花生AFLP指纹图谱

ＡＦＬＰ是一种以ＰＣＲ为基础的ＤＮＡ指纹图谱技术。利用ＡＦＬＰ技术对从国际半干旱所（Ｉ－ＣＲＩＳＡＴ）引进的９份花生抗旱品种绘制指纹图谱,通过引物Ｅ—ＡＣＡ和与之匹配的ＭＣＡＧ和Ｍ—ＣＡＴ,在３００～６０００ｂｐ的范围内共获得１５７７条ＡＦＬＰ扩增产物,每个品种有主带和次带至少７１条之多,其中１０条为多态性的带纹。     

山东花生主栽品种AFLP指纹图谱的构建

利用MseⅠ和EcoRⅠ酶切和9对引物组合对10个山东花生主栽品种进行AFLP分析,9对引物组合共扩增产生169条带,其中55条为多态性的,其多态性带比率为32.54%。至少两对引物组合的配合如E-ACT/M-CAA//E-AAG/M-CAC和E-ACC/M-CAA//E-AAG/M-CAC可将这10个品种完全区分开。     

89份油菜区试品种的AFLP指纹图谱分析

以2004-2005年度全国冬油菜区试的89份参试品种为材料，运用筛选确定的4对AFLP核心引物对这些品种进行分子标记分析，共获得67个多态性片段，其中多态性位点占总扩增位点的27.80％，利用67个多态性片段初步构建了这些品种的AFLP指纹图谱。聚类结果显示，在相似系数为1.00时，89份区试品种完全区分开；同一单位育成的品种的遗传距离较近。对不同类型品种（品系）遗传多样性指数分析, 结果显示，三系杂种的遗传多样性程度最高，常规种居中，两系杂交种最低。     

AFLP技术在马铃薯育种中的应用

AFLP技术因其高效、稳定而被广泛应用于多种作物,本文详细阐述了AFLP技术的原理、特点及其在马铃薯育种中的应用,主要包括遗传多样性分析,构建高密度遗传连锁图,基因定位及克隆,DNA指纹图谱等。     

部分常用水稻品种的指纹图谱构建和遗传多样性分析

以不同类型的90份常用水稻品种为材料,利用筛选的19对SSR多态性引物构建了其指纹图谱,并分析了其遗传多样性。结果表明,19对SSR引物在90份水稻材料中共扩增出71个多态性片段,每个SSR位点可检测到2~7个等位基因,平均为3.74个;多态信息含量(PIC)值在0.228 3~0.790 6之间,平均值为0.542 1;Shannon信息指数(I)在0.244 9~1.796 1之间,平均值为1.021。聚类分析表明,90份材料的遗传相似系数在0.59~1之间,以遗传相似系数值0.66为阈值,可以将供试材料分成5个群,聚类结果较好地体现了各品种之间的亲缘关系。     

78份杧果种质资源AFLP分析

利用AFLP标记技术对78份杧果种质进行遗传多样性分析,结果显示,9对AFLP引物共产生908个等位位点,平均每对引物产生100.89个等位位点,多态性带为794条,共产生42个特异性位点,能区分21份种质,单态带25条,缺失带17条,特异性条带比例为4.63％,多态性比例为87.44％。不同种质间的相似系数范围是0.603~0.913,平均相似系数为0.735。聚类分析结果显示,以遗传相似性系数0.726为阈值,供试的78份种质可分成5个类群。主成分分析结果将供试的78份种质可分成4个类群,通过空间距离更能直观地表现种质间关系远近。     

新疆彩色棉品种指纹图谱构建与遗传多样性分析

棉花是重要的纤维作物，天然彩色棉具有环保、健康等优点。为保障新疆彩色棉品种权益，快速准确鉴定品种，加快品种选育进程，本研究利用分子标记技术为27份新彩棉品种构建DNA指纹图谱和专属二维码，并进行遗传多样性分析。利用筛选出的52对多态性高、带型清晰稳定的分子标记，在27份彩色棉品种共扩增出155个多态性带型，每对引物检测到的多态性带型个数变幅为2～7，平均为2.98；52对引物的多态性信息含量（Polymorphism information content，PIC）值为0.137 1～0.776 4，平均值为0.454 3。27份新彩棉品种中，12个品种具有特征SSR（Simple sequence repeat，简单重复序列）引物，7对SSR引物组合可将其他15个品种区分开；用9对引物组合即可将27个新彩棉品种完全区分开。利用NTSYS 2.1软件聚类分析显示，27个新彩棉品种遗传相似系数为0.573 3～0.955 9，平均值为0.764 6，表明现有新彩棉品种遗传基础较丰富，绿色棉遗传多样性较棕色棉更高；聚类分析显示27个新彩棉品种可分为3类，品种间的亲缘关系与原品种选育系谱较为吻合。     

甜菜无融合生殖系AFLP指纹图谱试验体系的建立

通过利用单酶切和单接头连接体系,在T4连接酶作用下进行连接,以连接产物为模板,在选择引物和ExTaq聚合酶作用下进行PCR特异扩增,扩增产物用琼脂糖凝胶检测分析。通过对甜菜叶片基因组DNA的分析,确立了适合于甜菜无融合生殖系的最适宜的AFLP试验体系。该方法操作简单、费用低,有利于该项技术的推广和应用。     

基于SSR标记的向日葵DNA指纹图谱构建

本研究利用SSR分子标记技术对124份向日葵参试材料和育成品种进行遗传多样性、亲缘关系分析及指纹图谱构建，旨在为向日葵育种、品种纯度鉴定提供参考。利用19对条带清晰、多态性稳定的SSR引物对群体材料进行扩增分析，发现这些引物的多态信息含量变化范围为0.30~0.62，平均值为0.41。聚类分析结果表明，参试材料间遗传多样性相对较低，其最小遗传相似系数为0.62，亲缘关系与地理来源关系不明显。构建了124份材料的指纹图谱，结果表明除SPQ3和SY7外，19对引物能很好地将其余122份材料鉴别出来，但部分位点具有高度的一致性，基因来源范围较小。以上研究结果表明，参试向日葵材料遗传背景较为狭窄，在育种中应拓宽亲本来源，提高遗传多样性。     

黑老虎新品系的SSR指纹图谱构建

由于黑老虎种质的特异性评价以其果实及经济性状为主，未结实时仅依据形态性状较难区分，因此，构建黑老虎DNA指纹图谱有助于黑老虎种质的快速精准鉴定。选择15对引物对20个黑老虎品系进行SSR分析，依据Nei’s(1972)遗传距离，采用非加权组平均法（UPGMA）进行聚类分析，通过位点间的组合构建SSR指纹图谱。结果表明：15对引物在20个黑老虎品系中共扩增出15个位点75个等位基因，每个位点的等位基因数为2～15，其Shannon信息指数（I）为0.199～2.456，多态信息含量（PIC）为0.095～0.894。20个品系间遗传相似系数为0.328～0.891，基于UPGMA聚类可分为2个类群。所有15个位点均不能单独完全区分20个黑老虎品系，以KCZ023位点的区分能力最强；KCZ023与KCZ135、KCZ023与KCZ100以及KCZ023与KCZ147的2位点组合以及28个3位点组合能够将20个品系完全区分。20个黑老虎品系的遗传多样性较丰富，应用3个2位点组合和28个3位点组合能够完全区分各品系，该研究结果可为黑老虎种质鉴定以及杂交亲本选配提供科学依据。     

SSR和AFLP分子标记鉴定巴西橡胶树种质资源的比较研究

选用178份巴西橡胶树种质材料,采用SSR和AFLP分子标记技术对巴西橡胶树种质资源进行鉴定,探讨2种方法的应用效果并加以比较分析。结果显示:利用多态性强的19对SSR引物,检测到92个等位基因;用25对AFLP引物组,检测到702条有多态性的带。SSR位点的平均多态性信息量(PIC)值为0.46,而AFLP多态性带比例是54.88%,AFLP比SSR分子标记具有更高的多态性。结果说明,AFLP标记比SSR标记更适合于巴西橡胶树种质材料的鉴定和保护,同时进一步验证了在作物遗传资源的研究中,采用多种分子标记方法可以获得更加准确的研究数据。     

巴西橡胶树HbAGL62基因的克隆及表达分析

从巴西橡胶树早花材料与普通种质cDNA差减文库中筛选到一个具有MADS保守序列的EST基因片段,根据该片段序列信息设计特异引物,利用RACE进行特异片段的5′扩增,获得长度为935 bp的HbAGL62基因克隆。生物信息学分析表明,该基因包含795 bp的开放阅读框,编码265个氨基酸,含有MADS保守结构域,与拟南芥、葡萄和苜蓿AGL62基因进化距离最近。实时荧光定量PCR表明,HbAGL62在橡胶树根和皮中不表达,在花和胚中表达,存在组织特异性表达;在叶芽分化阶段不表达,花芽分化时高效表达,表明HbAGL62与橡胶树开花调控有重要关系。     

种植年限对胶园土壤剖面有机碳分布特征的影响

通过剖面直接实测法,研究幼树期(4 a)、旺产期(12 a和19 a)3种不同树龄橡胶林土壤有机碳变化特征及其与土壤pH、全氮、C/N比的相关关系。结果表明:(1)4、12、19 a橡胶林土壤有机碳含量均随着土层深度的增加而降低;3个树龄橡胶林土壤有机碳总体大小顺序为12 a>4 a>19 a。(2)橡胶林土壤呈酸性反应,且土壤剖面有机碳含量均随深度呈下降趋势,而土壤pH随深度呈上升趋势。土壤不同层次有机碳含量与pH呈显著负相关(R2≥0.708 8)。(3)不同树龄橡胶林土壤有机碳与全氮之间均呈显著的线性正相关,土壤C/N比为8.19~16.49,有利于有机质矿化过程中养分的释放。橡胶林土壤C/N比随树龄的增长不断下降,说明树龄大小对土壤碳氮含量在土壤剖面垂直分布上有一定的影响。     

老龄橡胶树不同器官含碳率分析

采用收获法测定与分析30 a老龄橡胶树不同器官含碳率.结果表明:(1)橡胶林地上部分各器官含碳率依次为:树叶(52.90％)＞树干(48.84％)＞侧枝(47.46％)＞树皮(46.20％)＞嫩枝(45.20％),其中树叶含碳率显著高于其它器官；橡胶林地面部分凋落物各组分的含碳率大小为,落果(55.30％)＞落叶(53...     

用EST-SSR标记分析巴西橡胶树的遗传多样性

利用19对EST-SSRs引物对41份巴西橡胶树材料(6个野生材料和35个栽培种)进行遗传多样性分析.结果表明:19对引物均获得了预期的扩增结果,得到92个多态性位点,每对引物检测到的等位基因数为2～7个,平均为4.84个.在相似系数为0.64的水平上,野生材料和栽培种区分开来,在相似系数0.75的水平上,又可将栽培种材料分为四个类群;栽培种和野生材料间的遗传距离在0.11～1.16之间,栽培种间遗传距离较小,野生材料间遗传距离相对较大.在栽培种和野生材料之间,遗传距离最大的是AC/T/15/114与PR261(1.16),最小的是保亭155与热研7-20-59(0.11).     

橡胶树HbFCA启动子的克隆及其在橡胶树中的表达分析

FCA(Flowering control locus A)基因是自主开花调控途径中的关键调控基因之一,同时,FCA功能具有多样性.本研究中,利用TAIL-PCR方法获得2039 bp橡胶树FCA基因的启动子序列,生物信息学分析发现该启动子中具有28种顺式调控元件,其中主要为基因表达调控核心元件(TAAT-box和CAAT-box)和光响应调控元件.此外,还含有激素、胁迫信号和光周期的顺式作用元件.同时,将橡胶树FCA启动子与GUS基因融合构建植物表达载体转化橡胶树,发现在胚状体、叶片和树根中GUS基因均强烈表达,但在茎段中表达较弱,说明橡胶树FCA基因除参与开花调控外,还可能参与多种发育过程的调控.本研究获得的HbFCA启动子转化橡胶树植株为进一步分析Hb FCA基因功能及表达调控模式提供了遗传材料.     

巴西橡胶树乳管伤口堵塞物形成调节的研究进展

巴西橡胶树是天然橡胶的主要来源,割胶是从橡胶树中获取天然橡胶的唯一途径。割胶后乳管伤口堵塞物的形成使排胶速度迅速降低,产量减少。对堵塞物的形成和调控的研究不仅具有重要的理论意义,也具有重要的应用价值。本文从堵塞物对排胶的影响、堵塞物的成分、堵塞物形成和调控的相关因素等方面进行了综述,为橡胶树排胶生理学的深入研究提供参考。     

橡胶树RRIM600品系的内生真菌多样性

从海南省儋州市的橡胶树RRIM600品系上,采集花、叶、枝、果、根组织分离内生真菌,共分离了504个组织块,获得内生真菌545株.根据形态特征对482株产生孢子的菌株进行鉴定,分别归入21个属,大部分为半知菌,共19属,其中丝孢纲真菌12属,腔孢纲真菌7属;少数为子囊菌,共2属.初步研究结果表明:拟茎点霉属(Phmopsis)为橡胶树5种组织中的优势属,刺盘孢属(Colletorichum)为叶片组织中的优势属,侧多隔孢属(Pleurophragmium)为根组织中的优势属.这5种组织中的内生真菌定殖率为50%～100%、分离率为0.74～1.52.内生真菌群落组成的相似性比较结果表明,部分内生真菌具有一定的组织偏好性.     

巴西橡胶树HbMET的克隆与表达分析

通过同源克隆和RACE方法获得了巴西橡胶树DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase,MET)基因(Hb MET)。Hb MET长4 896 bp,含有4 635 bp的阅读框架,编码1 545个氨基酸。蛋白分子量174.36 ku,等电点为6.36。氨基酸序列与可可、毛果杨、黄瓜、拟南芥、碧桃、葡萄和烟草等物种的MET家族成员的同源性分别为73%、77%、74%、56%、72%和68%。进化树分析表明,Hb MET氨基酸序列与毛果杨的MET亲缘关系最近。Hb MET在巴西橡胶树的根、树皮、叶、胶乳中均有表达,其中在胶乳中表达量最低;Hb MET在橡胶树自根幼态无性系的胶乳中表达比老态无性系胶乳中的表达低。     

基于SSR标记的橡胶树无性系鉴定方法的建立

从88对橡胶树SSR引物中筛选出5对产物清晰、扩增稳定的引物.采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合快速银染检测的方法,构建了87份橡胶树的DNA指纹图谱.5对引物共扩增出16条带,平均每对引物可扩增出3.2条带,多态性条带为15条,扩增条带分布在148～342 bp,无性系之间只存在1～2个片段差异,说明遗传差异小;根据建立的无性系数字指纹图谱,能逐一区分65个无性系,表明应用SSR分子标记技术进行橡胶树无性系的鉴定是可行的.