用平板式超滤机浓缩鸡新城疫病毒及法氏囊病毒试验效果观察

采用ＵＦ１型工业平板式超滤机对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）及法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）进行了初步的浓缩试验。该设备浓缩工艺简单、效率高,浓缩液ＨＡ效价与未浓缩液比较按浓缩比率相应上升。用浓缩液与未浓缩液制成灭活疫苗免疫鸡,均可获得１００％抵抗ＮＤ及ＩＢＤ的保护力,以浓缩苗免疫的ＮＤＨＩ抗体及ＩＢＤ中和抗体滴度明显高于未浓缩苗。试验表明,浓缩苗安全有效,并优于未浓缩苗。     

用平反式超滤机浓缩鸡新城疫病毒及法氏囊病毒试验效果观察

采用ＵＦ－１型工业平板式超滤机对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）及法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）进行了初步的浓缩试验。该调和浓缩工艺简单、效率高，浓缩液ＨＡ液价与未浓缩液比较按浓缩比率相应上升。用浓缩液与未浓缩液制成灭活疫苗免疫鸡，均可获得１００％抵抗ＮＤ及ＩＢＤ的保护力，以浓缩苗免疫的ＤＮ ＨＩ抗体及ＩＢＤ中和抗体滴度明显高于未浓缩苗。试验表明，浓缩苗安全有效，并优于未浓缩苗。     

干酪乳杆菌LC2W胞外多糖提取工艺研究

对影响干酪乳杆菌LC2W胞外多糖提取的主要工艺参数进行了研究。发酵液经超滤浓缩,三氯乙酸脱蛋白,乙醇沉淀等处理,得到粗多糖。单因素和正交试验结果表明,用截留分子量为10 kDa的超滤膜将发酵上清液浓缩4倍后,用终浓度6%的三氯乙酸脱蛋白,再用5倍体积95%乙醇4℃沉淀24 h,多糖提取效果较佳。在此条件下,蛋白脱除率可达88.35%,EPS提取率可达92.17%。     

花叶毛白杨叶片致黄因子的病毒学研究

为了探索花叶毛白杨的花叶形成因子,以花叶毛白杨为研究材料,采用接种鉴定、ELISA测定法、病毒双链RNA检测及RT-PCR检测4种方法对花叶毛白杨的致黄因子进行病毒学鉴定。结果表明：（1）花叶毛白杨花叶样品过滤液经对指示植物烟草（Nicotiana tabacum）、大豆（Glycine max）及北京杨幼苗（Populus beijingensis）摩擦接种或注射接种后,未出现皱折、局部失绿等症状。（2）花叶毛白杨花叶样品过滤液选用24种抗血清进行酶联免疫检测,均未得到阳性结果。（3）花叶毛白杨花叶样品dsRNA电泳图未出现明亮条带。（4）RT-PCR未得到扩增产物。花叶毛白杨的叶片致黄因子不是由植物病毒引起。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究

用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒，分别接种鸡胚或鸭胚，制备各种病毒抗原液，经福尔马林灭活后，采用FIL TRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩，然后按一定比例混合，以司本80及吐温80为乳化剂，10号白油为佐剂，制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定，证明本疫苗安全、无任何副作用；免疫10～14d后产生免疫力；ND部分效检，攻毒100％保护，每羽份含ND效价达50～123PD50；IB部分效检，免疫21～28d后攻毒保护率达80％～100％，IBHI效价≥1：64；EDS76效检。免疫后21d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80%～100%。     

张家口市马铃薯脱毒种薯病毒检测试验研究

本试验应用酶联免疫吸附技术对36个马铃薯脱毒种苗样品进行PVX、PVY、PVS、PLRV 4种病毒检测,未检测出PVX、PVS和PLRV病毒,表明这3种病毒脱毒情况良好;PVY病毒有1份样品检测结果呈阳性,需重点对PVY病毒进行监测,阻止带毒瓶苗进入生产,从源头上控制种薯质量。     

喷施浓缩沼液对棉花幼苗生长发育和生理特性的影响

【目的】本试验研究喷施浓缩沼液对棉花幼苗生长发育及生理特性的影响,为浓缩沼液水溶肥的合理施用提供理论依据。【方法】采用5种不同用量的浓缩沼液喷施盆栽棉花幼苗,研究不同喷施量(163 m L·hm~(-2)、326 m L·hm~(-2),489 m L·hm~(-2)、668 m L·hm~(-2)、815 m L·hm~(-2))和喷施后时间(喷施后第2天、第4天、第6天)对棉花幼苗生长发育和生理指标的影响。【结果】结果表明:适宜喷施量的浓缩沼液对棉花生长发育有促进作用,过量的浓缩沼液则会抑制棉苗生长,喷施489 m L·hm~(-2)浓缩沼液的株高、单株干物质质量、叶面积均最高,两批次试验喷施后第6天的平均值分别比对照高21.15%,35.95%,18.84%。喷施浓缩沼液还能提高棉花苗期叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白的含量,2个批次试验均以喷施489 m L·hm~(-2)浓缩沼液的最高,平均值分别比对照高18.84%,24.03%,3.16%。幼苗叶面喷施浓缩沼液后见效快,尤其以0~4 d内的效果最佳。【结论】适宜用量的浓缩沼液对棉花幼苗的生长发育和生理特性均有积极影响,利于棉花形成壮苗,为棉花后期生长打下良好基础。     

草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测

抗原表位是抗体识别并结合抗原的部位。抗原表位的预测有助于重组抗原的设计、快速筛选和高活性抗原的快速制备。通过DNAStar、Ex PASy、TMHMM Sever2.0和IEDB等软件对草莓轻型黄边病毒的外壳蛋白的二级结构、理化及生物学性质进行了分析。分析结果显示,草莓轻型黄边病毒的外壳蛋白中不存在跨膜区域;平均亲水性为-0.252,属于可溶性蛋白;潜在的抗原表位有5个,平均抗原指数为0.026 5~0.077 3。预测的上述5个抗原表位是否有抗原活性及其活性强弱仍有待于相应的试验论证。     

猪瘟重组蛋白E2的兔体免疫保护试验

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应.本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(Ⅱ)攻击免疫及对照试验家兔.根据T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及攻毒保护试验对所制备的抗原进行了全面的评价.结果表明,该免疫原具有良好的免疫原性,而且能保护免疫家兔为4/4.可以进行下一步的开发和利用价值.以期该疫苗能为猪瘟的防治做出贡献.     

高通量测序技术研究棉蚜携带病毒种类

棉蚜是传播寄主植物病毒的主要昆虫媒介,但对棉蚜携带的病毒种类及病毒基因组序列信息了解较少。本文利用高通量测序技术,对棉蚜田间自然种群所携带的病毒基因序列进行发掘、鉴定和分类。通过对田间苗蚜和伏蚜转录组数据进行分析,获得18种病毒基因组序列,其中17种病毒为未报道过基因组信息的种类。在18种病毒中,有13种为正链RNA病毒。苗蚜携带病毒的种类和数量都远远高于伏蚜,苗蚜携带全部的18种病毒;伏蚜仅携带8种,而且携带病毒的FPKM(Fragments per kb per million fragments)值较低。本研究丰富了棉蚜所携带的病毒基因组信息,为棉蚜传毒机制研究打下基础。     

Recent Advances in Transgenic Plant-derived Vaccines

Along with the development of recombinant DNA technology and the deepening of genetic engineering vaccine research,plant genetic engineering has become the focus of vaccine research gradually,whereas the defects of traditional vaccine have appeared day by day.So far,the vaccines expressed in transgenic plants mainly include Escherichia coli heat-labile enterotoxin(Etx)subunit B,Hepatitis B Surface Antigen(HBsAg),Norwalk virus capsid protein(NVCP),foot-and-mouth disease(FMD),rabies virus glycoprotein(RVG),Streptococcus mutans surface proteins(SmSP)and AIDS viral antigens(AVA).In comparison with traditional vaccines,transgenic plant vaccine is cheaper,safer,more efficient,easier for transportation and storage.This paper gives a review on the research progress of plant genetic engineering vaccines,and proposes the issues encountering the development process and corresponding countermeasures,as well as its prospect.     

传染性法氏囊病毒安徽超强毒株的分离及分子鉴定

应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种﹑琼脂扩散试验、电镜观察,从临床病鸡的法氏囊组织分别分离到3株传染性法氏囊病病毒（IBDV）CH03、JG04和QJ04株,对4周龄未免疫鸡的攻毒致死率分别为92%、83%、67%,对鸡胚的半数致死量（ELD50）分别为10-6.8/0.2ml、10-5.4/0.2ml、10-4.6/0.2ml;应用逆转录酶-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增的IBDV VP2基因高变区（vVP2）及其序列分析的结果表明,序列共有492个核苷酸,编码164个氨基酸。关键位点的氨基酸变化特征：第一亲水区P222A、疏水区的K249Q和S254G、N279D和T284A,与超强毒参考株UK661﹑HK46﹑OKYM和CH1-97极为相似,而与致弱株Cu-1）及变异毒株Var-E存在明显差异。研究结果表明,获得的3株IBDV分离株均属超强毒株。     

鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立

根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV) N基因序列（FJ767920）,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过对RT-PCR扩增条件的优化,建立了一种快速检测IBV的RT-PCR方法。应用该方法成功地从IBV M41和河南株HN99中扩增出318 bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。将回收的RT-PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性。对IBV的最低检出量为0.6 pg的cDNA。经临床初步应用表明,本方法的建立对IBV的早期诊断和临床检测具有快速、灵敏、特异、经济的特点。     

几种中药在鸡胚上对鸡常见病毒的作用效果试验

本实验用水煎法从中药桑叶、茵陈蒿、马齿苋中提取全成分,用醇提法从中药野菊花中提取有效成分,并以其为实验药物,观察在10--12日龄鸡胚上对禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,几种中药对以上病毒均具有一定的阻断和抑制作用。其中,茵陈蒿全成分提取液对AIV和NDV的阻断和抑制作用较为突出。     

鸡传染性支气管炎病毒HN104株的鉴定及S1基因的分子特征

2010年4月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株病毒。通过SPF鸡胚致侏儒实验,鸡红细胞凝集试验,干扰新城疫病毒增殖试验和RT-PCR试验确认该病毒为一变异的鸡传染性支气管炎病毒。该病毒尿囊液凝集鸡红细胞的HA价为0,经胰酶处理后为27;EID50（鸡胚半数感染量）为10－5.5/0.1 mL;能够显著干扰鸡新城疫病毒La Sota株在鸡胚中的增殖;动物回归试验结果显示该病毒可致SPF雏鸡出现肾脏肿大,呈花斑肾。其S1基因全长为1617 bp,经序列分析发现与鸡传染性支气管炎疫苗Massachusetts株、T株、4/91株亲缘关系较远低于78%。     

含有不同启动子、WPRE以及ITRs对重组杆状病毒表达新城疫F蛋白的影响

为了提高基因工程疫苗对新城疫病毒F蛋白的表达能力,从而为研制高效基因工程疫苗奠定了基础。利用Western blot技术检测含有不同启动子与表达元件的重组杆状病毒,在中国仓鼠卵巢细胞中其F蛋白的表达量的差异。Western blot结果显示,含有CMV立即早期增强子区与鸡肌动蛋白启动子区的复合启动子的质粒表达F蛋白量较含人巨细胞病毒立即早期启动子(CMV)的质粒提高了24.52%~231.18%,含有土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)能够提高F蛋白表达量2.9~8.6倍,而腺伴随病毒末端反向重复序列(ITRs)对质粒F蛋白表达量提高1.95%~9.27%。CBA启动子的启动能力远高于CMV的启动能力,调控元件WPRE能够显著提高F蛋白的表达量,而ITRs元件对于F蛋白的表达量未产生显著提高。     

中药鱼腥草注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第1组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log₂。第Ⅲ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log₂。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明：鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药紫草注射液对鸡胚接种后抗新城疫病毒的研究

为研究紫草对新城疫病毒的抑制作用。用鸡胚培养法和血凝试验,测定了4组试验中药紫草对鸡新城疫病毒的作用效果。结果显示：第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药紫草混合液,HA滴度0;第Ⅱ组接种病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度4 log2;第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度8 log2;第Ⅳ组不接种病毒尿囊液、不给药、HA滴度0。第Ⅰ组与第Ⅲ组差异极显著(P<0.01),第Ⅱ组与第Ⅲ组差异显著(P<0.05)。试验表明,紫草对鸡胚无毒性作用;紫草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

侵染甘蔗的高粱花叶病毒遗传多样性分析

为探明甘蔗花叶病的病原病毒之一高粱花叶病毒(sorghum mosaic virus, SrMV)在我国华南地区的发生情况,从广东省广州、翁源、博罗及广西南宁等地甘蔗产区采集表现花叶症状的甘蔗叶片样品,采用1对病毒CP基因引物(P1:5′-ACAGCAGAWGCAACRGCACAAGC-3′、P2:5′-CTCWCCGACATTCCCATCCAAGCC-3′,Y=C/T,W=T/A,K=G/T,R=A/G),进行一步法RT-PCR检测,结果表明48%的样品受到SrMV侵染。根据寄主类型和地理来源,选取10份代表性样品,对经P1、P2扩增获得的病毒CP基因片段进行直接测序,所得序列经Blast比对确认均为SrMV CP序列。为揭示SrMV种内的遗传多样性,采用Clustal W方法对本文鉴定的10个SrMV分离物与GenBank中已报道的全部18个SrMV株系或分离物的CP基因序列进行多序列联配,并计算核苷酸同一性,结果显示各个SrMV分离物之间的CP基因核苷酸同一性为76%~100%。基于病毒CP基因核苷酸同一性的遗传多样性分析,SrMV种内分化成2个遗传变异类群,即杂种甘蔗组(HS group)和高贵甘蔗组(NS group),它们的分离物大多分别来自杂种甘蔗(hybrid sugarcane)寄主和高贵甘蔗(noble sugarcane)寄主。分离物之间的平均CP基因核苷酸同一性,在两组组内分别为87%和90%,两组间为80%。说明两组SrMV之间存在较大的遗传差异,寄主隔离是导致该病毒种内分化的主要因素。因此,在甘蔗花叶病的防治和抗病毒育种工作中,除需注意病原的种类和寄主类型外,还应充分考虑病原种内的遗传多样性。