野生蛹虫草的分离与高产菌株的筛选

人工栽培蛹虫草时，往往遇到出草率下降的情况。着重阐述野生蛹虫草菌株的分离和高产菌株的筛选。     

发酵蛹虫草产品的研制

以液体发酵蛹虫草分离得到的发酵液和菌丝体为原料,添加辅料调味,根据其不同的理化性质分别开发蛹虫草产品-虫草饮料、虫草酱,并提出工艺流程和操作要点.该产品营养丰富、成本低廉、口感好、方便食用,符合相关卫生标准.蛹虫草液体发酵技术成熟,发酵周期短,产品制作工艺简单,易于掌握,有较大的市场潜力和发展前景.     

蛹虫草固体发酵生产虫草素的条件优化

用直径6 cm,高10 cm聚乙烯培养罐固体发酵蛹虫草(Cordyceps militaris),以固体发酵产物中虫草素含量为指标,从16个蛹虫草菌株中筛选出虫草素含量最高的菌株,考察固体发酵该菌株的培养基组成、培养时间、培养基装量、料液比、培养温度、接种量和添加物对虫草素含量的影响,得到了有利于蛹虫草固体发酵产虫草素的培养条件:培养罐装20 g小麦,按小麦干重6％的量分别加入玉米粉和黄豆粉,按料液比1∶1.4(w∶v,以小麦干重为基准)加入营养液(g/L:2.0 K2HPO4·3H2O,0.5 MgSO4·7H2O,16甘氨酸),培养温度为26℃,时间46 d,接种量10％.     

蛹虫草不同栽培菌株产虫草素及腺苷差异性研究

目的：测定不同栽培菌株蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据。方法：采用高效液相色谱法测定11个栽培菌株人工蛹虫草样品中虫草素和腺苷的含量。结果：所测定的不同栽培菌株人工蛹虫草的腺苷含量为0.1%-0.17%,虫草素含量为0.06%-0.39%,表明蛹虫草不同栽培菌株的虫草素含量变化较大,腺苷含量则相对稳定。     

蛹虫草菌丝生长条件的试验

对蛹虫草菌丝生长的环境因子进行研究．结果表明蛹虫草菌丝生长温度为1～30℃，最适温度为20℃，菌丝生长的pH范围是4．5～11．0，最适pH为7．0，菌丝生长阶段不需要光照。     

蛹虫草白化菌株抗氧化活性

研究蛹虫草白化菌株AB6的子实体水提液和50%乙醇提取液的体外抗氧化活性,结果表明,AB6子实体水提液和50%醇提液对有机自由基DPPH.的清除作用及对亚油酸自氧化的抑制作用都强于出发菌株B6。AB6的水提液对羟自由基.OH具有很强的清除能力,但其醇提液的清除作用低于B6。     

蛹虫草菌种与培养方法相互筛选技术和应用效果

阐述东莞生物技术研究所开展蛹虫草人工培养技术研究过程中,采用的菌种与培养方法相互筛选的技术方案,即收集大量的菌株,在菌种繁殖和发酵培养技术研究、菌丝有效活性成分检测、子实体栽培试验和子实体有效成分检测等各个技术环节中,分别对各备选菌种和培养方法进行相互筛选。介绍该技术方案在每个环节中的应用效果,并对其优缺点进行探讨。     

蛹虫草、白化蛹虫草菌丝硒耐受性比较研究

目的:研究亚硒酸钠对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝生长影响。方法:CM-1518、白化蛹虫草CM-Y1518为试验蛹虫草菌株,研究亚硒酸钠(0～700 mg/L)对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝长势、菌丝平均长速及菌落形态影响。结果:蛹虫草菌丝硒耐受性高于白化蛹虫草,当培养基中亚硒酸钠质量浓度不超过650 mg/L时,蛹虫草均可生长,硒耐受极值为700 mg/L;当亚硒酸钠质量浓度不超过200 mg/L时,白化蛹虫草均可生长,硒耐受极值为250 mg/L。     

RFLP在鳞翅目蛹虫草菌鉴别中的应用

本文应用RFLP技术鉴别两未知菌株S1001和S1002是否系鳞翅目蛹虫草菌(Cordyceps milicaris)。试验以ITSl,TTS4为引物,PCR扩增rDNA的5.8S+ITS区段,扩增产物纯化后用DNA限制性内切酶酶切,获得DNA的RFLP图谱,并同ATCC模式菌株的RFLP图谱相比较。结果表明:三个作为对照的ATC菌株具相同的RFLP图谱,而两待鉴定菌株之间存在差异,且明显不同于ATCC模式菌株,从而证明,两待鉴菌株与ATCC菌株之间在rDNA区域具有明显的结构差异,故推断两待鉴定菌株不隶属于鳞翅目蛹虫草菌。     

人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸成分测试分析

通过对人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸的测试分析,结果表明：在野生蛹虫草中含有的１７种氨基酸,在人工培育蛹虫草中几乎都含有,并且在以蚕蛹为培养基质生长的蛹虫草中氨基酸总量及人体必需的八种氨基酸总量均高于野生型及其它人工培育型的蛹虫草。     

蛹虫草菌株无性世代的生物学特性比较

4个不同的蛹虫草菌株在PDA和四种合成培养基上生长,结果显示,在PDA培养基上菌丝的生长势最好,4个菌株在PDA培养基上的生长速度以及产色素状况有显著差异.根据蛹虫草的菌落形态和凹面玻片培养法观察到的菌丝形态、产抱特点,初步得到确认无性世代的依据.     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

基于响应面的蛹虫草菌质固体发酵工艺条件优化

优化蛹虫草固体发酵菌质工艺以缩短发酵周期,提高有效成分含量,有效节约成本。通过单因素筛选和响应面优化法对碳源、氮源、料液比、小麦装料量、接种量、培养时间和腺苷浓度等培养条件进行优化。结果显示,蛹虫草固体发酵菌质最佳培养方案的小麦装料量为15 g,料液比为1.0∶1.3,接种量为2 mL,培养时间为17 d,营养液碳源为可溶性淀粉、氮源为黄豆粉,腺苷的质量浓度为76 g·L^-1。此条件下虫草素含量为3.718mg·g^-1,与初始配方相比,含量提高了4.47倍。工艺优化后的蛹虫草菌质固体发酵周期短,有效成分含量提高,研究结果为后期发酵菌质的开发利用奠定了基础。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

蛹虫草菌丝体深层发酵培养加工虫草酸奶研究

采用液体深层培养法,将活化的蛹虫草斜面菌种,经摇瓶培养、发酵罐扩大培养,得到含有蛹虫草有效成分的菌丝体,通过调配、灭菌、接种乳酸菌、发酵等工艺生产蛹虫草酸奶。本工艺比常规蛹虫苹酸奶加工方法具有明显的优势。     

继代培养对蛹虫草菌丝生长速度及酯酶同工酶的影响

以蛹虫草菌株为试材,通过垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳和菌丝生长速度测定,对不同代次蛹虫草菌丝生长速度和菌株酯酶同工酶表现型进行比较分析,旨在寻找蛹虫草菌种退化机理。结果表明:不同代次蛹虫草的菌丝生长速度差异不显著,而酯酶同工酶酶谱发生较大变异。9个菌株共有3条迁移率不同的条带,分别为0.63、0.65和0.67,其中F1、F3、F4和F5代菌株出现第2、3条酶带,迁移率分别为0.65和0.67,而F2、F6、F7、F8、F9代菌株发生变异,迁移率为0.67的条带消失,菌株酶谱条带中产生了迁移率为0.63的新条带。     

不同碳源对蛹虫草菌丝生长的影响

研究了不同碳源对蛹虫草菌丝生长的影响,结果是以蔗糖为培养基的碳源最为合适,表现为菌丝生长速度快,气生菌丝量中等,密度适中,边缘整齐。在液体培养时,以可溶性淀粉为碳源培养蛹虫草菌丝可获得最大的菌丝量。     

提高蛹虫草中的虫草素产量的研究进展

虫草素是一种具有广泛生物活性和药理作用的核苷类物质,其药用价值及生物活性的多样性已众所周知。现从菌种选育、培养条件优化及提取工艺3方面综述了提高蛹虫草中虫草素产量的措施,以期对今后的研究方向进行展望。     

蛹虫草抗肿瘤和免疫活性部位的体外筛选

为筛选蛹虫草(Cordyceps militaris)子实体的抗肿瘤和免疫活性部位,采用系统溶剂法,分别用氯仿、乙酸乙酯、95%的无水乙醇、沸水(100℃)、3%草酸铵和5%NaOH依次提取并计算提取物得率,且测定了沸水提取物、草酸铵提取物、NaOH提取物1和2的多糖含量.采用体外抗肿瘤模型测定了氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制活性;采用体外免疫增殖试验模型测定了沸水提取物、草酸铵提取物和NaOH提取物1和2的免疫活性.结果表明,乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制效果最好,当乙酸乙酯提取物浓度为200μg/mL时,抑制率分别为(85.2±2.5)%和(67.7±6.3)%;体外免疫活性测定结果表明,草酸铵提取物刺激小鼠脾淋巴细胞后的增殖活性最高,当浓度为500μg/mL时细胞增殖率为(312.0±7.2)%,与阳性对照PHA的细胞增殖率(329.3±3.0)%相当.     

蛹虫草液体深层发酵的研究

以蛹虫草菌丝体生物量为指标,运用单因素对比试验和正交实验,对蛹虫草液体培养基的碳、氮营养源以及最佳配方和培养条件进行了优化研究。结果表明:筛选出蛹虫草液体培养基最佳碳源为蔗糖,其次为麦芽糖;最佳氮源为酵母膏,其次为蛋白胨。筛选出蛹虫草液体培养基适宜配方为:蔗糖3%、酵母膏3%、KH2PO40.1%、MgSO40.15%;液体培养适宜条件的温度为24℃,pH 5.5,接种量为15%,摇瓶转速为140 r/min,发酵罐通气量为1∶1.2~1∶1.6V/(V.min)。