琼脂凝胶免疫扩散试验盒检测绵羊副结核分枝杆菌抗体效果的评价

本研究旨在确定用于检测牛副结核分枝杆菌抗体的琼脂凝胶免疫扩散试验盒是否可用于检测绵羊的抗体。血清来源于用回肠粘膜涂片的抗酸染色,组织学检查或细菌学培养证实有副结核病的２７只绵羊,７只有副结核病症的绵羊,５５只分别来自于５群未感染的绵羊。血清用商品性试验和以前已证实的琼脂扩散试验检测。同时多次检测６年以上的１３只感染绵羊的血清以比较每种方法出现阳性的检测效果。两种方法的检测结果表明,５５只未感染绵羊的血清均为阴性,有副结核病症的３４只绵羊中的３２只为阳性,２只为阴性。从１３只未感染绵羊收集的５４个样本中有５０个结果一致。两次实验结果不一致的４个样分别是１号绵羊１０份样中的第４,８,９份,２号绵羊６份样中的第１份。所有的４个样,商品性试验产生弱阳性结果。但琼扩免疫试验产生阴性结果。由此可知,检测牛副结核分枝杆菌抗体的琼扩试验可以用于鉴别诊断绵羊的副结核病。     

在应用酶联免疫吸附试验诊断牛副结核病时消除假阳性反应的方法

建立了检测牛血清中副结核分枝杆菌的特异抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA),在试验过程中探索出一种可以避免在 ELISA 检测副结核分枝杆菌原生质抗原的抗体时,经常遇到的假阳性反应的方法。被检血清来源于副结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌。堪萨斯分枝杆菌或星形诺卡氏菌感染的牛,经细菌学检查为阴性而副结核补体结合反应阳性及用假结核分枝杆菌感染的羊。预先使用草分枝杆菌吸收后的试验血清,基本上可以消除掉假阳性反应。凡经过这种方法处理的血清,不会影响副结核病牛的 ELISA 抗体水平。试验结果表明预先用草分枝杆菌吸收的血清,可以消除在 ELISA 诊断牛副结核病     

北京地区规模化奶牛场副结核流行病学调查

为调查北京地区规模化奶牛场副结核流行病学情况,试验通过ELISA检测血清抗体,采用副结核分支杆菌(MAP)抗体ELISA试剂盒检测血清中的IgG,去除掉信息不齐全和重复的样品后,最终总计采集北京地区7个牧场8 549头牛的血清样品。试验分析副结核在不同养殖阶段和不同月龄的血清抗体阳性率、各场血清抗体阳性率,以及血清抗体阳性牛S/P值分布情况等。显示北京地区规模化奶牛场场间血清抗体阳性率为100%,场内血清抗体阳性率为5.08%～12.62%,个体牛血清抗体阳性率为9.25%;血清抗体阳性牛主要集中在24月龄以上的成母牛群,建议对12月龄以上牛群采样。表明北京规模化奶牛场副结核感染情况不容乐观,有必要开展副结核控制计划。     

用分离法检测牛粪便中副结核分枝杆菌及其与高倍显微镜检查染色涂片的比较

作者比较了用分离法检测牛粪便中的副结核分枝杆菌和用镜检Ziehl-Ne-elsen染色粪便涂片中抗酸性副结核分枝杆菌菌块。粪便采自自然或人工感染副结核分枝杆菌的牛,以及未感染牛。结果表明,镜检粪便染色涂片法不是检测副结核分枝杆菌的可靠方法。因为在177份培养分离阳性粪便标本中,镜检涂片只检出99份(55.9%)为阳性。此外,在18份非副结核病牛粪标本涂片中有3份为阳性,37份培养分离为阴性的副结核病牛粪标本涂片中有18份为阳性。抗酸性菌块不能与副结核分枝杆菌区分。将副结核分枝杆菌加到未感染牛粪中时,需在每克粪便中加入15个以上的副结核分枝杆菌,分离即为阳性。     

用ELISA诊断山羊副结核病的评价

一种检测牛血清中副结核分枝杆菌（Ｍ．Ｐ）抗体的商品化快速吸附ＥＬＩＳＡ经改良后用于检测山羊血清中Ｍ．Ｐ抗体，使用来自副结核病群中的１６３只山羊，评价诊断的敏感性。采集血和粪样，而且应用商品试验盒，通过测定分枝杆菌插入序列ＩＳ９００ＤＮＡ来估计粪便中Ｍ．Ｐ的排出情况。诊断的特异性是通过１０群临床上认为无副结核病的１２３只山羊的血样来评估的。感染羊群中的１６３只山羊中有３５只（２１％）检出了ＩＳ９００ＤＮＡ。在３５只ＩＳ９００ＤＮＡ阳性山羊中有１９只检出了Ｍ．Ｐ血清抗体，敏感性为５４％，感染群中１２８只ＩＳ９００ＤＮＡ阴性山羊１８只检出血情抗体。临床上认为无副结核病羊群中的１２３只山羊的Ｍ．Ｐ血清抗体检测结果为阴性。     

用ELISA诊断山羊副结核病的评价

一种检测牛血清中副结核分枝杆菌（Ｍ．Ｐ）抗体的商品化快速吸附ＥＬＩＳＡ经改良后用于检测山羊血清中Ｍ．Ｐ抗体，使用来自副结核病群中的１６３只山羊，评价诊断的敏感性，采集血和粪样，而且应用商品试验盒，通过测定分枝杆菌插入序列ＩＳ９００ＤＮＡ来估计粪便中Ｍ．Ｐ的排出怀情况。诊断的特异性是通过１０群临床上认为无副结核病的１２３只山羊的血样来评估的。感染羊群中的１６３只山羊中有３５只（２１％）检出了ＩＳ９０     

纤毛蛋白与绵羊白细胞介素2融合基因工程疫苗对实验动物的体液免疫应答

将转化节瘤拟杆菌（D.nodosus)纤毛蛋白（Pili）和绵羊白细胞介素2（oviIL2)融合基因表达质粒的工程菌BL－21，在含酸苄青霉素营养肉汤培养基中表达，离心获得菌体沉淀物，裂解后配制成Pili-oviIL2融合基因工程疫苗。用加佐剂和不加佐剂的Pili-oviIL2融合基因工程疫苗分别接种2只健康家兔，21天后接种第2次；定期采血，用对流免疫电泳检测试验兔的体液免疫反应。结果发现，加佐剂和不加佐剂的Pili-oviIL2融合基因工程疫苗免疫兔7天即可产生相应抗体，抗体在免疫血清中可维持6个月以上。进一步试验将不加佐剂的Pili-oviIL2融合基因工程疫苗接种3只健康绵羊，同样21天后接种第2次，定期采血，用对流免疫电泳检测试验绵羊的体液免疫反应。同时用Pili基因工程疫苗接种2只绵羊作对照。结果3只绵羊接种Pili-oviIL2融合基因工程疫苗后，分别于7天和14天产生相应的抗体，而接种Pili基因工程疫苗的绵羊于28天产生相应的抗体；被免疫绵羊血清中的抗体可维持6个月以上。用Pili-oviIL2融合基因工程疫苗接种兔和绵羊的免疫试验表明，Pili-oviIL2融合基因工程疫苗具有较好的体液免疫应答反应，重组OviIL2在融合基因工程疫苗中具有良好的佐剂作用。     

Dot—ELISA检测牛副结核病抗体的研究

本文利用提纯的副结核分枝杆菌胞浆特异性抗原，建立了检测牛副结核抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法，用该方法对粪便培养阳性性的３２头份牛副结核病血清检测，检出２７头，阳性检出率为８４．４％，其敏感性与ＥＬＩＳＡ相似，与１０头ＯＴ变态反应阳性牛血清检测，无交叉反应。Ｍ－ｐｈｌｅｉＭ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ．Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ人工高兔血清经两次用Ｍ．ｐｈｌｅｉ悬液吸收，用建立的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法也无交叉反应     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原的抗体，出现对病毒包膜糖蛋白的抗体，同时出现对ｐ２５和ｐｇ１３５二者的抗体互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶ ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３和ＮＸＪ－０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值诊次为１×１０＾－５．６，１×１     

应用酶联免疫吸附试验检测实验感染绵羊进行性肺炎病毒的山羊血清抗体

用酶联免疫吸附试验在接种绵羊进行性肺炎产山羊血清中可测到ＯＰＰＶ抗体。抗体的最早检出时间是接毒后的第１５ｄ，且４只接毒山羊都呈阳性反应。检测结果表明，ＯＰＰＶ可在山羊体内诱生较强的体液免疫应答反应。     

生后未吃初乳羔羊副结核杆菌对应抗体的检出

在母羊产羔后立即采取134份母羊血样和143份新生羔羊血样。用双向免疫扩散试验(ID)和对流免疫电泳试验(CIEP)检测副结核杆菌对应抗体。在血清学上证明感染副结核杆菌的127只母羊所产的135只羊羔中有4只羔羊的血清检出     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节，囊壁，囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头涤虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律，结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达峰值，一直持续到试验结束，免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试     

实验感染山羊关节炎—脑炎病毒的绵羊抗体应答反应的研究

本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验和免疫印迹试验对实验感染山羊关节炎—脑炎病毒（ＣＡＥＶ）的绵羊抗体应答反应进行了研究，用两种方法都可在接毒绵羊的血清中检测到ＣＡＥＶ的抗体。琼脂凝胶免疫扩散试验最早可于接毒后的第７周时检测到抗体，免疫印迹试验最早可于接毒后的第６周时检测到抗ＣＡＥＶ的ｇｐ１２５、ｇｐ４４、ｐ３５、ｐ２８和ｐ１４的抗体，这说明免疫印迹试验更为敏感一些。本实验的结果表明ＣＡＥＶ可在绵羊体内诱生明显的体液免疫应答反应，因此用ＣＡＥＶ通过绵羊体传代的方法可能会得到具有良好的抗原性的ＣＡＥＶ毒株，这对于人工培养ＣＡＥＶ强毒是非常重要的。此外，本实验还为ＣＡＥＶ通过绵羊体传代的研究提供了非常实用的检测手段     

用山羊关节炎—脑炎病毒实验感染绵羊的研究

用山羊关节炎－脑炎病毒（ＣＡＥＶ）接种２只绵羊，３￣４个月后，可观察到接毒绵羊发育迟缓和消瘦，其中１只绵羊在接毒后第８个月出现呼吸困难。未接毒对照绵羊发育正常。用ＣＡＥＶ琼扩抗原检测，２只接毒绵羊于接毒后第７周血清抗体阳转。病理剖检在１只接毒绵羊的多种器官中观察到比较轻微的病变，组织学检查可看到轻微的间质性肺炎、脑膜炎和滑膜炎的病变。实验结果表明，ＣＡＥＶ可感染绵羊，对绵羊有一定的致病性。因此用Ｃ     

天峻县藏系绵羊传染性胸膜肺炎的血清学诊断

用羊传染性胸膜肺炎间接血凝试验,对来自青海省天峻县的290份绵羊血清.进行了羊传染性胸膜肺炎血清抗体检测.结果:从290份绵羊血清中捡出抗绵羊传染性胸膜肺炎抗体的阳性血清207份,阳性率为71.38%;表明青海省天峻地区的羊群中存在绵羊肺炎支原体的感染.     

绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法,本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒,经诱导表达和纯化后,对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定;以MOMP为包被抗原,通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、重复性和符合性,并进行临床样品检测。结果显示,MOMP以包涵体形式表达,经Western blot鉴定重组蛋白具有良好的反应原性。优化反应条件为：抗原包被浓度为1 mg/L,37℃静置孵育1 h;血清抗体稀释倍数为1∶100,37℃反应1 h;酶标二抗稀释倍数为1∶5 000,37℃孵育1 h;底物显色条件为37℃避光5 min。利用52份绵羊血清确定ELISA方法的阳性判定临界值为P/N=2.156。该方法的敏感性、特异性和重复性较高。用该方法与间接血凝试验对86份血清进行检测,两者符合率为73.2%。用该方法对临床采集的205份绵羊血清样品进行检测,阳性率为34.1%。结果表明,本试验建立的绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可应用于临床检测。     

绵羊进行性肺炎诊断方法的研究

应用间接荧光抗体试验和琼脂扩散试验对绵羊进行性肺炎诊断的研究表明,这两种诊断方法的特异性是强的,用以对采自于四川凉山州罗吉山羊场的108份血清进行检查,其共同阳性或疑似的有17份。阳性羊均是从新西兰和澳大利亚进口的“边区来斯特”种羊及其后裔。用间接荧光抗体试验检测了内蒙呼盟地区的绵羊血清135份,阳性有7份.由此证明,我国确有绵羊进行性肺炎病的存在,应予以高度重视。     

Dot-ELISA检测牛副结核病抗体的研究

本文利用提纯的副结核分枝杆菌胞浆特异性抗原,建立了检测牛副结核抗体的Dot-ELISA方法。用该方法对粪便培养阳杜的32头份牛副结核病血清检测,检出27头,阳性检出率为84.4％,其敏感性与ELISA相似。与10头OT变态反应阳性牛血清检测,无交叉反应。M.phlci.M.fortuitum.M.kansasii人工高免血清经两次用M.phlci悬液吸收,用建立的Dot-ELISA方法也无交叉反应。表明设立的Dot-ELISA具良好的敏感性特异性。     

牛白血病病毒对绵羊和牛的感染试验

分别以200和1000个含牛白血病病毒(BLV)FLK/BLV细胞和BLV阳性绵羊的白细胞感染绵羊,可产生BLV抗体。经3～33个月同居感染试验的28只绵羊均未感染。牛白血病严重污染的牛场,在不采取任何措施的情况下经3年定期用免疫琼脂扩散(ID)检查感染率每年递增10%左右。     

牛副结核检疫中的非特异性干扰

给犊牛接种各种分枝杆菌，然后以副结核ＰＰＤ进行变态反应试验，观察各分枝杆菌感染对副结核变态反应的干扰；从各种分枝杆菌感染牛群采取血清进行副结核ＥＬＩＳＡ检测，以观察各分枝杆菌血清对牛副结核ＥＬＩＳＡ的干扰。结果：多种分枝杆菌，特别是鸟胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌的感染可干扰副结核变态反应；部分结核牛血清干扰副结核ＥＬＩＳＡ的检测