枸杞、番茄体细胞原生质体培养体系研究

利用组培技术,以宁杞1号枸杞和农大1号番茄种子的无菌苗叶片、下胚轴为外植体,脱分化培养分别获得其愈伤组织,经继代增殖和酶解处理获得质量较好的原生质体。结果表明,枸杞、番茄无菌苗的下胚轴分别在附加有1.0mg/L2,4-D+1.5mg/LKT和1.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT的MS固体培养基中诱导的愈伤组织(诱导率分别是68.45%、64.33%)无褐化或褐化率最低,产生的愈伤组织适合于原生质体培养且效果最好;将0.5%果胶酶、1%纤维素酶、0.2%离析酶R-10、0.2%半纤维素酶配合使用,在pH5.0~6.0、温度30℃下振荡酶解12~16h,所得枸杞、番茄原生质体均在Km8P液体培养基中纯化培养,原生质体及活力状态均可保持2d左右。     

甘蓝子叶原生质体培养与植株再生的研究

将0.5％纤维素酶Rs+0.1％果胶酶Y-23酶溶液振荡处理3h,可得到最高的细胞分裂率,但原生质体分离数量较低。0.5％纤维素酶R-10+0.05％离析酶R-10+0.05％果胶酶Y-23酶溶液,25℃下处理14h,原生质体分离数量及细胞分裂率均较高。1/2MS培养基添加NAA3mg/L+BA0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L的液体培养基有利于细胞团形成及愈伤组织生长。本试验获得了完整的再生植株,芽分化率达20％左右。     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

[研究目的]研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离.[方法]以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件.[结论]使用1/2MS基本培养基附加TDZ 0.2 mg/L、NAA 0.5 mg/L和PVP 2.0 g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ 0.4mg/L+NAA0.2mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ 0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20～25 g/L纤维素酶.酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高.     

从百脉根原生质体再生植株

本文研究了从百脉根(Lotus cornicutatus L.)的原生质体再生植株.把在4mg/l NAA和2.5mg/l KT的MS(1962)培养基上培养10～15天的愈伤组织置于4%纤维素酶OnozukaRs,1%混合酶R-10,0.2%果胶酶Y-23,0.7M甘露醇(pH5.8)的酶液中,28℃条件下振荡处理3～4h分离出原生质体.     

丰香和红颜草莓原生质体提取与细胞融合的条件优化

为给草莓品种改良提供参考,分别以生长旺盛期的草莓愈伤组织、嫩叶和嫩茎为材料,采用酶解细胞壁提取原生质体和聚乙二醇(PEG)促细胞融合的方法,对草莓原生质体提取和融合的最佳条件进行研究。结果表明:愈伤组织在培养基MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA上长势良好;2种草莓的嫩叶都是提取草莓原生质体的最佳材料;在30℃、2.5mg纤维素酶+5mg果胶酶+1.25mg半纤维素酶条件下,用45%的PEG 5000促融酶解5h的效果最好,提取的原生质体数最高,丰香嫩叶为7.5×106个/mL,红颜嫩茎为6.7×106个/mL,且原生质体活性最高。     

甘蓝型油菜与菘蓝原生质体融合及植株再生体系的研究

以甘蓝型油菜(Brassica napus)和菘蓝(Isatis tinctoria)叶片为材料提取原生质体,采用PEG-高钙高pH法融合亲本原生质体,采用固液双层培养法诱导愈伤组织的形成.研究适宜原生质体分离的酶种类及浓度,并考察了激素种类和用量对愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明,5 mg/L纤维素酶+3 mg/L离析酶适合甘蓝型油菜和菘蓝的酶解.各培养基中适宜的激素浓度分别为,诱导培养基PellB 1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+0.25 mg/L 2,4-D;增殖培养基PellC 2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L2,4-D;分化培养基PellE 2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L 2,4-D.获得了15株再生植株,杂种幼苗叶片均呈深绿色,叶表面覆有厚的蜡质,叶片肥厚,植株在成熟期时株高比甘蓝型油菜矮,开花较晚,雄蕊发育不完全,杂种体细胞染色体数目为48～66.     

矮牵牛叶肉原生质体分离条件的优化

以幼嫩叶片为试材,探讨了渗透压(甘露醇浓度)、水解酶浓度、酶解时间等关键因素对矮牵牛叶肉原生质体分离效果的影响。研究结果表明,以2%纤维素酶R-10+0.2%果胶酶Y-23+0.4%离析酶R-10+20 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)+0.1%牛血清白蛋白(BSA)+0.11%无水氯化钙(CaCl_2)为酶解液,在0.5mol/L甘露醇浓度下静置酶解5h,1 100r/min离心2min沉淀原生质体,原生质体产量及活性分别为2.90×106个/g和88.1%,可为后续原生质体培养及融合提供材料。     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

油桃组织培养及再生材料的原生体制备研究

以油桃茎段为试验材料进行组织培养,诱导不定芽的增殖和进行愈伤组织诱导,获得茎段、叶片、愈伤组织等大量无菌材料,给原生质体制备及后续细胞融合工作提供了可重复性的试验材料.初始培养的最适培养基为:MS+1.5mg/L BA+0.1mg/L IBA,诱导率达82.9%;诱导不定芽增殖的最适培养基配方为MS+1.5mg/L BA+0.2mg/L IBA;诱导愈伤组织的最佳培养基配方为MS+1.5mg/L 2.4-D+0.5mg/L NAA+0.3mg/L BA.原生质体制备以嫩叶为分离原生质体的最佳材料,而最佳的分离酶组合为纤维素酶1%+果胶酶2%,在此条件下,原生质体的产量和活性分别为9.2×107个/g和80.4%.     

黑果腺肋花楸原生质体分离研究

为建立有效的原生质体分离体系,研究了黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)原生质体酶解分离纯化条件。结果表明:黑果腺肋花楸愈伤组织在20g/L纤维素酶+0.5g/L果胶酶+13%甘露醇+5mmol/LMES酶解液中黑暗静置酶解10h,可获得高产量高活力的原生质体;采用500r/min离心8min分离纯化效果最好;愈伤组织比组培苗叶片分离获得的原生质体产量与活力更高。     

山桃原生质体培养再生愈伤组织

以山桃县浮培养物为分离材料,在ＣＰＷ＋１．０％ＥＬＬＵＬＡＳｏＮＺＵＫＡｒ－１０＋０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０＋０．７ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋１％ＰＶＰ的酶解液中酶解１２ｈ生质体产量和活力分别达到３．５＊１０＾７个／ｇ．ＦＷ和９６％。     

不同培养基对月见草种子发芽和愈伤组织诱导的影响

[目的]研究不同浓度NAA和6-BA组合的MS培养基对月见草种子发芽和愈伤组织诱导的影响。[方法]通过组织培养,研究了NAA和6-BA16种组合的MS培养基中的月见草种子发芽率和愈伤组织诱导率。[结果]在NAA和6-BA的16种组合中,MS＋10mg/L6-BA培养基中的种子发芽率最高（90%）,其次是MS＋10mg/L6-BA＋2mg/LNAA（87%）,再次是MS＋2mg/L6-BA（83%）和MS＋10mg/L6-BA＋5mg/LNAA（83%）;MS＋2mg/L6-BA＋5mg/LNAA培养基中的愈伤组织诱导率最高（88.89%）,其次是MS＋5mg/L6-BA＋10mg/LNAA（87.50%）、MS＋2mg/L6-BA＋2mg/LNAA（85.71%）和MS＋2mg/L6-BA＋10mg/LNAA（83.33%）;MS＋10mg/LNAA和MS＋5mg/LNAA培养基中有不定芽和不定根产生。[结论]该研究为提高月见草种子发芽率和愈伤组织诱导率提供了技术指导。     

结缕草组织培养及转化因子的初步研究

以破除休眠的结缕草种子为试材，对其愈伤组织的诱导、分化及农杆菌介导转化的关键因子作了探索，结果表明：结缕草种子愈伤组织的诱导以含2，4-D 1mg/L NAA 3mg/L 6-BA0．2mg/L、分化以KT 3mg/L 6-BA 3．5mg/L NAA 0．1mg/L、生根培养以含0．2mg/L NAA的MS培养基效果最佳。通过瞬间表达的研究表明，以继代培养2周的愈伤组织为材料，农杆菌介导感染10min进行转化为佳。     

适于悬浮培养的半夏疏松愈伤组织诱导及增殖技术

用半夏叶片或叶柄作外植体,通过调节植物生长调节物质的种类、浓度及培养条件,以获得适于悬浮培养的半夏疏松愈伤组织。结果表明,添加2,4-D较NAA诱导的愈伤组织疏松,将叶片接种于MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L或叶柄接种于MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L上诱导出的愈伤组织长势较好且疏松,诱导率分别达到100%和95.6%,愈伤组织鲜重分别为0.932 g和0.622 g。将上述愈伤组织以MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L培养基连续继代3次,便获得适于建立细胞悬浮培养体系的疏松愈伤组织,从而为半夏人工种子生产必须的同步化高质量人工种胚的培养提供可靠材料。     

桃遗传转化再生体系的建立与优化

以桃不同胚龄胚为外植体,建立桃遗传转化再生体系.结果表明:花后50 d的胚均能诱导出愈伤组织,并可分化出不定芽.胚愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA0.25 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L的效果最好,平均诱导率可达99.8%.将胚愈伤组织接种在培养基MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L上,愈伤组织转变为致密型,不定芽分化率为37.5%.将不定芽用100 mg/LIBA浸蘸其基部转移到不含激素的1/2 MS培养基中诱导生根,生根率为82.0%.花后75d的成熟胚不定芽的直接诱导率达到96.1%.     

观赏凤梨远缘杂种离体再生体系研究

[目的]建立一套观赏凤梨远缘杂种离体再生培养体系,为优质新种质的工厂化生产提供参考.[方法]以观赏凤梨V‘ Christiane’×G.dissitisflora远缘杂交种子为材料,研究不同激素组合和基因型对种子愈伤组织的诱导、芽分化和无菌苗生根的影响.[结果]在添加6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L的MS培养基上,株系Cd-40的增殖倍数最高,为20.43,其次为Cd-15、Cd-46.与MS培养基相比,在添加不同浓度NAA和6-BA的1/2MS培养基中,Cd-15愈伤组织增殖倍数为6.5~8.5.在含6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的MS培养基上,Cd-8、Cd-15、Cd-40的平均芽分化率和平均芽分化数均最高,分别为98.49%和18.4个/块.在E4培养基中,Cd-15、Cd-40的愈伤组织分化率和分化芽均达最高值.Cd-40无菌苗在含NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+ 6-BA 0.25 mg/L的1/2MS培养基上生根效果最好,生根率高达99.0%,平均根数为2.41条/株.[结论]在添加生长素NAA的培养基中提高6-BA的浓度有利于芽的分化,NAA是观赏凤梨无菌苗生根效果较好的激素.     

彩色马蹄莲‘高原’组培快繁技术的研究

以彩色马蹄莲‘高原’块茎为材料研究其组培快繁技术,筛选适合彩色马蹄莲快繁的培养基。结果表明：在初代试验中对块茎的消毒以0.1%升汞处理15 min为宜;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1~0.2 mg/L NAA为适宜的愈伤组织诱导培养基;MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA能使愈伤组织分化出状态良好的丛生芽并继续增殖;在生根培养基1/2MS+0.2 mg/L NAA+10%香蕉上生根率100%,试管苗生长健壮,根系粗壮发达。试验为彩色马蹄莲的快繁体系及规模化生产提供参考依据。     

桔梗快速繁殖实验体系的建立

以桔梗(PlatycodongrandiflorumJacq.DC.)的幼嫩茎尖、茎段为外植体,建立了桔梗的快速繁殖实验体系。最佳培养基组合为:诱导分化培养基MS+6蛳BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L;增殖培养基MS+6蛳BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L;生根培养基1/2MS+NAA0.5mg/L。     

紫花苜蓿高效遗传转化受体系统的建立

以新疆大叶和新牧一号苜蓿下胚轴和子叶为材料,研究了不同基因型、外植体、培养基及激素配比对其愈伤组织诱导、芽分化和根诱导的影响,建立了适用于这2种苜蓿的再生体系。结果表明,下胚轴是一种较好的外植体材料,其再生能力高于子叶,最高再生率为54.96%;0.2 mg/L KT能辅助2,4-D对愈伤组织的诱导发挥更好的作用;SH培养基相对于MS培养基对愈伤组织的诱导更有效,而MS培养基则有利于愈伤组织的分化;适用于2种苜蓿愈伤组织诱导、分化及生根培养的培养基分别为SH(附加2 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT),MS(附加1.0 mg/LBAP和0.3 mg/L NAA)和不含激素的1/2 MS(扩繁时附加1 mg/L IBA)。