高,是较好的愈伤诱导材料.愈伤诱导培养基采用MS基本培养基,附加激素4 mg/L 2,4-D 0.025 mg/L 6-BA.特拉华和尤文图斯较适宜的芽分化培养基是MS基本培养基分别附加0.4 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA和0.2 mg/L ZT 0.5 mg/L NAA.特拉华在愈伤诱导和芽分化两方面均优于尤文图斯.     

羊茅种子愈伤组织诱导及再生体系的建立

以羊茅(Festuca ovina)成熟种子为外植体材料,在改良的MS(MSM)培养基上分别添加不同质量浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、激动素(KT)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、奈乙酸(NAA),探讨不同的激素组合对愈伤组织诱导、植株分化以及植株生根的影响,以建立羊茅无性系的高效再生体系。结果表明,羊茅在MSM+6.0 mg/L 2,4-D+0.02 mg/L KT的培养基中愈伤组织诱导生长最好;在MSM+2.0 mg/L6-BA+0.6 mg/L NAA培养基上植株分化率最高,达82%;在1/2 MSM+0.6 mg/L NAA培养基上生根率达100%。