猪支原体肺炎活疫苗（168株）肺内免疫机制研究

为研究猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫机制,通过肺内接种免疫5 ～ 10日龄仔猪,并于免疫后不同时间点检测血清中IgG抗体效价、全血中淋巴细胞转化效率、呼吸道局部的IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度,于免疫后28 d剖杀采集呼吸道上皮组织,通过扫描电镜法与原位杂交检测法观察疫苗株在呼吸道的存留以及对纤毛的影响情况.结果发现,免疫后猪血液中淋巴细胞转化增强1.52～2.01倍,支气管表面IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度持续增加,但血清抗体一直未检测到.扫描电镜与原位杂交检测结果发现疫苗株能有效地黏附在支气管纤毛上皮细胞上,但对纤毛的影响较小.由此表明,猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过肺内免疫可有效激活全身细胞免疫及呼吸道局部的黏膜免疫与细胞免疫反应,而且还可以通过黏附支气管纤毛上皮细胞产生占位效应而对上皮组织不产生损伤.     

猪支原体肺炎(168株)活疫苗的作用机理与应用

猪支原体肺炎（168株）活疫苗是由江苏省农业科学院兽医研究所和南京天邦生物科技有限公司共同研制申报．经农业部兽用生物制品规程委员会审查通过的国家二类新兽药。现笔者将其作用机理与应用简述如下。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的安全性研究

用健康易感仔猪进行同群感染试验和连续五代返强试验对猪肺炎支原体活疫苗(168株)进行安全性试验,同时也进行了该活疫苗单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗免疫商品猪的临床试验。结果发现,猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫猪后,免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续五代返强试验,试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化,说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应。这说明受试批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有良好的安全性。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫效力研究

研究使用健康易感仔猪对3批猪支原体肺炎活疫苗(168株)分别进行了免疫效力试验、免疫期试验、临床效力试验、同类制品的免疫效力比较试验和免疫期比较试验,以及5批疫苗免疫商品猪的临床试验。结果表明：猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫仔猪60天后,免疫组有80%以上的保护率,免疫后7个月,试验组仍有50%以上的保护率;同类制品免疫效力和免疫期比较试验结果表明两种猪支原体活疫苗差异不明显。临床观察和病理剖检结果表明免疫保护率在85%以上。以上结果都说明猪支原体肺炎活疫苗（168株）具有很好的免疫效力。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术研究

肺炎支原体的培养和保存条件非常苛刻,是疫苗规模化生产的工艺难题。本文针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术进行研究。通过培养试验筛选四种培养基配方表明该疫苗株在低血清改良培养基中生长良好;优化发酵培养工艺,使其在发酵罐培养60～70 h的峰值可达到1010CCU/mL;设计筛选该疫苗耐热保护剂和冻干工艺,37℃下保存10 d的耐老化试验结果显示,下降滴度小于100.5CCU/mL。本研究为提供高效、安全和稳定的猪肺炎支原体疫苗产品奠定基础。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产关键(环节)质量控制

文章针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产用菌种的扩繁与鉴定、原辅材料、生产流程的优化、成品检验4个环节进行阐述,并根据实际情况提出内控标准,关键指标高于国家标准10倍,实现对猪支原体肺炎活疫苗(168株)的批量生产,使产品的稳定性及可靠性得到大幅度提升。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)临床试验

本试验用中间试制生产的猪支原体肺炎活疫苗(168株),在河南3个猪场进行了临床试验,先后免疫猪7000多头,观察发病率和生产指标。屠宰场跟踪随机抽样,观察屠宰后肺部病变,结果表明:猪支原体肺炎发病率减少,肺部病变减轻,而生产指标有明显提高,饲料报酬率提高。这表明猪支原体活疫苗对猪安全有效,能有效预防猪喘气病。     

国家二类新兽药——狐狸脑炎活疫苗

狐狸脑炎活疫苗是由中国农业科学院特产研究所研究开发，用于预防狐狸脑炎的新型疫苗，2009年4月14日，被农业部批准为国家二类新兽药，证书编号为（2009）新兽药证字11号。     

恩施山区猪支原体肺炎活疫苗防控试验观察

为了有效防控恩施山区猪支原体肺炎,采用猪支原体肺炎活疫苗对5~10日龄猪进行肺内注射免疫,同时设立药物治疗对照组。试验结果表明,采用支原体肺炎活疫苗能有效控制该病的流行与发生,达到免疫无疫。     

江苏研制出猪支原体肺炎疫苗

记者日前从江苏省农科院获悉,由该院兽医所和南京某生物科技有限公司研制成功的猪支原体活疫苗（168株1成果,获得了2010／2011年度“神农中华农业科技奖”科研类一等奖。该成果打破了国外进口猪支原体肺炎疫苗在中国市场的垄断,成为目前国际上唯～一个大面积推广使用的具有较高免疫保护率的猪支原体活疫苗。     

猪支原体肺炎活疫苗（168株）气溶胶免疫后呼吸道sIgA分泌及抗原存留规律

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,Mhp)引起的猪的一种慢性呼吸道疾病,严重影响养猪业发展,活疫苗气溶胶免疫是防治该病的新措施。为研究猪肺炎支原体活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,疫苗株在免疫猪肺内的占位存留规律,选用3周龄不吃初乳猪27头,随机分为3组,G1气溶胶免疫组12头,G2肺内免疫组12头,同时设立阴性对照3头。分别于免疫后第2 h、7 d、14 d及28 d进行鼻拭子Mhp sIgA检测以及血清抗体检测。另外在上述时间点分别宰杀G1和G2组各3头,对照组在实验组免疫后第28 d宰杀,采集肺泡灌洗液,分别进行Mhp sIgA检测及Mhp疫苗株含量检测。结果显示:(1)所有试验猪至实验结束,Mhp血清抗体未出现转阳现象;(2)鼻拭子sIgA水平G1组在免疫后第14 d与对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05);G2组在免疫后第7 d和14 d与相应的对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(3)G1组肺泡灌洗液中的 sIgA在免疫后14 d部分转阳(阳性率33.33%),28 d全部转阳(阳性率100%);G2组在免疫14 d时已全部转阳(阳性率100%),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(4)气溶胶免疫组肺泡灌洗液内Mhp疫苗株浓度在免疫后第2 h、7 d、14 d和28 d分别是相应肺内免疫组的0.37倍、1.01倍、0.88倍以及0.52倍。猪支原体肺炎活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,和肺内免疫一样可以诱导免疫猪的局部黏膜免疫以及具有同等的占位效应,且经气溶胶免疫的疫苗株在免疫仔猪体内的增殖水平可能与其诱导的黏膜免疫水平相关。     

猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验

简化免疫程序,方便养猪生产,是众多养猪人的需求,通过设计猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗相互影响试验、混合使用对于伪狂犬免疫的影响试验、混合使用对于猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)的免疫影响试验、猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与灭活疫苗临床效果对比试验等4个试验,试验结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗是可以混合喷鼻使用的;猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)比猪支原体肺炎灭活疫苗产品的临床应用效果更明显。对于简化免疫程序推进,提供有力的数据支持。     

猪支原体肺炎活疫苗经肌肉注射的免疫效果评价

猪支原体肺炎活疫苗(168株)是一种以肺内注射途径免疫的弱毒活疫苗。为了拓展猪支原体肺炎活疫苗的免疫途径,评估猪支原体肺炎活疫苗(168株)配合佐剂以肌肉注射方式免疫猪群后的攻毒保护效果,选取20头7日龄猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)阴性仔猪,将其随机平均分成4组,分别为健康对照组、感染对照组、肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组。在免疫后采集血样并检测其中的Mhp IgG抗体,在首次免疫后42 d人工感染Mhp组织毒(JS株),攻毒28 d后评估肺脏的病变情况并测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的Mhp含量。结果显示：免疫后肌肉注射免疫组动物产生了明显的Mhp特异性血清IgG抗体,而肺内注射免疫组动物在攻毒前未见明显的血清抗体;肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组的攻毒保护率分别平均为88.89%和75.93%,且组间无显著性差异;感染对照组的BALF中Mhp单位含量极显著高于肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组(P<0.01),2个免疫组间无显著性差异。结果表明：猪支原体活疫苗配合佐剂后经肌肉注射免疫可产生较好的免疫攻毒保护效果。本研究为猪支原体肺炎活...     

几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究

为增强现有猪支原体肺炎活疫苗的免疫刺激能力以实现肌肉注射免疫,向现有活疫苗中添加几种不同佐剂,考察其经肌肉免疫后机体的免疫应答情况。结果表明,免疫刺激复合物基质佐剂和左旋咪唑+壳聚糖混合佐剂能有效激发细胞免疫应答和体液免疫应答;左旋咪唑+黄芪多糖混合佐剂能增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫无作用;皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果。本试验结果为肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗的开发奠定了数据基础。     

国家一类新兽药兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗，由江苏省农科院兽医研究所和南京天邦生物科技有限公司研制申报，经农业部兽用生物制品规程委员会审查通过，2005年11月16日被批准为国家一类新兽药，并颁发新兽药注册证书【证号：（2005）新兽药证字36号】。     

国家三类兽用新生物制品 鸡新城疫低毒力活疫苗（ZM10株）

我国普遍采取疫苗接种控制鸡新城疫．且取得了一定的效果，但仍有免疫失效而爆发鸡新城疫的报道.针对这个问题．世界各国均投入大量的精力开发最佳的疫苗和免疫程序．1955年国际兽疫局（OIE）推荐使用的鸡新城疫弱毒疫苗为缓发型（Lentogenic strain）HB1株（Hitchner,1948）．La Sota株（Bandette，1949）和F株（Aspfin，1952），各国（包括中国）应用最广泛的是HB1和La Sota株。然而在过去的40多年里．这些活苗配合灭活油乳剂苗单独或联合应用．     

猪肺炎支原体 MY-99株的致病性

将猪肺炎支原体MY-99株人工培养F100株经鼻腔接种于健康成华×大约克杂交猪,2周后60%的猪出现气喘,个别猪伴有轻微咳嗽;病理切片可见到支气管周围多量淋巴样细胞浸润、肺泡壁增厚等典型的间质性肺炎病变.试验猪平均日增重比对照猪显著降低,接种后0～14 d期间降低了31.05%(P<0.01),15～28 d期间降低了42.01%(P<0.01),29～42 d期间降低了0.1%(P>0.05).试验猪血清中的猪肺炎支原体抗体水平在2周后最高(1∶24.2),4周后降至1∶23.9,6周后最低(1∶22.5),显示猪肺炎支原体MY-99株诱发了急性猪地方流行性肺炎,同时从试验猪肺脏中分离出了猪肺炎支原体.超微切片显示,其菌体大小为0.33～0.48 μm,并缺乏细胞壁;革兰氏染色为阴性类球形菌体,在压力下可以通过0.45 μm的细菌滤膜,菌落呈现煎蛋状.     

皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价

为提高猪支原体肺炎活疫苗的滴鼻免疫效果,以猪支原体肺炎(168株)活疫苗为抗原,以QS21为免疫佐剂混合后滴鼻免疫小鼠,ELISA 法检测免疫效果,包括血清和支气管肺泡灌洗液中抗原特异性抗体水平,并测定了Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的分泌情况。结果表明,QS21能激活黏膜和全身性的体液免疫,显著升高血清和支气管肺泡灌洗液中IgG,IgG1、IgG2a抗体含量,并能提高支气管肺泡灌洗液中黏膜免疫抗体sIgA的含量。QS21还能显著增加支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ和IL-17的分泌,激活Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答。以上结果表明QS21能全面激活免疫系统,具有开发为猪支原体肺炎活疫苗黏膜免疫佐剂的应用前景。     

猪肺炎支原体168株P97基因的克隆与表达

根据GenBank中猪肺炎支原体P97基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体168弱毒株特异性黏附因子P97抗原决定簇基因部分序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pET-32a,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTG诱导,通过SDS-PAGE进行鉴定,Western blot证明所表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体抗原性,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件。     

猪支原体肺炎及疫苗研究进展

文章对猪支原体肺炎的危害、致病机理、诊断和防控技术进行了综述,并对猪支原体肺炎疫苗进行了分类及分析,为该病的防控及疫苗的研究开发提供参考。