牛卵形巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用

为建立牛卵形巴贝斯虫(B.ovata)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的B.ovata CCTη基因序列设计引物,建立了PCR检测方法。对该方法的最佳反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的PCR方法扩增B.ovata CCTη基因片段大小为1 008 bp,与参考株序列同源性为100%。该方法对牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、牛瑟氏泰勒虫基因组DNA扩增结果均为阴性。最低可以检测样品中34个拷贝的DNA。通过对49份临床样本的检测,该方法比姬姆萨染色镜检阳性率高8.2%。本实验为B.ovata的诊断提供了一种特异、敏感的检测技术。     

牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

根据GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列设计合成2对巢式PCR引物,建立牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法,对该方法的最佳反应条件进行了筛选,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR方法外引物扩增牛卵形巴贝斯虫基因组片段的长度为1 008bp,内引物为537bp;该方法扩增不出牛瑟氏泰勒虫、弓形虫、犬新孢子虫基因组DNA;最低检测DNA含量为16fg;通过对46份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR阳性检出率高8.7%。本试验为牛卵形巴贝斯虫病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。     

驽巴贝斯虫病PCR检测方法的建立和应用

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6个巴贝斯虫株中,仅驽巴贝斯虫株能扩增出特异性片段,马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫的扩增结果均为阴性。对45份马属动物血样进行检测,本研究建立的PCR方法测得驽巴贝斯虫病的阳性率为26.67%(12/45),与显微镜检测方法进行了比较,结果显示PCR检测方法可显著提高驽巴贝斯虫的检出率。     

马驽巴贝斯虫PCR和qPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫是一种寄生于马属动物的血液原虫,给马产业造成巨大的经济损失。本研究旨在建立两种高效、可靠的PCR诊断技术,为进一步提高口岸检疫工作效率奠定基础。根据马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计了一对特异性引物和荧光探针,建立了PCR和qPCR检测方法,测试了两种方法的特异性、灵敏性、稳定性。结果显示：建立的两种方法均具有良好的特异性;PCR方法的最低检出限为4.04×10² copies/μL,qPCR方法的最低检出限为4.04×10¹ copies/μL;对33份马血样品进行检测,结果qPCR检出的阳性样品数为23份(69.7%),而PCR检出的阳性样品数为9份(27.3%)。表明两种方法均可成功用于马驽巴贝斯虫的检验,但是荧光定量PCR方法的灵敏度明显优于PCR方法。     

驽巴贝斯虫病巢式PCR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫（Babesia caballi）rap—1基因序列设计内外两对引物，从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA，采取两次扩增的方法，获得222bp基因片段，经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测，准确率为100％。     

双芽巴贝斯虫TaqMan实时荧光PCR检测方法的建立

根据双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)18SrRNA基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测双芽巴贝斯虫的实时荧光PCR方法。该方法灵敏度高,最小检出量为1.1×101 copies/μL的标准质粒,比常规PCR灵敏1 000倍;重复性好,组内和组间重复性试验的变异系数分别为0.21%¹.14%和0.31%1.14%和0.31%¹.50%,均小于2%;特异性强,对牛常见的其他两种血液原虫和健康血液无交叉反应。用建立的实时荧光PCR和常规PCR分别对30份临床样品进行检测,实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为30%和16.7%。结果表明,本研究建立的荧光TaqMan实时荧光PCR方法可以灵敏、准确、快速检测双芽巴贝斯虫感染,将为蜱传牛梨形虫病的流行病学调查和防制提供新的方法。     

一起牛双芽巴贝斯虫病的诊治

牛巴贝斯虫病是由巴贝斯虫属的原虫寄生于牛的血细胞和网状内皮系统引起的寄生虫病。临床主要特征为高热、贫血、黄疸和血红蛋白尿。在我国,引起牛巴贝斯虫病的病原体有3种,即双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫和卵形巴贝斯虫。该病的发生呈一定的地区性、季节性。2009年7月23日我县某养牛户饲养黑白花母牛9头,其中4头突然发病,1头死亡,现将诊疗情况报告如下。     

马泰勒虫和弩巴贝斯虫双重荧光定量PCR检测方法的建立

马梨形虫病(EP)是由巴贝斯虫属的驽巴贝斯虫(B.caballi)和泰勒虫属的马泰勒虫(T.equi)感染引起的蜱传马属动物疾病.为建立EP两种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中T.equi和B.caballi 18SrRNA基因序列设计特异性引物和探针,经过反应体系和条件优化,建立了能够同时...     

卵形巴贝斯虫与中华泰勒虫双重PCR检测方法的建立

为建立一种能快速对卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)和中华泰勒虫(Theileria sinensis)同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的卵形巴贝斯虫AMA1基因和中华泰勒虫MPSP基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。结果显示：双重PCR可特异扩增出卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫目的条带,片段大小分别为500 bp和986 bp。该方法具有较好的特异性,对卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的最低检出浓度为16 fg/μL。对采集的90份牛血液样本进行双重PCR检测,卵形巴贝斯虫阳性率为30%(27/90),中华泰勒虫阳性率为16.67%(15/90),混合感染率为10%(9/90)。结果表明,双重PCR方法可用于卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的快速诊断和流行病学调查。     

牛双芽巴贝斯虫病的诊治

牛双芽巴贝斯虫病是双芽巴贝斯虫寄生在牛的红细胞内 ,由蜱通过吸血传播 ,呈急性发作的牛血液原虫病 ,临床上主要表现发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿等。1　发病情况台州市黄岩区上洋乡前岸村蔡某和下方村袁某 ,2 0 0 0年从河南调入放牧母牛 1 5头、犊牛及后备牛 1 2头 ,2 0 0 1     

牛双芽巴贝斯虫病的防制研究

在流行病学调查基础上，采取控制传播媒介和药物预防注射为中心的综合防制措施，在蜱活动的４－１１月份，选用双甲脒和螨净，进行牛体表喷洒灭蜱，两种灭蜱药每半月交替使用一次。在牛双芽巴贝斯虫病发病季节５－９月份，选用贝尼尔、咪唑苯脲进行两次预防注射或缓释剂一次预防注射，经过二年防制工作，防制点没有发生牛双芽巴贝斯虫病。牛体蜱数从９－２８２只／头次下降到０－１１．３只／头次。间接血凝试验结果显示，牛阳性率从     

牛双芽巴贝斯焦虫病的诊疗

牛双芽巴贝斯焦虫病旧称为牛双芽焦虫病 ,是牛蜱吸血过程中将牛巴贝斯虫传入牛的血液破坏红细胞而引起的一种疾病。1　流行病学发病时间为春末至秋天 ,夏秋最多 ,1～ 5岁的牛发病较多 ,青壮牛发病重 ,幼牛易感而轻 ,外地引进牛和良种牛易感。初为爆发 ,后为散发 ,多发生在沙山地带 ,发病快、死亡率高。2　临诊症状潜伏期为 1 2～ 2 4ｄ ,病初患畜体温偏高 ,精神、食欲稍异常 ,可视粘膜充血或微黄 ,一般初期病状不明显 ,当虫体迅速繁殖排泄大量毒素时 ,病牛体温升高到 40℃～ 42℃以上 ,成稽留热型 ,反刍停止(个别不停 ) ,食欲减退甚至于废绝…     

马驽巴贝斯虫ddPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫(Babesia caballi)病是马属动物的一种血液原虫病,被农业农村部列为二类动物疫病.本研究旨在建立一种针对马驽巴贝斯虫病的ddPCR检测技术.利用马驽巴贝斯虫特异性引物及探针对反应体系进行优化,测试了方法的特异性、稳定性及灵敏性,对30份可疑样品进行了初步检测.结果显示,该方法具有较好的稳定性,最...     

驽巴贝斯虫病巢式POR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫(Babesia caballi)rap-1基因序列设计内外两对引物,从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA,采取两次扩增的方法,获得222bp基因片段,经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测,准确率为100%。     

驽巴贝斯虫病巢式POR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫(Babesia caballi)rap-1基因序列设计内外两对引物,从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA,采取两次扩增的方法,获得222bp基因片段,经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段.采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测,准确率为100%.     

套式PCR检测马巴贝斯虫

根据GenBank中马巴贝斯虫(Babesia equi)ema-1基因序列,设计合成内外2对引物,其中外引物扩增ema-1基因60～627nt间567 bp片段,内引物扩增ema-1基因259～488nt间229bp片段。从实验室感染马巴贝斯虫阳性马匹全血样本中提取DNA,采取2次扩增的方法,扩增到229bp特异性条带,建立了适合马巴贝斯虫快速检测的套式PCR方法。经重复性试验和特异性试验,结果显示,马巴贝斯虫阳性样本在229bp均出现条带,而驽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫扩增结果为阴性。采用该方法对已知阴、阳性的16份马匹全血样品进行检测,有8份为阳性,与实际结果的符合率为100%。表明,所建立的方法具有较高的重复性和特异性,可用于马巴贝斯虫病的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查。     

牛双芽巴贝斯焦虫病的诊治

双芽巴贝斯焦虫(B.bigemina)是对牛危害较大的一种血液寄生虫,虫体经微小牛蜱、镰形煽头蜱和二棘雪蜱等中间宿主传播。当蜱叮咬牛体时,虫体随蜱的唾液进入牛体,随即由血液进入红细胞,在红细胞内以成对出芽的方式进行繁殖。在我国,牛双芽巴贝斯焦虫病主要分布于南方各省,由于我省多山地灌丛,气候温暖潮湿,适宜传播媒介一蜱的生长发育。因     

新疆部分地区马驽巴贝斯虫病感染PCR检测调查

为了解新疆部分地区马匹感染马驽巴贝斯虫病的流行情况,通过PCR方法对不同地区所采集的样品进行检测,并对不同地区和不同年龄段马驽巴贝斯虫感染情况进行单因素方差分析。结果显示,所检测的504份马血样中,54份血样为阳性,阳性率为10.71%。其中北疆昭苏种马场、阿勒泰、吐鲁番托克逊马驽巴贝斯虫阳性率分别为20.61%、5.17%、0;巴音布鲁克牧场、和静地区马驽巴贝斯虫阳性率分别为0和8.59%。从阳性样品中都检测到了驽巴贝斯虫BC48基因片段,与已知序列的同源性为99%。X≤3,3X≤6,6X≤9,X9四个年龄段马驽巴贝斯虫感染率分别为9.76%、10.53%、11.21%和11.65%。单因素方差分析结果表明,昭苏种马场与阿勒泰、巴音布克牧场分别存在极显著性差异(P0.01);巴音布鲁克牧场与和静也存在极显著性差异(P0.01);昭苏种马场与吐鲁番托克逊存在显著性差异(P0.05),其余各地方差异不显著。各个年龄段马驽巴贝斯虫感染无显著性差异。本试验的研究数据可为研究新疆马驽巴贝斯虫分布特点提供数据支撑。