GUS基因瞬时表达检测香菇顺式因子的调控功能

设计了一个顺式元件功能检测载体pYF3553,该载体以GUS为报告基因,其上游连接一段由待测香菇(Lentinula edodes)克隆片段与酵母Cyc1基本启动子组成的杂合启动子。将编号为XG108和XG111的香菇克隆序列构建的检测载体命名为pXG108p、XG111。将pXG108转化到香菇原生质体中,结果被测样的GUS瞬时活性比对照增加一倍,表明GUS基因得到了表达,其上游调控元件具有调控功能。对比pXG108和pXG111转化后的表达结果,其GUS瞬时表达活性表现出差异,这种差异与克隆片段在酵母中的表达差异相一致。分析了利用GUS瞬时表达验证未知香菇顺式元件的优缺点。     

GUS基因瞬时表达检测小麦1Ay基因启动子功能

本试验以pAyGUS为转化质粒,该质粒为小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因1Ay的启动子和β-葡糖苷酸酶(GUS)基因的重组质粒,利用基因枪法将该质粒导入小麦胚乳及胚中,检测其表达活性。通过X-gluc染色检测表明,GUS基因在该启动子的驱动下能在小麦种子中特异表达,可见小麦1Ay基因的启动子具有在小麦胚乳中特异表达的活性,这为小麦品种改良及转基因研究奠定了基础。     

棉花GhCAD6基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达

[目的]以GUS基因为报告基因,构建GhCAD6基因的瞬时表达载体.[方法]采用PCR方法和基因枪法.[结果]用PCR法,以pGEM-T-CAD6质粒为模板,获得GhCAD6基因目的片段.然后将其克隆到瞬时表达载体pRTL2-GUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CAD6融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达.采用基因枪法将pGUS-CAD6转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色.[结论]构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达,为进一步研究棉花GhCAD6基因的功能奠定了实验基础.     

棉花GhCCR4基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达

研究以GUS基因为报告基因,构建CCR4基因的瞬时表达载体,首先酶切带有CCR4基因的 pGEM-T-CCR4载体,获得CCR4基因目的片段,然后将其克隆到瞬时表达载体pGUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CCR4融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达.采用基因枪法将pGUS-CCR4转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色,表明构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达.为进一步在棉花中研究GhCCR4基因的功能奠定了实验基础.     

基于GUS基因瞬时表达优化云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)遗传转化方法

本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的GUS基因瞬时表达的影响。结果表明：叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无菌叶片预培养0 d,菌液OD600值0.5,侵染时间40 min,共培养5 d,GUS基因瞬时表达率最高,平均表达率为70%。试验结果为云南杜鹃遗传转化研究提供了快速可靠的依据。     

几条随机克隆的香菇顺式因子特性分析

分析了6个利用启动子探测载体和酵母表达体系克隆得到的香菇顺式调控因子的调控稳定性和序列结构特征。在酵母中进行2次转化,根据在X-gal培养基上的显色初步研究其调控稳定性;根据显色深浅不同,判断其调控能力的强弱,并结合序列特征结构进行分析。结果显示,克隆片段在酵母中具有稳定的调控功能,所克隆序列具有丝状真菌生物启动子典型结构,如CT丰富区T、ATA框、GC框、CAAT框。详细分析了其中1条克隆片段序列特征,并与已知的香菇GPD启动子序列进行对比分析。初步探讨了香菇顺式调控元件的结构特点。     

利用GUS瞬时表达探讨香石竹品种“云红二号”基因枪转化参数

利用基因枪法和带有GUS基因的双元表达载体pBI121转化香石竹品种"云红二号"的外植体。通过检测GUS基因在香石竹叶片和茎段上的瞬时表达情况,分析受体材料、轰击距离及氦气压力对GUS瞬时表达的影响。结果表明,以茎段为受体材料,在射程为6 cm、氦气压力为1100 psi下,可检测到GUS基因较好的表达活性,瞬时表达率最高可达8.33%。     

甜荞高效离体再生与GUS基因瞬时表达分析

以晋荞1号叶片为外植体,研究了不同类型(2,4-D,6-BA和NAA)及不同剂量的生长调节剂对愈伤组织诱导、幼苗分化及植株再生的影响;利用Ca MV35S启动子驱动GUS基因PBI121质粒转化EHA105农杆菌侵染愈伤组织,进行GUS染色鉴定。结果表明,愈伤组织诱导培养基中加入3.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA诱导愈伤组织的效果最好,出愈率达到69.5%;再分化培养基中加入1.0 mg/L的6-BA和1.0 mg/L的NAA分化率最高(47.0%);农杆菌侵染愈伤组织经过GUS染色鉴定证明为阳性。晋荞1号高效离体再生体系的建立为下一步转基因选育优良品种提供了理论依据和技术指导。     

GUS基因在转基因棉花中的表达

通过农杆菌介导法,以棉花下胚轴切段为外植体,将Bt杀虫晶体蛋白基因导入新疆陆地棉品种新陆早1号、新陆中2号中,获得了在含有卡那霉素MS培养基上诱导的愈伤组织,经GUS基因检测部分转化愈伤表达GUS阳性。     

农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化

以烟草叶片为试材,用转入植物表达载体pBI121的根癌农杆菌EHA105进行遗传转化。通过分析菌液不同浓度、侵染时间、乙酰丁香酮浓度及共培养时间对GUS基因表达的影响,研究其瞬时表达的最佳条件。结果显示:用OD600值为0.6的农杆菌侵染6min,在培养基中添加120μmol.L-1的乙酰丁香酮,共培养2d,能够得到高效的GUS基因瞬时表达。     

香茹单核菌丝多态性研究

本文研究了来自香茹不同菌株的单核菌丝的交配型、生长及生化特性。结果表明，单核菌丝在菌落形态、交配型及酯酶同工酶谱上存在着多态性，发现了1种以前未见报道的单核菌丝形态类型。在L26菌株的单核菌丝交配试验中得到了白色子实体材料，对来自L26和241－4的单核菌丝进行杂交，获得了2菌株的杂交材料。     

脱水香菇子实体中核苷酸含量的紫外可见光谱分析

用紫外可见光谱分析比较了新鲜刚脱水干制的香菇子实体和用聚乙烯薄膜密封包装后分别贮藏于10-29℃和0-5℃下280 d的脱水香菇子实体提取液中核苷酸含量的差异。结果表明,脱水干制后以厚度0.6 mmPE薄膜袋密封包装置低温(0-5℃)下,能有效地保存子实体中的核苷酸物质。     

粤北香菇生物学特性的初步研究

从生产和基础研究出发,通过碳源、氮源、C/N、pH值、生长因子、光照、湿度等试验,同时设计正交试验,初步研究了粤北香菇的生物学特性.结果表明,碳源、氮源、pH值、光照、湿度对茼丝体的生长影响极显著.正交试验中各因素的影响由强到弱依次为光照、生长因子、C源和N源.香菇茵丝生长的最佳碳源、氮源和生长因子为葡萄糖、黄豆粉和Vc,最适碳氮比是20～30:1,最适pH是5.0,最适湿度为60%,培养需避光.     

对粤北山区4株香菇菌株的初步研究

探讨来自粤北不同地方香菇菌株的共性与差异,并研究香菇菌株的最佳培养条件。通过拮抗试验明确了各菌株之间的拮抗关系;通过组织培养研究了不同碳源、氮源、C/N、pH、维生素、温度、湿度和光照时间对香菇菌株生长的影响。4株香菇菌株都来自粤北不同地方,但相互之间表现出拮抗关系,表明4株菌株的亲缘关系较远。香菇的最佳碳源是葡萄糖或蔗糖,最佳氮源是酵母膏或黄豆粉,碳氮比为10~30∶1,初始pH值控制在5左右;在培养菌丝体时要注意避光培养,培养温度不宜过高或者过低,最适温度为25℃,在培养基中添加VB1或者Vc均可促进菌丝体的生长;培养基的湿度控制在60%最佳。4株菌株的亲缘关系较远,并且野生菌株具有较强的生长势,具有进一步开发利用的价值。     

不同栽培条件对香菇甲醛含量的影响

研究了不同的木屑种类、香菇品种、出菇管理模式等对香菇中甲醛含量的影响。结果表明：栽培香菇的主要原料木屑中存在微量甲醛,树种不同其甲醛含量不同;不同树种木屑培养料栽培获得的子实体中甲醛含量差异不显著,且明显低于木屑中甲醛含量;香菇不同品种间子实体中甲醛含量差异不显著;栽培模式不同,香菇子实体中甲醛含量差异明显,其中大棚式栽培最低,为15．10mg／kg,层架式栽培模式为16．50mg／kg,覆土式栽培模式最高,达22．13mg／kg。     

壳聚糖对香菇菌丝生长代谢关键酶的影响

以香菇为材料,在袋料栽培条件下,添加不同浓度的壳聚精研究香菇的生长代谢.结果表明,壳聚糖浓度为100和500mg·kg-1时,栽培料中菌丝生长速度最快,长势浓密,与对照组有极显著差异;菌丝羧甲基纤维素酶(CMC酶)、滤纸纤维素酶(FP酶)、淀粉酶、愈创木酚过氧化物酶(POD酶)、过氧化物酶同工酶活力,在菌丝快速生长期均达到最大值,且明显高于对照.可选择壳聚糖浓度为100和500mg·kg-1作为香菇栽培生产中固体栽培料中添加的最佳浓度.     

金银花茎藤培养香菇试验

[目的]探索以金银花茎藤为主要原料栽培香菇的培养基配方及菌丝生长和出菇状况。[方法]以不同含量的金银花茎藤培养基为试验组,以葡萄糖蛋白胨培养基以及栎木屑培养基为对照组,对比观察香菇菌丝生长及出菇状况。[结果]葡萄糖蛋白胨培养基的菌丝萌动和生长最快,各组培养基的菌丝生长速度差别不明显。随着培养基中金银花茎藤的增加,出菇时间和次数增加,产量提高。金银花茎藤可作为香菇种植的培养基,其适宜配方为:金银花茎藤屑200g、麸皮20g、蔗糖20g、石膏2g、水300ml或料水比1.0∶1.3。[结论]金银花茎藤含有充足的香菇菌丝生长所需的营养成分,金银花茎藤培养基可替代传统栎木屑培养基用于培养香菇。     

10个夏季栽培香菇品种的筛选

[目的]筛选出适宜十堰地区生产的夏季栽培香菇(Lentinula edodes)品种。[方法]选择10个夏季栽培香菇品种,分别从菌丝生长情况、农艺性状及产量等方面对菌株进行综合评价。[结果]南山1号及夏18这2个菌株在当地栽培模式与气候条件下具有污染率小、菌丝生长快、产量高等优点。[结论]南山1号及夏18表现较好,推荐作为十堰地区夏季栽培香菇品种。