农杆菌介导rolC基因转化烟草植株的研究

通过根癌农杆菌介导手段，将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草（Nicotiana tabacum)植株的基因组，并借助GUS组织化学法，PCR扩增法和Southen杂交进行了鉴定证实。 rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点，如植株高变矮，花冠变小，雄蕊 变短等，还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用。     

农杆菌介导半夏凝集素基因对油菜的遗传转化

以3～4d苗龄的甘蓝型油菜品种陇油2号带柄子叶为转化受体材料,通过农杆菌LBA4404介导将半夏凝集素抗虫基因（pta）导入,获得抗卡那霉素的抗性植株3株。实验中还对影响油菜遗传转化的外源激素种类和配比进行了研究,结果表明,在预培养阶段1．0mg／L 2,4-D与0．2mg／L6-BA配合使用比单独使用2,4-D效果好,在幼苗分化阶段2．5mg／L6-BA、0．1mg／L NAA和0．5mg／L GA3配合使用有促进芽分化、抑制根分化的作用。     

农杆菌介导转mgfp4基因水稻的获得

通过农杆菌介导法将携带mgfp4基因的植物表达载体pCAGFPHyg导入水稻明恢86中,获得101个独立克隆的转基因植株。PCR检测和Southern blot分析证明外源基因已整合进水稻基因组中,T0代种子的分离分析结果表明大部分转基因植株为单T-DNA插入。荧光检测及RT-PCR分析结果显示mgfp4基因能在水稻中表达,但其发出的绿色荧光检测效果不甚理想。     

农杆菌介导法获得优良玉米自交系转Bt基因植株

用根癌农杆菌介导法将携带有苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因(Bt)和PPT乙酰转移酶基因(bar)的质粒pGBIL04导入优良玉米自交系340和4112经预培养的幼胚初始愈伤组织，抗性植株平均发生频率为11．21％，经PCR、PCR-Southern和Southern blotting检测证明外源基因Bt已稳定整合到13株玉米基因组中，平均转化率为2．35％。降低共培养温度到22℃的转化率最高达4.44％，Basta抗性检测bar基因也同时转移进再生植株中，部分转化植株已经结实。     

农杆菌介导法获得草地早熟禾转Bt基因植株

以草地早熟禾品种超级伊克利成熟种子为外植体材料,当愈伤组织诱导培养基中琼脂的用量增加至16g/L时,诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织经携带pGBI4AB农杆菌LBA4404的感染和共培养后,在继代培养基上添加50mg/L筛选剂G418,可较好地筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,进而获得具有卡那霉素抗性的再生植株。PCR分子检测结果表明,Bt基因已导入转化植株。生物学抗虫性鉴定结果显示,转Bt基因当代植株对1～2龄棉铃虫具有不同程度的抗性。     

建立青菜（Brassicachinensis）农杆菌介导法基因转化体系

以青菜地方品种矮脚黄、苏州青的子叶、子味柄、真叶为外植体、在改良ＭＳ培养基上离体培养获得再生植。在不定芽诱导培养其中添加２－２０ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３可显著提高子叶不定芽诱导频率；添加０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ和１－２ｍｇ／ＬＣＰＰＵ既可提高不定芽诱导频率，又可获得较多数量的不定芽。     

农杆菌介导AFP1基因转化小麦获得转基因植株

以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6株,AFP1基因阳性植株分别为1株和4株。     

用根癌农杆菌介导获得籼稻转基因植株

用携带p13W4质粒的根癌农杆菌EHA105感染籼稻龙特甫品种的幼胚愈伤组织，经共培养并在潮霉素25－50mg/L浓度条件下筛选2－3次，获得了对潮霉素表现抗性的愈伤组织，其愈伤组织转化频率为25.3%,将抗性愈伤组织转入分3化培养基培养形成植株，经GUS活性测定和PCR检测，结果证明外源基因确已导入这些转基因植株之中。     

农杆菌介导法获得匍匐翦股颖转GO基因植株

以匍匐翦股颖2个品种Pent A-4和L-93的成熟种子为外植体材料,附加2,4-D 4.0 mg/L和KT 0.05 mg/L的稍作修改的MS培养基为愈伤组织诱导和继代培养基.琼脂条的用量为16 g/L时,50%以上的愈伤组织呈浅黄色或白色、干燥、颗粒状结构.颗粒状愈伤组织经过连续3次继代培养后,其绿苗分化率保持在60%以上.以颗粒状胚性愈伤组织为受体材料,用农杆菌介导法将含有葡萄糖氧化酶(GO)基因和新霉素磷酸转移酶基因(NPT II)的重组质粒导入匍匐翦股颖.愈伤组织经农杆菌LBA4404/pBGO感染和共培养后,在附加G-418 60 mg/L的愈伤组织继代培养基上选择到具有卡那霉素抗性的愈伤组织.抗性愈伤组织分化的绿苗在附加G-418 30 mg/L的绿苗分化培养基上进行筛选,获得了抗性再生植株.试管植株的叶片经淀粉-碘化钾显色反应,检测到转GO基因植株产生的过氧化氢.PCR分子检测结果证明,GO基因已整合到转化植株的基因组中.抗病性鉴定结果显示,转GO基因植株抗水稻纹枯病.     

农杆菌介导法转化宁夏水稻的研究

通过对HAL1抗盐基因农杆菌介导法转化宁夏水稻的研究,建立起了以优育28成熟胚诱导的愈伤组织为转化受体的农杆菌介导法转化体系,为宁夏水稻遗传转化研究奠定了基础。     

半夏多糖提取工艺优化及其清除自由基能力研究

[目的]研究半夏[Pinellia ternate（Thunb.）Breit.]多糖的提取工艺及其清除自由基的能力。[方法]在单因素试验的基础上,通过正交试验确定纤维素酶法提取半夏多糖的最佳条件;采用羟自由基体系对半夏多糖清除羟自由基的能力进行研究。[结果]纤维素酶法提取半夏多糖的最优条件为：提取温度55℃,提取时间3.5 h,pH值为4.5,加酶量为4%。多糖浓度为10 mg/ml时,其对羟自由基的清除率达到71.75%。[结论]得到了纤维素酶法提取半夏多糖的最佳条件,探明了半夏多糖对羟自由基的清除作用。     

半夏的组织培养研究

本文以半夏茎尖,叶片为材料进行组织培养研究,结果表明茎尖培养基为MS＋BA1．0＋NAA0．05mg／L,增殖培养基为BA1-1．5mg／L＋NAA0．5-1．0mg／L,半夏的不同器官均能够进行培养出芽,本文还探讨了试管小球的形成条件,BA对试管小球的形成起关键作用,糖浓度在30-16Og／L范围均有试管小球形成而以80g／L形成小球较多,在MS＋BA1．0＋NAA0．8mg／L＋糖45g／L,无光照条件下形成小球较大。     

半夏组培苗栽培技术初探

采用随机区组设计法,对组培半夏不同底肥施用量与产量的关系进行研究。结果表明,不同施肥量对组培半夏的产量影响显著,37 500～60 000 kg/km2为组培半夏栽培的最适底肥施用量。     

半夏不同变异类型的RAPD分析

为了利用RAPD技术研究半夏的各种变异类型。以栽培多年的6个不同变异类型的半夏为实验材料,取每一变异类型中的5~10株新鲜叶片,提取总基因组DNA。从100条随机引物中筛选出17条重复性好、条带清晰、能体现半夏性状变异类型差异的引物进行RAPD扩增。RAPD分析结果表明,17个RAPD引物扩增出了81条带,其中55条为多态带,占67.9%,表明半夏不同变异类型间存在分子水平的遗传差异。该研究为半夏的品种改良与栽培奠定了基础。     

可见-紫外分光光度法测定半夏硫熏前后总生物碱的含量

[目的]考察硫熏对半夏总生物碱含量的影响。[方法]采用可见-紫外分光光度法测定硫熏和非硫熏半夏中总生物碱含量。[结果]比较得出,硫熏后半夏的总生物碱含量明显降低。[结论]半夏产地加工应抛弃硫熏法,探索无硫加工工艺。     

外源ALA对半夏幼苗耐盐性及其总生物碱含量的影响

以药用植物半夏二年生幼苗为材料,在100 mmol/LNaCl模拟盐胁迫条件下,测定了在不同浓度外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理后,半夏幼苗叶片的可溶性蛋白、超氧阴离子(O2.-)、丙二醛(MDA)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的变化,并对半夏的总生物碱含量进行了测定。研究结果显示,适宜浓度(50 mg/L)的ALA处理,可以显著提高盐胁迫(100 mmol/LNaCl)下半夏幼苗的耐盐能力及其主要药用成分-总生物碱的含量。     

微环境调控对半夏无糖组培苗根、叶显微结构的影响

 以半夏组培苗为研究材料,应用植物无糖组培快繁技术,研究探讨了微环境控制对半夏无糖组培苗根、叶显微结构的影响。研究结果表明,半夏无糖组培苗根、叶显微结构与有糖组培苗（CK）相比其保水能力具明显优势。半夏无糖组培苗叶片具有发育较好、较厚的栅栏组织和海棉组织,细胞排列紧密有序,中脉发达,且叶表皮具有蜡质层;而半夏同龄有糖组培苗叶片的栅栏组织和海棉组织细胞发育较差,中脉及其维管束发育不完全。半夏无糖组培苗根部细胞排列紧密组织分区明显,初生组织和次生组织已分化;能明显观察到疏导组织、髓射线和凯氏带;半夏有糖组培苗根生长发育不良,初生组织和次生组织分化不明显,疏导组织不发达。     

不同来源地半夏出苗规律的研究

通过对采自四川、重庆、陕西、江苏各地的不同半夏居群在同一栽培条件下的出苗情况的研究,采用田间实验的方法对39个半夏居群的出苗情况进行了统计分析,为野生半夏的驯化和栽培品种的选育提供依据。实验结果表明,各半夏居群间的出苗率、出苗整齐度差异显著。采自四川简阳(PT16)、四川射洪县皮曼(PT21)、四川遂宁(PT23)、四川蓬安(PT24)、四川遂宁(PT43)、江苏徐州(PT47)、四川安岳(PT49)、四川广安(PT52)八个居群的出苗率较高、出苗期较短、出苗也较整齐。这些居群的半夏适合用于栽培,可大大提高效益。     

半夏茎腐病原菌对西和半夏幼苗叶片生理特性的影响

[目的]探讨半夏茎腐病原菌对半夏产生侵害的生理学机制。[方法]采用实验室培养试验研究了不同浓度的半夏茎腐病原菌孢子对半夏幼苗叶片生理特性的影响。[结果]随着病菌孢子浓度的增加,叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性先上升后下降,游离脯氨酸、可溶性糖和丙二醛(MDA)含量呈升高趋势,且与对照相比差异显著。[结论]试验结果为预防和治理半夏茎腐病提供了理论依据。     

半夏提取物对桃蚜生物活性的研究

用石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇提取半夏干粉中的活性物质,研究不同溶剂提取物对桃蚜的生物活性。结果表明,3种溶剂半夏提取物对桃蚜均有较好的拒食、毒杀和内吸活性,其中无水乙醇提取物的效果最好 100.0 mg/ml 3种溶剂半夏提取物处理48 h对桃蚜的拒食率和毒杀校正死亡率分别在90.00%和40.00%以上 半夏提取物浓度越高、作用时间越长,对桃蚜的生物活性越好。