猪O型口蹄疫母源抗体测定及疫苗免疫效果评价

为科学评价猪O型口蹄疫灭活疫苗的免疫效果,并合理制定猪群O型口蹄疫免疫程序,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对猪群母源抗体及疫苗免疫抗体进行了检测与分析。结果显示,仔猪42日龄时母源抗体回落近临界值,猪群首次免疫后28 d抗体水平达到高峰,42～49 d抗体水平下降至临界值;二次免疫后21～28 d抗体水平达到高峰,随后抗体水平逐渐下降,120 d抗体水平下降至临界值。根据上述试验结果,建议免疫程序如下:仔猪40日龄首免O型口蹄疫灭活疫苗,首免后45 d进行二免,以后每4个月加强免疫1次。     

种猪场口蹄疫母源抗体水平与灭活疫苗免疫效果的调查

在口蹄疫的防制工作中，除了疫苗质量对免疫效果起重要作用以外，免疫方法和程序也直接影响免疫的效果。目前，国内大多数学者仍然是以灭活疫苗诱导的抗体水平作为评价免疫效果和制定免疫程序的重要指标。本文对贵州某种猪场口蹄疫母源抗体水平和灭活疫苗的免疫效果进行调查报告如下。     

规模猪场不同日龄仔猪O型和A型口蹄疫母源抗体消长规律及免疫效果监测

猪O型口蹄疫是政府强制免疫的动物疫病之一,而A型口蹄疫也明确规定根据各省的评估结果进行自行免疫。对猪场进行科学免疫是防控猪口蹄疫病毒感染的重要途径,为确定猪场口蹄疫疫苗的首免时间,以及掌握猪口蹄疫O/A二价灭活苗(O/HB/HK/99株+AF/72株)的免疫效果及应用,试验采用口蹄疫病毒O型/A型特异性抗体固相竞争ELISA(SPCE)检测试剂盒对不同日龄阶段仔猪母源抗体进行检测。结果显示:猪O型口蹄疫在7日龄后抗体水平可达到有效保护,21日龄左右达到最高水平,持续到50日龄左右抗体阳性率下降到50%;猪A型口蹄疫的母源抗体变化规律同O型,但同一日龄抗体水平均低于O型,在43日龄左右抗体阳性率便下降到了50%。结合两种母源抗体检测情况,在45日龄左右进行首免比较合适。同时通过对免疫后抗体水平的检测显示,90日龄后两种抗体阳性率均持续在77.8%以上,但口蹄疫O型在58～70日龄抗体阳性率只有66.7%,可能是该场首免时间太早,因此建议将该场首免时间调整到45日龄,同时3次免疫可确保猪对猪口蹄疫O型和A型野毒的抵抗力,能较好防止口蹄疫疫情的发生。     

犊骆驼口蹄疫母源抗体的测定及口蹄疫A-O-Asia Ⅰ型三价灭活疫苗首免日龄的确定

利用O、A型及亚洲Ⅰ型口蹄疫(FMD)抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,参照试剂盒使用说明书通过测定20峰分娩母骆驼的FMD抗体合格率及其分娩的初生犊骆驼母源抗体在0,1,7,21,35,49和63日龄的抗体水平,摸清母源抗体的消长规律,确定犊骆驼的首免日龄,在首次免疫后15,30d采样检测FMD抗体水平。结果表明:母骆驼FMD的抗体水平以及犊骆驼是否能吃到初乳决定着犊骆驼母源抗体持续的时间;在1～7日龄犊骆驼的母源抗体水平达到最高峰,7日龄后,母源抗体水平逐渐衰减,并与日龄呈负相关;根据母源抗体持续时间,确定FMD A-O-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫的最佳首免日龄为45日龄,首次免疫后15,30dFMD抗体水平逐渐上升。     

北京地区牛口蹄疫母源抗体水平及其疫苗免疫效果的调查研究

用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法对北京地区主要牛场进行口蹄疫(FMD)母源抗体、免前和免后抗体水平的调查，以探寻牛体内FMD抗体消长规律，制定合理的免疫程序，从而指导北京地区FMD的免疫。结果发现母源抗体水平在5日龄前小于1：32，5日龄开始上升，高水平抗体一直维持到75日龄，90日龄开始回落；加强免疫后抗体滴度大幅度升高，抗体效价离散度降低；用FMD疫苗免疫青年牛1次，21d和51d的抗体平均值都为1：256；成年母牛的分别为1：256和1：248；育成牛的分别为1：248和1：240。说明牛FMD首免的适宜日期为90日龄；适时的加强免疫有利于牛群抵抗FMD；FMD疫苗对育成牛、青年牛和成年母牛都有理想的免疫效果，对青年牛的免疫效果最好。     

奶牛口蹄疫O-AsiaⅠ型双价疫苗母源抗体消长情况的观察

母牛在产犊后24 h内采血,犊牛出生后定期采血检测O型、AsiaⅠ型抗体。试验结果表明,犊牛吃初乳后,抗体效价迅速上升,以后随着日龄的增加,抗体不断下降;犊牛55日龄时,AsiaⅠ型达到保护抗体效价的牛比例为62.5%,75日龄时O型达到保护抗体效价的牛比例为62.5%。     

仔猪口蹄疫母源抗体衰减规律研究

为了明确仔猪体内A型口蹄疫母源抗体衰减规律,为仔猪口蹄疫疫苗首免时间的确定提供理论依据,选取预产期相同、口蹄疫抗体水平(A型)有差异的5头母猪,每头母猪随机选取5头仔猪并分16个时间点采集外周血,利用液相阻断ELISA对仔猪体内A型口蹄疫抗体进行检测,评估其消减规律。结果显示:脐带血不传播母源抗体,仔猪获得母源抗体保护的唯一途径是吃母乳;仔猪采食初乳后体内A型口蹄疫母源抗体可在吃初乳后当天达到峰值,而后随时间增加而降低;当母猪分娩时抗体水平为1∶1024时,仔猪63日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶720时,仔猪56日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶360时,仔猪28日龄左右体内抗体水平降低至1∶45。仔猪体内A型口蹄疫抗体衰减时间和分娩时母猪抗体水平呈正相关性。本文研究结果为制定科学合理的仔猪口蹄疫疫苗免疫程序提供数据支撑。     

三价口蹄疫灭活疫苗免疫猪后免疫效果监测

为了应对现在可能出现的A型口蹄疫疫情,本试验对口蹄疫A型、O型和亚洲1型三价灭活疫苗在猪上的使用情况进行了验证,选取了45日龄左右的仔猪36头,妊娠母猪5头,进行了疫苗免疫,并定期监测其O型、A型抗体水平,免疫后30 d仔猪O型、A型抗体水平合格率均能达到80%以上,二次免疫后可达100%,妊娠母猪免疫后O型、A型抗体水平合格率均能达到100%,所产仔猪14 d的O型抗体水平合格率也可以达到85%。     

猪口蹄疫三价灭活疫苗免疫效果观察

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染偶蹄动物,以发热,口腔黏膜、舌唇、鼻镜、蹄趾及乳房皮肤发生水泡和溃烂为特征的一种急性、热性、高度接触传染性疾病。世界动物卫生组织将其列为A类动物疫病,我国将其列为一类动物传染病。     

猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫效果评价

选择猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MAY98/BY/2010株)在两个猪场进行不同免疫剂量、不同首免日龄及与高致病性猪蓝耳病疫苗不同免疫次序试验,于加强免疫后14天、28天、42天及60天采血检测抗体,根据检测结果选择最佳免疫程序在4个辐射猪场使用,结果表明,在加强免疫后60天采血检测,抗体合格率为82.9％,超过农业部规定的免疫抗体合格率≥70％,同时也达到江苏省规定的猪口蹄疫疫苗免疫后抗体合格率≥80％要求,说明该疫苗免疫猪群后能产生很好的抗体保护率.     

奶山羊乳房炎灭活疫苗的制备及免疫效果检测

为评估奶山羊乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌为材料,经甲醛37℃灭活,按照6∶1（V／V）与铝胶盐充分混匀,分别经腹股沟皮下、颈部皮下注射途径,免疫泌乳期奶山羊,免疫剂量均为2 mL,共免疫2次,每次间隔14 d。分别在免疫前及第1次免疫后10、24、60、180 d 采集血样和乳样,ELISA 测定抗体效价,用快速诊断液检测隐性乳房炎,统计患病奶山羊的数量。结果显示,与对照组相比,两次免疫后血液及乳汁中针对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌的抗体效价含量均显著增加（P ＜0．05）,抗体维持时间长;颈部皮下免疫组免疫后180 d,腹股沟皮下免疫组免疫后的60 d,隐性乳房炎奶山羊数量均明显下降。结果表明,本研究制备的奶山羊乳房炎疫苗不仅能够刺激机体产生较好的体液免疫应答,而且还对隐性乳房炎有显著的治疗效果。     

牛口蹄疫Asia-Ⅰ型灭活疫苗LPB-E抗体滴度与免疫保护相关性研究

抽取7批牛口蹄疫Asia—Ⅰ型灭活疫苗，用OIE推荐的50％保护（PD50）试验方法进行免疫保护试验；同时，用OIE推荐的液相阻断酶联免疫吸附试验（LPB—E）检验程序测定了7批疫苗免疫保护试验的103头牛的血清抗体滴度。经过对获得数据的统计和处理分析证明，LPB—E抗体滴度与牛免疫保护率存在着显著的正相关性（P〈0．05），相关系数为0．91，概率分析表明，LPB—E抗体滴度≥2．1（1：126）时，95％的免疫牛能够抵抗与疫苗毒株同源的10^4ID50强毒的攻击。     

奶山羊乳房炎二联灭活疫苗的制备及其免疫效果评估

为评估自制乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以乳房炎山羊乳中分离出的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌为材料,经甲醛灭活后与铝胶盐-转移因子佐剂混合,制成奶山羊乳房炎二联灭活疫苗。对泌乳期奶山羊进行2次间隔为15 d的颈部皮下注射接种,每次剂量均为2 mL。在二免后第0、15、35、60天检测乳清和血清中大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抗体效价,并统计隐性乳房炎的检出率。结果显示,两次免疫后奶山羊乳清和血清中的抗体效价均显著升高(P<0.05),在二免后第15天达到峰值,约为对照组抗体效价的32倍;隐性乳房炎检出率显著下降(P<0.01),由免疫前的50%,在二免后第35天下降到了6.25%。结果表明,制备的奶山羊乳房炎二联灭活疫苗不仅能刺激免疫羊产生较为强烈的体液免疫应答,而且对隐性乳房炎有一定的治疗效果。     

口蹄疫病毒重组鸡痘病毒活载体疫苗和DNA疫苗免疫牛的试验研究

将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1—2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1—2A和猪白介索18基因的重组DNA疫苗（pVIRIL18P1），分别以单独及混合的共3种方式接种牛，然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组（vUTAL3CP1／pVIRIL18P1，pVIRIL18P1／vUTAL3CP1）诱导的中和抗体滴度分别达到1：64、1：64和1：54，已接近于常规灭活疫苗水平（1：90），而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多（P〈0．01）。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验，并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。     

三种佐剂对奶山羊乳房炎灭活疫苗免疫效果的影响

为筛选奶山羊乳房炎灭活疫苗的有效佐剂,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌为材料,经甲醛37℃灭活,分别与铝胶盐、蜂胶和转移因子混合,制备铝胶盐佐剂疫苗、蜂胶佐剂疫苗和转移因子佐剂疫苗,免疫泌乳期奶山羊,免疫剂量为2mL,共免疫2次,免疫间隔14d。分别在免疫前及每次免疫后第10天采集血样和乳样,ELISA测定抗体效价,用快速诊断液检测隐性乳房炎,统计隐性乳房炎检出率。结果显示,铝胶盐佐剂疫苗刺激机体产生的抗体水平在首免和二免后均显著高于对照组(P0.05);3个免疫组中,铝胶盐组抗体水平最高,转移因子组次之,蜂胶组则不显著;铝胶盐佐剂疫苗还能显著降低隐性乳房炎的检出率,使隐性乳房炎检出率由免疫前的60%下降至二免后的30%。结果表明,同蜂胶和转移因子相比,铝胶盐佐剂能刺激机体产生更强的体液免疫应答,对隐性乳房炎的治疗效果更显著。     

犬细小病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察

以新分离的两种不同亚型CPV为毒种制备浓缩灭活苗和未浓缩灭活苗,通过与商品化弱毒苗的比较评价灭活疫苗的免疫效果。将CPV-S5（New CPV-2a）与CPV-1401（New CPV-2b）毒株扩大培养后浓缩灭活,制备了两种浓缩与两种未浓缩水溶剂灭活疫苗;将灭活疫苗和商品化二联弱毒苗分别接种5周龄HI阴性幼犬,分别在免疫后7 d、14 d、21 d、28 d测定HI抗体效价;首免36 d后取其中4只犬二免,其他犬进行攻毒。结果显示,各免疫组在第7天HI均高于1∶80,浓缩组显著高于未浓缩组,初步表明CPV灭活苗效果与抗原的浓度有直接的关系;灭活疫苗组与商品化弱毒苗组均差异显著;免疫组的犬均存活,而HI阴性犬死亡,经检测死亡犬CPV为阳性,表明制备的CPV灭活苗产生的特异性免疫应答均能抵抗强毒的攻击,对犬起到良好的免疫保护;二免后其HI抗体效价极显著提高,有效抗体能维持5个月,更有效的对免疫犬群进行保护。     

利什曼原虫灭活苗的免疫效果试验

以小鼠为模型评价了利什曼原虫灭活苗的免疫保护效果。将利什曼原虫甲醛灭活后制备灭活疫苗,单独或与质粒pVAX/mIL-18联合经肌肉注射免疫小鼠,共免疫2次,间隔2周;同时以PBS作为对照。ELISA检测抗体表明,利什曼原虫灭活疫苗单独或与pVAX/mIL-18联合免疫可以诱导小鼠产生较强的抗利什曼原虫的IgG。免疫接种4周后通过尾静脉攻击利什曼原虫,联合免疫的减虫率达47.7%,单独免疫组减虫率达到31.4%;质粒pVAX/mIL-18组减虫率达到29.1%,灭活苗与pVAX/mIL-18联合免疫组肝脏负荷都要显著低于其它组(P0.05)。表明灭活苗与pVAX/mIL-18联合免疫组对Balb/c小鼠有一定的保护力,具有一定预防利什曼原虫感染的作用。     

鸽新城疫(ND)蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验

采用鸽新城疫ND-GS 01株毒为种毒,分别研制出了尿囊液毒蜂胶佐剂灭活疫苗和四元材料(鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜、羊膜)混合病毒蜂胶佐剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经安全性检验、急性毒性试验,免疫抗体消长水平与免疫持续期对比试验,结果表明,四元材料的疫苗与尿囊液疫苗性能一致。     

鸡新城疫－传染性支气管炎－传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫（ND）-传染性支气管炎（IB）-传染性法氏囊病（IBD）三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体（HI Ab）、IB血凝抑制抗体（HI Ab）及IBD中和抗体（NA）,并用传染性法氏囊病病毒（IBDV）强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%（10/10）;不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%（10/10）。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。