白鲜皮乙醇提取物杀虫活性初探

通过对白鲜皮的醇提物来测定其对鳞翅目昆虫黏虫、苜蓿夜蛾、菜青虫和鞘翅目昆虫二十八星瓢虫、双斑萤叶甲、榆紫叶甲、绿豆象的杀虫活性。采用ASE快速萃取技术,以乙醇为主要的提取溶剂,对白鲜皮中杀虫活性成分进行高效提取,初步探索了其醇提物杀虫活性。     

鸡IL-2重组杆状病毒的构建及其病理组织学研究

以鸡白细胞介素2(IL-2)为免疫刺激因子,探讨鸡IL-2重组杆状病毒(BV-LMI-IL-2)对鸡脏器的影响,为IL-2促进疫苗免疫的研究提供理论依据。以IL-2为目的基因,以p LMI为杆状病毒转移载体,构建BV-LMI-IL-2。最终使用BV-LMI-IL-2与新城疫(NDV)抗原疫苗BV-LMI-F进行单独免疫和联合免疫,观察鸡腺胃、肝脏、心脏、十二指肠等器官病理变化情况。免疫和攻毒试验结果显示:BV-LMI-F与BV-LMI-IL-2联合免疫时,保护率提高了12.5%,说明BV-LMI-IL-2对疫苗起到了免疫增强作用,可以作为免疫增强剂使用。对攻毒后的对照组死亡鸡只和免疫组死亡的鸡只剖检,观察病变器官和病理组织切片结果显示,联合免疫组器官无明显病理变化,证明鸡IL-2重组杆状病毒提高了对鸡脏器器官的免疫保护作用。     

共表达O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重组杆状病毒的构建

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。     

黄荊提取物的杀虫生物活性研究

研究表明黃荊的叶、种籽及根皮均含有杀虫、拒食的生物活性,但活性物主要在叶部和种子。黃荊叶片的二甲苯提取物对菜青虫、斜纹夜蛾幼虫及菜蚜有较高的杀虫活性,其LC50分别达186倍、259倍及371倍;它同时对菜青虫有较强的拒食作用。     

黃荊提取物的杀虫生物活性研究

研究表明黃荊的叶、种籽及根皮均含有杀虫、拒食的生物活性,但活性物主要在叶部和种子。黃荊叶片的二甲苯提取物对菜青虫、斜纹夜蛾幼虫及菜蚜有较高的杀虫活性,其LC50分别达186倍、259倍及371倍;它同时对菜青虫有较强的拒食作用。     

Bt杀虫蛋白基因cry8Ea2的克隆、表达和活性

根据已知Bt cry8类基因的全长序列设计一对特异性引物JJX5和JJX3,以Bt菌株B-DLL的质粒DNA为模板扩增出3.5 kb大小的片段;将该片段插入大肠杆菌表达载体pET-21b中,并完成了该片段的全序列测定.该基因编码区为3 495 bp,编码的蛋白质由1 164个氨基酸残基组成,相对分子质量为131.8 kDa,等电点为pH 4.71,为弱酸性蛋白.该基因(GenBank:EU047597)编码的氨基酸序列与Cry8Ea1的氨基酸序列同源性高达99.31%,被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry8Ea2.经1PTG诱导后该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够正常表达130 kDa的蛋白.表达产物对暗黑鳃金龟.琉璃弧丽金龟和柳蓝叶甲具有活性,在浓度为8.98ug/s时对暗黑鳃金龟、琉璃弧丽金龟一龄幼虫14 d的校正死亡率分别为46.67%和55.56%;在浓度为89.8 ug/mL时对柳蓝叶甲三龄幼虫96 h的校正死亡率为33.33%.     

Cry1Ac毒素突变体的构建、表达及杀虫活性测定

为了构建对敏感和类钙粘蛋白突变的抗性昆虫都具有高杀虫活性的毒素,将Cry1Ac毒素结构域I中α1和α2之间插入一个α胰凝乳蛋白酶作用位点,并分析突变体毒素在苏云金芽孢杆菌中形成伴孢晶体、目标蛋白的表达情况,以及鉴定突变体毒素的杀虫活性。结果发现:4个突变体蛋白都能在苏云金芽孢杆菌中表达产生约130 k Da的目标蛋白,但不能形成有规则的伴孢晶体。这可能是由于突变体蛋白在Bt生长的平稳期达到最高,在衰亡期开始被降解造成的。4个突变体中,Cry1Acm4在培养48 h时产量最高,而且其对甜菜夜蛾杀虫活性比野生型高1.6倍,但是其产量只有野生型毒素产量的十分之一。尽管由于Cry1Acm4的表达量较低而使其实际应用的价值不大,但这种构建突变体的方法对研究高毒力的Cry1Ac毒素提供一种新的思路。     

苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及其杀虫活性

克隆对鞘翅目害虫有毒力的Bt新菌株GWS7的cry7Ab8基因,并对该基因进行表达和杀虫活性的研究.利用全长PCR方法克隆cry7Ab8基因,将cry7Ab8基因插入到表达载体pET28b,获得重组质粒pETcry7Ab8,转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130 kDa的蛋白.将cry7Ab8基因连接到...     

多位点生物杀虫毒素BtA害虫敏感性的研究

多位点生物杀虫毒素BtA是通过氨基-羧基偶联剂EDC将两种生物毒素[Bacillus thuringiensis（Bt）晶体原毒素和阿维菌素]进行键合反应，形成的具有多个作用位点的生物藕合产物。通过研究小菜蛾（Plutella xylostella L.）对BtA敏感性的消减和恢复，以及不同地域小菜蛾对其敏感性的差异，来初步评估多位点生物杀虫毒素BtA害虫敏感性变化的规律。试验结果表明：小菜蛾室内相对敏感种群对BtA以及它的反应底物Bt伴胞晶体和阿维菌素的敏感性稳定（LC50为0.0004~0.0020mg/ml）。在三种生物杀虫剂的选择压力之下小菜蛾敏感性下降，2代后对BtA抗性比的增长（2.29）显著地低于Bt伴胞晶体(8.35)和阿维菌素(22.5)。小菜蛾田间种群在脱离杀虫剂的选择压力后敏感性会增加，2代后对BtA的敏感性显著地增加了4.7倍，高于对Bt伴胞晶体的1.28倍和对阿维菌素的2.00倍。福建省七个地市小菜蛾表现出敏感性的多态性，对BtA、Bt伴胞晶体和阿维菌素的抗性比分别为1.18~6.85、1.22~23.93和1.58~4.77。聚类分析结果在福建省以中部地区的小菜蛾具有相对较低水平的敏感性。说明多位点生物杀虫毒素BtA有助于延缓抗性的产生、降低抗性和迅速恢复害虫敏感性的作用。     

药用植物裸花紫珠的组织培养与快速繁殖研究

以种子为外植体,MS为基本培养基,通过比较不同植物生长调节剂种类和浓度配比、培养条件以及生根苗的移栽基质,建立裸花紫珠组织培养快速繁殖体系。结果表明：外植体表面消毒以75%酒精预处理10 s,再用0.1% HgCl2浸泡10 min,效果最好;种子在MS基本培养基上萌发;丛生芽继代增殖的最适温度为28℃,最适光照强度为1500 lx;培养基MS+ 6-BA 2.00 mg/L+ NAA 0.05 mg/L适宜继代增殖,30天的增殖系数为10.87;培养基MS+ NAA 0.50~0.75 mg/L适宜诱导生根,生根率100%;生根苗移栽于河沙、珍珠岩和表土(1:1:1)的混合基质中,成活率96%,高生长量最大。运用该组培快繁技术,可以实现裸花紫珠的工厂化育苗。     

含有不同启动子、WPRE以及ITRs对重组杆状病毒表达新城疫F蛋白的影响

为了提高基因工程疫苗对新城疫病毒F蛋白的表达能力,从而为研制高效基因工程疫苗奠定了基础。利用Western blot技术检测含有不同启动子与表达元件的重组杆状病毒,在中国仓鼠卵巢细胞中其F蛋白的表达量的差异。Western blot结果显示,含有CMV立即早期增强子区与鸡肌动蛋白启动子区的复合启动子的质粒表达F蛋白量较含人巨细胞病毒立即早期启动子(CMV)的质粒提高了24.52%~231.18%,含有土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)能够提高F蛋白表达量2.9~8.6倍,而腺伴随病毒末端反向重复序列(ITRs)对质粒F蛋白表达量提高1.95%~9.27%。CBA启动子的启动能力远高于CMV的启动能力,调控元件WPRE能够显著提高F蛋白的表达量,而ITRs元件对于F蛋白的表达量未产生显著提高。     

中国生物技术农业应用及其安全性问题浅析

从转基因农作物、动物育种、生物农药、能源作物4个方面阐述了中国生物技术农业应用的基本情况和简要成就,就生物技术产品的食品安全和环境安全两个角度探讨了生物技术安全性问题,展望并提出了加快中国生物技术农业应用的四点建议。     

蜡蚧轮枝菌对平菇厉眼蕈蚊幼虫和蛹的毒力测定

摘 要: 采用蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii) MZ041024菌株不同分生孢子浓度对平菇厉眼蕈蚊的幼虫和蛹进行毒力测定。结果表明,MZ041024菌株杀虫活性较高,对幼虫和蛹最高校正死亡率分别为91.79%和88.94%,LC50分别达到1.745×105个/ml和4.723×105个/ml;LT50最短分别为3.51d和3.78d 。     

玉米矮花叶病的抗性遗传分析

以玉米自交系X178和B73杂交培育的183个重组自交系为试验材料,采用人工接种的方法,在苗期、拔节期、抽雄期和成株期进行了玉米矮花叶病的抗性鉴定.结果表明,183份重组自交系之间对玉米矮花叶病的抗性存在着较大的差异,在抽雄期和成株期各有3个高抗的超亲分离;苗期和拔节期的病株率均呈现正态分布,抽雄期和成株期则表现为感病家系较多的偏态分布,且家系病株率的变异系数随生长发育变得越来越小,但抗性遗传力则越来越大.说明对玉米矮花叶病的抗性鉴定在成株期较准,苗期受环境影响较大;成株期的抗性由2～3对主基因控制,同时存在多基因修饰或互作;抗性基因之间以加性效应为主.     

旋毛虫基因重组抗原快速ELISA诊断试剂盒的研究

用旋毛虫基因重组抗原（TSRA）建立了诊断猪旋毛虫病的快速ELISA诊断试剂盒，用TSRA和旋毛虫肌幼虫排泄－分泌抗原（ES）分别对12份人工感染旋毛虫病猪血清进行快速ELISA检测，阳性率为100％。在猪旋行虫病发病区随机采集103份血清和肉样，分别用TSRA和ES作抗原对血清进行快速ELISA检测，结果显示，它们与肌肉消化法的诊断符合率分别为95．12％和96．3％，研究证明，用TSRA组装的诊断试剂盒具有良好的灵敏性，特异性和重复性。     

152份向日葵重组自交系苗期抗旱性的鉴定与评价

以152个油用向日葵重组自交系为试验材料,设置干旱胁迫和正常浇水2个处理进行温室盆栽试验,研究干旱胁迫对其苗期表型及生理生化特性的影响;利用抗旱系数、综合抗旱能力D值、相关性分析、线性回归分析和聚类分析方法进行计算分析,以筛选简便有效的向日葵苗期抗旱性鉴定指标和抗旱种质。结果表明,抗旱系数从高到低依次为根冠比、根表面积、根长、根体积、电导率、SPAD值、株高、叶片相对含水量和叶面积;线性回归分析及与综合抗旱能力D值的相关性分析均表明该9项指标与苗期抗旱系数均呈现显著关联,其中根长、根表面积与抗旱系数的相关性较显著。综合抗旱能力D值的聚类将供试自交系材料聚为4大类,包括强耐旱型2个、耐旱型2个、弱耐旱型83个和不耐旱型65个,其中149号和10号材料的综合抗旱能力D值显著大于其他材料,属于强耐旱型。     

小麦重组自交系群体HMW-GS的检测与分析

利用重组自交系群体--RILL-8群体的131个系为材料,检测和分析了其高分子量麦谷蛋白亚基及亚基组合.结果表明,RIL-8群体Glu-A1、Glu-B1、Glu-D1位点编码的亚基分别为1、N,7 9、7 8和5 10、2 12,主要存在7种亚基组合类型.不同亚基及亚基组合类型在相同位点上仅存在1对等位基因差异,可以用其进行相同位点不同亚基及亚基组合对品质性状效应值的估算.