哺乳动物胚胎性别鉴定技术的研究进展

性别控制是通过人为方法使雌性成年动物按照人们的意愿生产特定性别后代的动物繁殖新技术。早期胚胎鉴定是性别控制的一条重要途径，近年来取得了长足进展，尤其是聚合酶链式反应技术。本文综述了胚胎性别鉴定的基本原理、鉴定方法以及研究概况，并阐述了该技术存在的问题及发展前景。     

DNA条形码技术在野生哺乳动物物种鉴定中的可行性

为新疆野生哺乳动物物种鉴定找出最好的方法并建立新疆哺乳动物DNA条形码数据库提供资料,本研究选取新疆野生哺乳动物的肌肉、血液、粪便作为研究材料,运用DNA条形码技术检测野生哺乳动物线粒体DNA COI基因序列。共检测片段长度为642～729 bp的52条COI基因序列,52条COI基因序列通过BLAST网站同源性比较,序列同源性达到98%～100%,相似度达到90%～99%。全部COI基因序列中A、T、C和G的平均含量为26. 3%、30. 3%、26. 0%和17. 4%,A+T的含量(56. 6%)高于C+G含量(43. 4%),有明显的碱基偏倚性。种内遗传距离为0%～2%,种间遗传距离为15%～42%,二者分离度高。邻接法和最小进化法构建的系统发育树,两种方法所得的系统进化树拓扑结构高度一致,分支明显,都分配在单个支上。说明DNA条形码技术可用于新疆野生哺乳动物物种鉴定并弥补其他物种鉴定方法的不足和缺点,在新疆濒危野生动物的管理与保护中有重要意义。     

哺乳动物毛囊发育及调控研究进展

毛囊具有高度自我更新能力,是哺乳动物特有的皮肤构造,且是唯一呈终生周期性生长的器官。毛囊的发生始于胚胎期,皮肤上皮层细胞和下胚层细胞间的一系列相互作用诱导形成毛囊,之后毛囊进入周期性循环,包括生长、退行和休止3个阶段。毛囊的发育过程中受到复杂的网络调控。近年来,关于哺乳动物毛囊发育及调控机制的研究取得了较大进展。已有研究表明,毛囊的发生及循环过程中受到多种因子的调控,不同信号通路及miRNA和lncRNA相关基因的参与,构成了一个庞大而又复杂的网络调控图谱,每种调控因子间的相互促进及制约为毛囊的发生及循环提供了必要的保障。文章简述了人、羊及小鼠等哺乳动物毛囊形态发生、周期性循环及相关调控因子的研究进展,为更加全面地了解哺乳动物毛囊发育过程及调控机制提供了参考,同时对人工控制毛绒的周期生长进而提高毛绒产量和质量提供了思路。     

山羊毛囊干细胞分离、培养及鉴定

采用2．4U／mLDispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部,经胰酶（0．5mg／mL胰酶＋0．2mg／mLEDTA）消化从山羊耳部皮肤分离得到毛囊干细胞,用自制无血清培养基培养,并用形态学观察、细胞生长曲线、克隆形成率及免疫组化染色检测,探讨毛囊干细胞体外分离培养方法及生物学特性。结果表明,所分离细胞具备毛囊干细胞特征：体积较小、表面光滑、立体感强,呈现未分化细胞特征;K19、integrin-β1以及p63免疫组化染色阳性;第3、5、7代干细胞克隆形成率分别为25．6％±2．6％、31．8％±1．9％和27．0％±3．9％,极显著高于对照组角质细胞克隆形成率（P〈0．01）。采用配制的无血清条件培养液可使山羊毛囊干细胞体外维持未分化状态并传代至19代。     

哺乳动物早期胚胎性别鉴定技术研究进展

哺乳动物早期胚胎性别鉴定是人们实现性别控制的重要途径。随着科学技术的发展和各种新的研究工具在性别鉴定中的应用,性别鉴定已越来越接近于能够在生产实践中应用。目前应用较多、重复性较好的性别鉴定方法主要有细胞遗传学方法、生物化学方法、免疫学方法和分子生物学方法等。文章主要综述了哺乳动物早期胚胎性别鉴定技术的研究现状,并分析了这些方法存在的问题及发展前景,为哺乳动物早期胚胎性别鉴定的研究提供借鉴。     

哺乳动物的克隆技术——哺乳动物克隆的原理、方法、影响因素及存在的问题

哺乳动物细胞克隆是20世纪末生命科学领域最引人注目的高新技术,该技术对于优良种畜的复制、减少试验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育等方面具有重要意义。近年来克隆技术发展迅速,多种哺乳动物相继克隆成功,但也存在克隆效率太低、克隆动物表型正常而实质异常的问题。作者阐述了动物克隆的基本原理、操作方法及其相关影响因素,提出了解决相关问题的关键。     

云南半细毛羊毛囊干细胞表面标记物的鉴定

设计8对引物（CK14、CK15、CK19、CD34、CD271、CD200、nestin和β1）,分别扩增云南半细毛羊成纤维细胞和毛囊干细胞表面标记物.结果表明：在成纤维细胞中CK19和β1表现为阳性,而在毛囊干细胞中CK14、CK19和β1表现为阳性,其他标记物的表达都为阴性.因此,CK14可以作为鉴定云南半细毛羊毛囊干细胞的表面标记物之一.     

绒山羊毛囊干细胞的分离培养及诱导分化鉴定

试验旨在建立绒山羊毛囊干细胞体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率,采用油红O和茜素红染色法对第5代毛囊干细胞向成脂和成骨分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的毛囊干细胞形态均一,体积小,呈典型的铺路石状生长,生长曲线呈S型,克隆形成能力强。成脂诱导后,细胞体积增大,细胞质增多,胞内出现小脂滴,诱导12 d后,脂滴逐渐增多,油红O染色呈阳性;成骨诱导后,细胞边缘模糊,出现颗粒状结节,经茜素红染色呈阳性。表明获得的绒山羊毛囊干细胞具有多向分化的潜能。     

鸟撞物种鉴定技术的研究进展

鸟撞给航空业带来了严重的安全问题和巨大的经济负担,而物种鉴定可以提供确切的撞机鸟类信息,增加防治措施的针对性。目前,鸟撞物种鉴定方法主要包括基于羽毛微观结构的形态学方法,以及基于线粒体Cytb与COI基因的遗传学方法。鉴于这些方法存在的问题,我们提出了几点改进建议：建立羽毛微观结构的数据库;在不同地区建立区域性鸟类DNA分子标记数据库;联合多种分子标记以更好区分近缘物种;在不同类群的鸟类中分别建立鉴别物种的准则。     

Cytb分子标记技术在物种鉴定中的应用

细胞色素b（Cytochrome b,Cytb）基因作为一种线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）分子标记,其结构和功能是mtDNA的13个蛋白质编码基因中了解得最清楚的基因。它的进化速度适中,一个较小的基因片段就包含着从种内到种间、属间乃至科间的进化遗传信息,被认为是解决分类及系统进化问题可信的分子标记之一,目前,在很多领域已经得到了广泛的应用。本文将简要介绍Cytb基因及其研究方法,重点总结和归纳Cytb分子标记在物种鉴定中的应用现状并对其应用中的问题及发展趋势做一阐述。     

分子生物学技术在布鲁菌种型鉴定上的应用

由于布鲁菌种型较多、宿主广泛、传播途径多样,因此有必要对布鲁菌进行准确的种型鉴别,以利于该病的快速诊断、流行病学分析,并采取科学有效的防控措施.分子生物学技术的不断发展为布鲁菌种型鉴定提供了愈来愈丰富的手段,并逐渐成为布鲁菌遗传溯源研究的重要工具.MLVA和real-time PCR技术因具有重复性好、分辨率高等优势,成为布鲁菌种型鉴定研究关注的热点.多重PCR、RFLP、RAPD和REP等技术也在布鲁菌种型鉴定中得到广泛应用.为了解分子生物学技术在布鲁菌种型鉴定上的应用现状,对相关研究进行了综述.     

牦牛不同部位前体脂肪细胞分离鉴定及分化关键基因表达研究

旨在建立牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞的体外研究模型,并检测两部位前体脂肪细胞分化过程中关键基因表达量差异,为研究牦牛不同部位脂肪沉积的分子机制提供试验材料和理论依据.本研究通过采取5头18～22月龄健康麦洼公牦牛的皮下脂肪组织和背最长肌组织,利用胶原酶消化,分离皮下和肌内前体脂肪细胞,随后根据细胞来源将细胞分为肌内组和皮...     

基于粪便样本的野生犬科动物物种鉴别与棘球绦虫感染调查

旨在探索粪便样本分析对犬科动物物种鉴别的方法及其可行性,同时对野外犬科动物棘球绦虫感染情况进行调查。采用哺乳动物线粒体DNA控制区通用引物对101份采集自野外环境的犬科动物粪便DNA进行PCR扩增和测序,通过核苷酸位点变异分析、BLAST相似性比对、遗传距离分析和系统进化树构建,对粪样来源物种进行分子鉴别。同时,采用粪-抗原ELISA检测,对粪样棘球绦虫感染情况进行调查。结果表明：粪样来源物种鉴别的检测成功率为73.27%,获得的74条序列共定义单倍型20个,所有单倍型序列均可在GenBank数据库中匹配到单一物种,序列相似度为98.52%~100%。单倍型根据序列差异可分为4个单倍型集,各单倍型集间平均碱基差异为17.83~70.10,各单倍型集内单倍型碱基差异在1~10个之间。各集合间遗传距离为0.068~0.342,远大于各集合内单倍型间遗传距离0.009~0.022。系统进化分析结果显示,同一集合的单倍型以高自展值聚集成一支。综合各项分析结果,可推测所检测粪样宿主来源分别为犬、灰狼、赤狐和红狐。粪-抗原ELISA检测发现阳性样本11份,样本棘球绦虫抗原阳性率为10.89%。综上表明：线粒体DNA控制区序列分析可用于犬科动物的分子鉴别,可结合核基因等其他分子标记进一步提升检测准确率。研究区域野外犬科动物棘球绦虫粪抗原阳性率较高。     

菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌

参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。     

北海近岸养殖海域3种弧菌的分离鉴定及耐药性分析

对北海近岸养殖海域的3种弧菌(Vibrio)进行了分离鉴定,并对鉴定的弧菌进行耐药性分析。通过从北海近岸养殖海域随机采集水样,利用TCBS培养基对所采水样进行弧菌的分离和纯化,采用PCR方法和序列分析对弧菌进行鉴定,并对鉴定出的3种弧菌进行了常用抗菌药物耐药性的检测。共分离获得67株疑似弧菌菌株,经鉴定,19株为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),4株为霍乱弧菌(Vibrio cholera),4株为河流弧菌(Vibrio fluvialis)。耐药性分析研究表明,19株副溶血性弧菌总体显示对10种常用抗菌药物具有耐药性,其中100%的菌株对四环素、卡那霉素和红霉素表现耐药,94.7%的菌株对氨苄西林耐药、84.1%的菌株对左氧氟沙星和78.9%的菌株对环丙沙星耐药;4株霍乱弧菌和4株河流弧菌对10种抗菌药物的耐药性均较强,但敏感度低,两者对复方新诺明均表现为中介敏感。本研究提示,北海近岸养殖海域中弧菌种类较多,其中以副溶血性弧菌为主,大多对常用抗菌药物具有耐药性,对北海近岸海水养殖疾病防治具有一定的指导意义。     

野生老芒麦种质资源鉴定与基部叶鞘绒毛变异分析

为更好地利用老芒麦(Elymus sibiricus L.)野生资源,本研究从我国青藏高原、西北、华北、东北地区以及国外部分地区共采集了1 723份野生披碱草属种质资源,通过表型特征观测和流式细胞仪检测,共鉴定出了990份野生老芒麦种质,246份垂穗披碱草种质,并测得老芒麦的DNA含量在5.86～7.30 Gb之间,平均DNA含量为6.66 Gb;垂穗披碱草材料的DNA含量在9.50～10.36 Gb之间,平均DNA含量为9.97 Gb。研究结果显示,在西北、华北以及东北地区的部分野生老芒麦材料在苗期基部叶鞘出现了绒毛,分析发现该表型出现的概率与经度和纬度呈极显著正相关关系(P<0.01),与海拔、年年均气温以及年平均降雨量呈极显著负相关关系(P<0.01)。表明老芒麦苗期基部叶鞘绒毛的有无与环境因子之间存在着必然的联系,可能是老芒麦种质应对不同环境类型的适应性机制之一。本研究为老芒麦的形态鉴定提供了新的依据,为老芒麦种质资源挖掘和育种应用提供了材料基础。     

石河子地区宠物犬蜱的种类鉴定及其携带布鲁氏菌的检测

为了解新疆石河子地区宠物犬体表寄生蜱的种类及蜱携带布鲁氏菌情况,本试验在形态学分类的基础上,基于线粒体基因12S rRNA和细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）对宠物犬体表采集寄生蜱进行分子生物学检测,使用DNAMAN软件比对分析序列同源性,并应用序列分析软件Mega 7.0邻接法构建蜱种系统发育进化树,分析蜱种的遗传进化关系;基于布鲁氏菌外膜蛋白Omp22基因对宠物犬体表寄生蜱进行布鲁氏菌PCR检测,确定宠物犬蜱布鲁氏菌携带情况。结果显示,宠物犬体表寄生的436只蜱的形态学与线粒体基因（12S rRNA和COⅠ）分子生物学鉴定结果一致,均为新疆优势蜱种之一——图兰扇头蜱（Rhipicephalus turanicus）。基于12S rRNA基因构建的蜱种系统发育树显示,本试验所得宠物犬体表寄生图兰扇头蜱序列与GenBank中已知图兰扇头蜱的序列聚为一大支。基于布鲁氏菌Omp22基因的巢式PCR扩增结果显示,宠物犬体表寄生图兰扇头蜱携带布鲁氏菌的阳性率为4.82%（21/436）,且同源性为100%。BLAST比对显示,本试验所得宠物犬图兰扇头蜱携带的布鲁氏菌与新疆流行株YC31（GenBank登录号：MK201679.1）、QH5（GenBank登录号：MK201678.1）、EM3（GenBank登录号：MK201677.1）和ML9（GenBank登录号：MK201676.1）的同源性均为100%。本研究通过形态学及分子生物学探讨了新疆石河子地区宠物犬体表寄生蜱的种类及携带布鲁氏菌基本情况,为宠物犬体表寄生蜱的种类及蜱传疾病的监测和控制等研究工作提供了基础资料。     

理化检验在动物种属鉴定中的应用概况

阐述了理化检验确定动物种属的原理、分析的方法及其在实践中的应用概况,并对理化检验用于动物种属鉴定的优缺点进行了评价。提出了理化检验用于动物种属鉴定还需要大量的试验工作,鉴定方法的方便与快捷、鉴定成本的低廉、多学科的交叉以及与计算机技术的联合是动物物种鉴定的发展方向。