微卫星标记BMSS2508在4个山羊品种中的DNA多态性

为寻找山羊繁殖性能的多胎性分子标记,根据比较基因组学方法,选用位于绵羊6号染色体上与多胎基因(FEC^B)紧密连锁的微卫星标记BMS2508,分别检测了湘东黑山羊、南江黄羊、贵州黑山羊、波尔山羊该微卫星位点的等位基因频率、多态信息含量、有效等位基因数和杂合度．研究结果表明：BMS2508位点的多态信息含量／有效等位基因数／平均杂合度在湘东黑山羊、南江黄羊、贵州黑山羊、波尔山羊中分别为0．5927／2．6822／0．6272,0．7002／3．5366／0．7172,0．5765／2．3653／0．5772,0．7506／4．3295／0．7690．故该微卫星位点在4个山羊品种中具有比较丰富的遗传多态性,可用于山羊遗传多态性评估,也为研究该微卫星位点的DNA多态性与山羊繁殖性能的相关打下了基础．     

波尔山羊随机扩增多态DNA标记与公羊繁殖力的关系

用 10个随机引物对 11个波尔山羊精液样本DNA进行随机扩增 ,得到 113个标记 ,其中多态标记 31个。分析DNA多态标记与公羊总采精量、平均每次射精量、冻前活力、冻后活力、稀释倍数等的关系 ,发现OPK0 9 4标记阳性组山羊总采精量和平均每次射精量显著高于阴性组山羊 (P <0 0 5 ) ,而OPH14 3标记阳性组山羊平均每次射精量和OPH14 5标记阳性组山羊冻后活力均显著低于阴性组山羊 (P <0 0 5 )。     

猪不同基因组DNA模板来源和浓度与微卫星位点扩增效果的比较研究

[目的]探讨全部使用猪毛发作为试验材料进行遗传多样性研究的可行性。[方法]以贵州黔北黑猪中的3头成年母猪为试材,分别拔取100、200根毛发和抽取5 ml全血进行DNA提取。以微卫星引物S0225和S0227为引物,设置1.0、2.5、5.0 ng/μl 3种模板浓度进行PCR扩增。[结果]采用2.5、5.0 ng/μl的模板浓度均可获得较好的PCR产物,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增基因有较好的分辨效果。毛发DNA和血样DNA的PCR产物数量和质量均无明显差异。毛发数量与所提取DNA的浓度无直接关系。利用21个全毛样PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,均可观察到清晰的条带。[结论]该研究进一步证明全毛样DNA可作为猪遗传多样性研究的材料。     

9个山羊品种微卫星DNA遗传多样性分析

为了研究湘东黑山羊、川东白山羊、云岭山羊、板角山羊、黄淮山羊、圭山山羊、贵州白山羊、安徽白山羊和波尔山羊9个山羊品种的遗传多样性,利用微卫星标记技术检测了4个微卫星座位（OarAE101、OarHH55、BM1329、BM143）的多态性。结果表明,9个山羊品种的4个微卫星座位中共检测到53个等位基因,9个山羊品种的期望杂合度（He）和观察杂合度（Ho）均在0.850以上,属于高杂合群体;9个山羊品种4个微卫星座位的PIC均值在0.820以上,属于高度多态微卫星DNA座位,可提供大量的遗传信息,具有遗传多样性评价优势,其中 PIC值最高的是圭山山羊（PIC=0.857）;主成分分析与UPGMA 聚类分析结果显示贵州白山羊、云岭山羊与圭山山羊亲缘关系较近,川东白山羊与板角山羊亲缘关系较近,湘东黑山羊、黄淮山羊与安徽白山羊亲缘关系较近,引入的波尔山羊自成一类,它与其他山羊亲缘关系较远。综上,9个山羊品种均具有较高的遗传多样性,其中圭山山羊的遗传多样性最丰富,贵州白山羊遗传多样性最低;各品种之间的亲缘关系符合不同品种的地理位置与育成史。     

海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

从海带孢子体的酶解单细胞中提取的基因DNA,可用于随机扩增多态DNA（RAPD）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应体系为：0.2μmol/L引物,1.5mmol/LMg^2 ,100μmol/L dNTP,1.0U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA,优化反应程序为：94℃变性2min,接着45个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,最后72℃延伸10min。在此优化条件下得到的RAPD图谱的较好的特异性和重复性,为海带遗传多样性,种质鉴定,分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。     

海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

从海带孢子体的酶解单细胞中提取的基因DNA,可用于随机扩增多态DNA（RAPD）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应体系为：0.2μmol/L引物,1.5mmol/LMg^2 ,100μmol/L dNTP,1.0U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA,优化反应程序为：94℃变性2min,接着45个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,最后72℃延伸10min。在此优化条件下得到的RAPD图谱的较好的特异性和重复性,为海带遗传多样性,种质鉴定,分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。     

藏山羊RAPD及RFLP标记的初步研究

利用简单随机抽样获得亚东山羊（ｎ＝６）,高原型藏山羊（ｎ＝１５）样本,以吕梁山羊为对照进行基因组ＤＮＡＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ标记的分析。结果表明,序列为５′－ＴＧＧＴＧ－ＣＡＣＴＣ－３′的随机引物可以作为区分亚东山羊与高原型藏山羊的标记引物,Ｓ及ＭＡＰＤ在某种程度上揭示了类群间遗传相似性;ＥｃｏＲⅠ,ＨａｅⅢ单酶切,ＥｃｏＲⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切亚东山羊和高原型藏山羊基因组ＤＮＡ分别产生可观察的ＲＦＬＰ条带。     

微卫星DNA的研究进展

微卫星DNA技术是现有分子标记中最有价值的一种,同时也提供了家禽遗传育种研究一种新的手段.综述了微卫星DNA研究的现状,并对该技术在以后的运用与发展进行了探讨.     

利用微卫星和线粒体DNA标记研究山羊群体间的遗传关系

利用微卫星和线粒体DNA分析山羊的遗传多样性及系统进化关系,用25个微卫星位点分析了安哥拉山羊、山东莱芜黑山羊、罕山白绒山羊、太行山羊及乌珠穆沁绒山羊这5个山羊品种的遗传多样性,利用共祖遗传距离的UPGMA聚类表明遗传距离和地理距离是一致的,如内蒙的罕山白绒山羊和乌珠穆沁绒山羊聚到一起.利用线粒体DNA分析安哥拉山羊、山东莱芜黑山羊、鲁北白山羊、太行山羊及乌珠穆沁绒山羊,揭示这5个山羊品种分成A和C2个支系,并进行了群体结构和群体扩张分析.通过比较2种分子标记的分析结果,发现利用微卫星来研究群体的遗传多样性及品种间的关系具有较高的准确性,而线粒体在研究群体系统进化具有一定的优势,在分析品种间关系方面可能不是理想标记.     

雷州山羊和隆林山羊遗传多样性的微卫星分析

为了调查中国热带、亚热带主要山羊品种的遗传资源现状,应用14对微卫星引物,检测了隆林山羊和雷州山羊不同分布地区的群体遗传多样性水平。隆林山羊(柳州)、隆林山羊(百棚)、雷州山羊(徐闻)、雷州山羊(海南)各群体平均多态信息含量(PIC)分别为0.645、0.600、0.483、0.518;平均杂合度(H)分别为0.281、0.421、0.121、0.157;平均等位基因数(k)分别为5.17、4.93、4.64、4.5,3组数据综合说明两个山羊品种遗传多样性相对匮乏,群体遗传变异较低;NJ法聚类显示,隆林山羊两个群体聚为一类,再与雷州山羊(徐闻)聚在一起,最后为雷州山羊(海南),这与两个品种的来源及地理分布基本一致。研究结果为中国热带、亚热带山羊品种资源开发利用提供了基础资料和科学数据。     

4个微卫星标记在波尔山羊中的遗传多态性研究

根据比较基因组学方法,利用绵羊6号染色体上与主效多胎基因(FecB)紧密连锁的4个微卫星标记OarAE101、OarHH55、BM1329和BMS2508,对波尔山羊进行了等位基因频率、多态信息含量、有效等位基因数和杂合度的遗传检测。结果表明,4个微卫星位点在波尔山羊上多态性丰富;OarAE101基因座的多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)、平均杂合度(He)分别为0.847 4,6.553 1和0.862 8;OarHH55基因座分别为0.767 6,4.302 9和0.796 8;BM1329基因座分别为0.841 4,6.305 2和0.857 6;BMS2508基因座分别为0.783 1,4.6104和0.8096。4个微卫星位点均为高度多态位点,可用于波尔山羊遗传多态性评估和多胎性状研究。     

Study on polymorphisms of microsatellite DNA of six Chinese indigenous sheep and goat breeds

The genomes of six populations were screened using microsatellites as molecular markers, including Ujmuqin sheep, small-tailed Han sheep, Tan sheep, Hu sheep, Tong sheep and Yangtse River Delta (YRD) white goat. A total of seven microsatellite markers were used and genetic diversity and genetic distance were also determined. The results showed that there were 224 alleles in six populations, all seven loci showed polymorphism in all populations. The average heterozygosity of all populations was 0.949 9, and the mean polymorphism information content (PIC) of all six populations was 0.842 5–0.929 4. The six sheep (goat) popualtions were lowly differentiated with all loci, and the coefficient of phaenotype differentiation (Fst) was 2.6%, which was consistent with the coefficient of gene differentiation (Gst). The global heterozygote deficit across of all populations (Fit) amounted to 0.5%. The overall significant deficit of heterozygotes because of inbreeding within breeds (Fis) amounted to −2.2%. Two Unweighted Pair-group Method using Arithmetic Averages (UPGMA) dendrograms were constructed on the basis of Nei’s standard genetic distance (DS) and Nei’s genetic distance (DA) respectively. Hu sheep and Tong sheep were grouped at first, Ujmuqin sheep and small-tailed Han sheep clustered and then clustered with Tan sheep. Finally, Yangtse River Delta white goat joined in with all above. From this study, Ujmuqin sheep belongs to “Mongolia sheep” group, which corresponds with the historical records exactly. Ujmuqin sheep and small-tailed Han sheep, Tan sheep, Hu sheep and Tong sheep all vest in the “Mongolia sheep” group.     

藏马微卫星标记遗传多样性研究

为研究西藏藏马种群的微卫星多态性,应用生物素标记的微卫星探针与藏马基因组酶切片段杂交,通过链霉亲和素包被的磁珠捕获150～1 000 bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pEASY-T1载体中,构建藏马基因组微卫星富集文库。结果表明:从2 380个转化子中随机挑取112个阳性克隆进行测序后,经筛选比对发现,从62个微卫星中筛选出39个在马属基因组卫星库中未被检测到的微卫星;成功设计了10对藏马微卫星引物,经聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法检测到3个具有多态性的微卫星标记,其中有2个多态性信息含量(PIC)值均大于0.5。因此,这3个微卫星标记可应用于藏马遗传多态性检测、种群遗传结构等方面研究,为藏马遗传连锁图谱的构建、辅助育种、群体遗传学分析、基因组结构分析以及分子进化研究等提供依据。     

西镇牛微卫星DNA与生长发育性状的关联性分析

【目的】分析12个微卫星DNA与西镇牛长发育性状的关联性,为西镇牛品种资源保护和开发利用提供理论依据。【方法】测定西镇牛的体高、体长、胸围、管围、腰角宽和体质量。利用12对微卫星引物,采用PCR扩增和非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳技术,对48头西镇牛母牛进行了遗传多样性检测,并统计分析各位点各种基因型群体与体尺性状之间的效应关系。【结果】12个微卫星位点各基因型与西镇牛生长发育性状具有关联性。IDVGA2、BM2113、DVGA55、ETH225、HEL9、ILSTS005、BM1824位点与体高,BM2113、DVGA55、ETH225、HEL9、ILSTS005、ETH10、DAVG44位点与体长,IDVGA2、DVGA55、HEL9、ILST093、IDVGA27、BM1824位点与胸围,IDVGA2、ETH225、DAVG44位点与管围,BM2113、DVGA55、ETH225、HEL9、BM1905、ILSTS005、ILST093、ETH10位点与腰角宽,IDVGA2、BM2113、DVGA55、ETH225、HEL9、ILST093、BM1824位点与体质量具有显著或极显著的效应关系。【结论】筛选出了对西镇牛生长发育性状具有正效应的等位基因45个,具有负效应的等位基因40个,可用于指导西镇牛育种实践。     

用微卫星标记分析福建地方山羊品种及波尔山羊的遗传多样性

用OARAE101、OARFCB11、MCM218、MCM38、BMS2508、BM143、INRA063及MAF65等8个微卫星座位,对福清山羊、戴云山羊及波尔山羊11个群体350份样本进行遗传多样性检测.结果表明:(1)11群体共检测到69个等位基因,平均每个座位为8.60个,其中23个等位基因为11个群体所共有,4个等位基因为福建地方山羊所特有;(2)福清山羊、戴云山羊和波尔山羊总的有效等位基因数分别为5.33、4.58和4.80;(3)福清山羊的平均杂合度为0.7889,戴云山羊为0.7745,波尔山羊为0.7930;(4)福清山羊与戴云山羊Nei氏标准遗传距离为0.2415-0.3485,与波尔山羊为0.4552-0.5767,戴云山羊与波尔山羊为0.5845-0.7026.本结果表明福建地方山羊的遗传多样性丰富,具有较高的选择潜力.     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

藏绵羊和藏山羊小肠黏膜结构的比较研究

[目的]探讨藏绵羊和藏山羊在高寒低氧环境中小肠黏膜结构的适应特征。[方法]采用组织学和图像分析法,对4只藏绵羊和4只藏山羊小肠不同肠段的黏膜结构的形态特征进行比较。[结果]藏山羊小肠绒毛长度和V/C值均显著高于藏绵羊(P0.05),而藏绵羊小肠黏膜的厚度大于藏山羊,但差异不显著(P0.05),藏绵羊小肠肌层的厚度显著大于藏山羊的(P0.05)。[结论]藏山羊的消化吸收功能强于藏绵羊。