中华鳖出血性肠炎病病原的研究

对中华鳖出血性肠炎病病原进行了分离,纯化,强毒菌株可使幼鳖,稚鳖,鱼,小白鼠在５￣１６ｈ内１００％死亡,对致病力强的９６－７－２６和９８－６－２６菌株进行培养,生化测定,依《伯杰细菌鉴定手册》（第８版）,鉴定为嗜水气单胞菌。     

细菌性河蟹颤抖病的鉴定与药敏试验

从来自启东的颤抖病蟹的肝胰腺和血淋巴中分离得到细菌，经人工感染试验确定为病原菌。该菌的生理、生化试验结果显示为嗜水气单胞菌。药敏结果显示，四环素、卡那霉素、吡哌酸对该病原菌均有很好的敏感性，青霉素G则均没有作用。     

日本沼虾"红体病"病原的研究

从患"红体病"的养殖日本沼虾肝、肌肉、鳃中分离到6株细菌,致病性试验表明其中两株X01、X02为该病的病原菌.生理生化鉴定、药物敏感试验及细菌毒力试验表明,该两株细菌均为嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila);对日本沼虾的半数致死量LD50分别为1.16×104cfu/只、1.05×104cfu/只,细菌对药物的敏感性存在差异.     

团头鲂病原嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

从患病的团头鲂肝脏中分离到1株优势菌WJ-8。将菌株WJ-8进行人工回归感染试验,其患病症状同自然发病症状,证明其对团头鲂有致病性。该菌株的形态特征、主要理化特性、16SrRNA序列测定结果及系统发育树的构建表明该菌株为嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示,该菌株对氟苯尼考、甲哌利福霉素、链霉素、卡那霉素等22种药物敏感,对青霉素、氨苄西林、羧苄青霉素、苯唑西林等12种药物表现出耐药性。     

鲮鱼嗜水气单胞菌病病原的鉴定及药敏试验

从患病鲮鱼的体表、肝、肾分离到3株致病菌(QY1567,QY1569,QY1578),通过培养特性、生化特征与分子鉴定,确定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。人工感染试验显示,此3株菌对鲮鱼具有较强的致病力,LD_(50)依次为3.04×10~5、3.8×10~5和1.53×10~5cfu/g。药敏试验表明,3株致病菌对阿米卡星、链霉素、环丙沙星、头孢他啶、米诺环素、妥布霉素、苯唑西林、氨曲南等抗生素高度敏感,对卡那霉素、麦迪霉素、呋喃妥因中度敏感,对左氟沙星、头孢噻吩、庆大霉素、头孢唑啉、头孢噻肟、青霉素G、头孢西丁和头孢哌酮不敏感。     

细菌性"颤抖病"病原的体外中药药敏试验

嗜水气单胞菌2菌株ES-1、ES-2对地锦草、黄莲、五倍子和增效剂具有高度敏感性，这4种药物可作为防治由该菌引起疾病的首选药物，同时发现这2株菌对黄芪、穿心莲、连翘等具有不同程度的耐药性。通过3种高度抑菌药物间及增效剂之间的相互作用，得出增效剂对五倍子、黄莲有明显的增效作用，地锦草和五倍子具有协同作用，尤其增效剂对五倍子的增效作用效果最为明显，该复方药物可作为由该菌引起疾病的高效、低成本、低毒的防治药物。     

鳖嗜水气单胞菌病的诊断和防治

鳖嗜水气单胞菌病流行于全国各养鳖地区,多发生在早春至初夏。病鳖主要症状为后颈部皮肤带状充血,腹甲部出现多个大小不等的红斑并逐渐溃烂。可采取避免鳖体外伤、生石灰清池、流行季节用土霉素或呋喃唑酮拌入饲料投喂、接种该病灭活疫苗等措施预防。对发病个体,及早注射庆大霉素、卡那霉素等治疗,注射剂量为每公斤鳖体重20万国际单位。     

牛蛙腹水病病原研究

从患腹水病的牛蛙腹水中分离到二株细菌，人工感染可使牛蛙、青蛙、银鲫和ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠致死，生理生化及Ｇ＋Ｃ含量测定属于气单胞菌属的嗜水气单胞菌。该菌与本地分离的出血性败血症菌株间的交叉凝集反应小于１：４０。     

一例甲鱼穿孔病病原的分离鉴定和药敏试验

为研究甲鱼穿孔病的有效预防措施,对患病甲鱼进行了临床诊断和病原分离鉴定。病原菌鉴定(菌落特征、细菌形态及细菌生化和分子鉴定)以及菌株毒性试验、人工感染试验和药物敏感试验的结果表明:致病菌株为嗜水气单胞菌,菌株有明显的β溶血,对小鼠具有很强的致病性,菌液浸泡感染黄鳝,也能使黄鳝出现出血病症状。该菌对嗯诺沙星和四环素高度敏感,对氨苄青霉素和阿莫西林低度敏感并有耐药性。     

被动转移免疫在鲫感染温和气单胞菌中的作用

实验用鲫平均体重100g，采用免疫物质被动转移试验，探讨体液免疫在鲫感染温和气单胞菌（Aeromonas sobria)中的保护作用。结果表明，无论免疫物质是来自异源还是自源，是由相关的嗜水气单胞菌（A.hydrophia)诱导产生还是由攻毒的温和气单胞直接刺激，均具有良好的免疫保护作用。实验还发现，再次攻毒时，在所有抗体组的鲫存活率为100%时，全血被动转移组的死亡率高达55.6%；免疫前后免疫复合物发生明显变化。说明抗体在保护鲫免疫受温和气单胞菌的致死性感染中发挥决定性的作用。     

嗜水气单胞菌对金鲫血液学指标的影响

用嗜水气单胞菌对金鲫进行攻毒试验,对试验鱼进行血液有形成分指标和血液生化指标的测定.结果表明:单核细胞数、谷丙转氨酶(GPT)、总胆固醇(CHO)、钾(K)对照组与试验组差异显著(P<0.05);红细胞总数、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、谷草转氨酶(AST/GOT)和胆碱酯酶(CHE)试验组与对照组差异极显著(P<0.01)...     

蜂胶佐剂对异育银鲫嗜水气单胞菌灭活疫苗的免疫增强试验

本文就蜂胶佐剂对鱼类细菌性疫苗的免疫增强作用进行了首次评价。试验以异育银鲫嗜水气单胞菌灭活疫苗为对象,比较了蜂胶佐剂、铝胶佐剂和无佐剂三种疫苗对银鲫的免疫效果。经抗体监测表明,免疫接种后第2周,蜂胶佐剂组银鲫已检测到血清抗体,随后抗体效价迅速上升,第4周达到峰值2^5：铝胶佐剂组和无佐剂组第3周检测到抗体．铝胶佐剂组第5周达到峰值2^5,无佐剂组第4周达到峰值2^4。银鲫免疫后第5周进行攻毒保护试验,发现蜂胶佐剂组、铝胶佐剂组和无佐剂组的免疫保护率分别为77．3％．65．0％和56．3％。试验结果表明,蜂胶佐剂能有效增强异育银鲫细菌性灭活疫苗的免疫保护力。     

甲壳素发酵液在彭泽鲫幼鱼养殖上应用效果

为研究甲壳素发酵液(Chitin fermentation liquid,CFL)在彭泽鲫(Carassius auratus variety pengze)幼鱼上效果,通过在室外养殖池水体中定期泼洒CFL,比较不同用量CFL(0.01%和0.02%)以及0.02%CFL和商品壳聚糖(Chitosan,C)联合应用效果,每个处理3次重复。饲养初始彭泽鲫体重为35 g左右,培养2个月后测定幼鱼生长性能和水体指标。结果显示:0.01%CFL、0.02%CFL和0.02%CFL+C三个处理彭泽鲫总体重与养殖初期比较增重均达到20%以上,增重效果分别比对照高101.5%、110.4%和172.7%。0.01%CFL和0.02%CFL处理的彭泽鲫消化系统中脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶比对照高22.03%以上,但两个浓度之间差异不显著。CFL处理降低养殖水体中亚硝态氮、总氮和总磷含量,0.01%CFL处理分别比对照低29.4%、15.2%和77.8%,其它两个处理与0.01%CFL差异不显著。CFL处理降低了感染嗜水气单胞菌后彭泽鲫的死亡率,提高了保护效果。结果表明,甲壳素发酵液明显提高彭泽鲫抗病能力,促进鱼体生长,改善水质。     

用绿色荧光蛋白标记的细菌研究鱼体吸收颗粒抗原的部位

用绿色荧光蛋白标记的嗜水气单胞菌４３３２株（Ａｈ４３３２＾ＧＦＰ）菌液高渗浸泡和直接浸泡异育银鲫,研究鱼体对颗粒抗原的吸收。经两种方法处理的鱼,在整个实验过程中显示,鱼鳃的标记菌检出量均高于皮肤和肠道中的标记菌,证实鳃是抗原吸收的主要部位。另外,鱼体经高渗处理,鳃和皮肤可检出的标记菌明显增加。在肠道中,除浸泡６０ｍｉｎ,浸泡１０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ及１２０ｍｉｎ的细菌检出量也明显增加。显示高渗可促进抗原的吸收。     

恶喹酸与诺氟沙星对异育银鲫体内嗜水气单胞菌的抑菌效果比较

在水温(25±2)℃下,给体质量150~200g的异育银鲫分别口灌3种剂量(20、30、40mg/kg)的诺氟沙星和恶喹酸,结合这两种药物对嗜水气单胞菌AH10的体外药效学研究和对异育银鲫单次口灌不同剂量的诺氟沙星、恶喹酸的体内药代动力学,研究诺氟沙星、恶喹酸对异育银鲫体内嗜水气单胞菌AH10的抑菌效果。试验结果表明,恶喹酸和诺氟沙星对嗜水气单胞菌AH10的最小抑菌质量浓度分别为1μg/mL和0.5μg/mL。口灌上述3种剂量恶喹酸、诺氟沙星后,异育银鲫血浆中恶喹酸的最大药物质量浓度分别为4.1μg/mL、6.0μg/mL和8.89μg/mL;诺氟沙星的最大药物质量浓度分别为11.5μg/mL、15.1μg/mL和18.9μg/mL;恶喹酸的最大药物质量浓度/最小抑菌质量浓度分别为4.1、6.0和8.89;诺氟沙星的最大药物质量浓度/最小抑菌质量浓度分别为23、30.2和37.8;恶喹酸0~24h内药—时曲线下面积/最小抑菌质量浓度分别为21.6214、33.1449、39.1846;诺氟沙星0~24h内药—时曲线下面积/最小抑菌质量浓度分别为274.75、451.55、578.35。综合0~24h内药—时曲线下面积/最小抑菌质量浓度、最大药物质量浓度/最小抑菌质量浓度这两个指标可知,诺氟沙星对异育银鲫体内的嗜水气单胞菌AH10抑制效果强于恶喹酸。     

银鲫肠道内抑制嗜水气单胞菌的潜在益生菌筛选及其特性研究

从养殖的银鲫(Carassius auratus gibelio)肠道中分离纯化得到60株具有不同特征的菌株,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)为指示菌,点种法初筛得到12株菌株,再通过牛津杯实验筛选出4株对嗜水气单胞菌有明显抑制作用(抑菌圈直径在14 mm以上)的益生菌疑似株,并进行了耐热试验、耐酸试验和人工肠液耐受试验,筛选出最符合益生菌功能特性的菌株YJ-9。该菌株在90℃高温水浴30 min后相对存活率为1.51%,在pH3的液体培养基中4 h内相对存活率为8.37%,活菌数都保持在106 CFU/mL以上,并且可以在人工模拟肠液中缓慢生长。在急性毒力实验中,10倍于实验剂量的菌株YJ-9对银鲫无毒,动物保护实验证明菌株YJ-9能有效增强银鲫对嗜水气单胞菌的免疫抵抗力,相对保护率达到80%。研究结果表明,菌株YJ-9可以作为一个新的饲用微生态制剂候选菌种。     

恩诺沙星控制嗜水气单胞菌性鲫败血症的防耐药用药方案

为了合理地使用抗生素,制定防止耐药菌产生的用药方案,本研究利用近年来提出的防耐药突变浓度(MPC)和耐药选择窗(MSW)这两个药效学(PD)参数,并结合药代动力学(PK)参数,制定恩诺沙星防耐药突变用药方案,控制由嗜水气单胞菌引起的鲫细菌性败血症.研究结果显示,恩诺沙星对该致病性嗜水气单胞菌的体外药效学参数为:最小抑菌浓度(MIC)为0.125μg/mL;2MIC、4MIC、8MIC的抗菌后效应(PAE)分别为(1.67±0.42) h、(2.03±0.17) h、(2.38±0.06) h; MPC为1.125μg/mL; MSW为0.125~1.125μg/mL.根据鲫(Carassius auratus)口灌恩诺沙星后的药代动力学曲线,得出血浆药物浓度>MPC的时间分别为5 h、9.5 h、23 h.PK/PD综合参数:24 h内血药浓度-时间曲线下面积与MIC的比值(AUC24/MIC)分别为137.22、285.15、426.25;峰浓度与MIC的比值(Cmax/MIC)分别为15.05、41.43、52.32.综合血浆药物浓度>MPC的时间超过(24-PAE)h、AUC24/MIC≥100或Cmax/MIC>8的指标,建议恩诺沙星在控制由嗜水气单胞菌引起的鲫细菌性败血症时的给药方案为:给药剂量20 mg/kg体质量,1次/d.根据肌肉内恩诺沙星的药动学方程,药残达到国家限量标准所需时间约为25 d,所以建议休药期不低于25 d.本研究方案也可广泛用于其他水产养殖抗菌药物的防耐药突变用药方案的制定.     

甲砜霉素在鲫体内的药物代谢动力学研究

采用液相色谱串联质谱法,研究通过单剂量口灌给药,对甲砜霉素在鲫(Carassius auratus)体内的药代动力学进行研究,为甲砜霉素在鲫疾病预防和治疗方面提供理论基础。给药剂量为30 mg/kg体重,实验水温(20±0.2)℃,鲫平均体重(40.70±7.87)g。取给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、24、36、48、72 h鲫的肌肉、血浆、肝脏、肾脏,测定各组织中甲砜霉素的浓度,用药动学3p97软件进行数据的处理和分析。结果表明:甲砜霉素在鲫体内吸收分布迅速,符合一级吸收二室开放模型,但消除缓慢。甲砜霉素在鲫血浆、肝脏、肾脏和肌肉中的主要药代动力学参数如下:分布半衰期(T1/2α)分别为1.446 h、1.958 h、7.410 h和1.376 h;消除半衰期(T1/2β)分别为16.712 h、21.267 h、79.970 h和25.600 h;药时曲线下总面积(AUC)分别为669.073μg/(mL.h)、271.260μg/(g.h)、3616.060μg/(g.h)和158.634μg/(g.h)。甲砜霉素在水产动物体内吸收快,肌肉和肾脏消除半衰期长,消除缓慢,因此,在该类药物使用时,应相对延长给药间隔时间,避免耐药性的产生。     

Optimization by orthogonal array design and humoral immunity of the bivalent vaccine against Aeromonas hydrophila and Vibrio fluvialis infection in crucian carp (Carassius auratus L.)

Aeromonas hydrophila and Vibrio fluvialis are the causative agents of a serious haemorrhagic septicaemia that affects a wide range of freshwater fish in China. In order to develop a bivalent anti‐A. hydrophila and anti‐V. fluvialis formalin‐killed vaccine to prevent this disease, an orthogonal array design (OAD) method was used to optimize the production conditions, using three factors, each having three levels. The effects of these factors and levels on the relative per cent survival for crucian carp were quantitatively evaluated by analysis of variance. The final optimized formulation was established. The data showed that inactivation temperature had a significant effect on the potency of vaccine, but formalin concentration did not. The bivalent vaccine could elicit a strong humoral response in crucian carp (Carassius auratus L.) against both A. hydrophila and V. fluvialis simultaneously, which peaked at 3 or 5 weeks respectively. Antibody titres remained high until week 12, the end of the experiment, after a single intraperitoneal injection. The verification experiment confirmed that an optimized preparation could provide protection for fish at least against A. hydrophila infection, and did perform better than the non‐optimized vaccine judged by the antibody levels and protection rate, suggesting that OAD is of value in the development of improved vaccine formulations.     

甘草粗提物对鲫的抗应激及免疫保护功效研究

采用腹腔注射和混饲投喂两种方式研究中药甘草(Glycyrrhiza uralensis Fiseh)粗提物对鲫(Carassius auratus)的抗应激和免疫保护功效。将一部分粗提物按0.5%和2%的质量分数制成药饵投喂实验鲫,分别在第14 d、28 d、35 d、42 d、56 d采集血样;将另一部分粗提物用无菌生理盐水按0.5%和2%的浓度配成针剂腹腔注射鲫,分别在第3 d、7 d、14 d、21 d、28 d采集血样。结果显示:投喂实验中药物组和对照组血清皮质醇水平均呈先升后降趋势,除第14 d外,药物组皮质醇水平都低于同期对照组。在最后一次采样中(56 d),对照组、低剂量组和高剂量组的皮质醇水平分别为147.85 ng/mL、79.41 ng/mL和66.47 ng/mL。腹注实验中对照组皮质醇水平一直呈上升趋势,最后一次采样(28 d)高达274.23 ng/mL,显著高于药物组(P<0.01)。投喂甘草提取物56 d后,用Aeromonas hydrophila对鲫进行人工感染,低剂量组和高剂量组一周后的死亡率分别为45.0%和55.0%,显著低于对照组的70.0%(P<0.05)。腹注甘草提取物后第28 d,鲫受A.hydrophila菌人工感染,对照组、低剂量组和高剂量组的死亡率分别为60.0%、55.0%和35.0%,高剂量组显著低于对照组(P<0.05)。实验表明,投喂和腹注甘草粗提物后,可明显提高鲫的抗应激能力,并能增强鱼体对A.hydrophila的抵抗力。