鸡肌肉组织中左氧氟沙星残留ELISA检测方法的研究

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星(LVL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法.结果表明:抗LVL血清效价达1: 212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x+0.049 5(R2=0.987 8),50%抑制浓度(IC50)为64 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL.批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%.本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求.     

鸡肌肉组织中氯霉素残留ELISA检测方法的研究

本文利用活化酯法合成了氯霉素抗原 ,作为免疫原免疫新西兰大耳白兔得到氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素间接竞争酶联免疫检测方法 ,进行了药物交叉反应性试验 ,并对鸡肌肉进行添加回收试验。结果显示抗体效价可达 1∶ 6 4 0 0 0 0 ,IC50 为 1.3ng/ ml,最低检测限达到 0 .0 5 ng/ ml,线性检测范围为 0 .1～ 36 .4 5 ng/ ml。在 0 .5、1、2 .5、5 ng/ g浓度水平添加到鸡肌肉组织中 ,测得回收率为 5 5 .4 %～ 119.0 % ,变异系数为 4 .3%～ 10 .4 %。该 EL ISA方法快速、灵敏、方便 ,满足了氯霉素残留检测的要求。     

恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究

分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星(ENR)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明:抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X+0.1193(R2=0.9878),中值(IC50)为36 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10~1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%~7.64%,批间变异系数为9.69%~11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%~89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

鸡组织中新霉素残留的ELISA检测方法的研究

新霉素为氨基糖甙类抗生素的一种,对革兰氏阴性菌具有较强的抑制作用,所以临床上广泛应用。由于新霉素具有耳毒性和肾毒性,因此我国农业部规定了新霉素的最高残留限量。目前国外检测新霉素残留的方法包括微生物法、高效液相色谱法和酶联免疫测定法[3~4],国内除农业部发布的动物     

检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R²=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-E...     

抗莫能菌素多克隆抗体检测鸡组织中莫能菌素残留的研究

本文用自制的抗莫能菌素多克隆抗体检测肉鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中莫能菌素的残留。将莫能菌素以30．0、60．0、120．0μg／kg分别添加到经处理的各空白组织中，用竞争ELISA法测得莫能菌素在肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中的回收率为78．7％～104．3％，变异系数为4．2％～18．0％，检测极限为5．0～8．51μg／kg。     

鸡组织中常山酮残留的ELISA与HPLC检测方法的比较

常山酮(Halofuginone,Hal)是一种广谱抗球虫药物,在中国Hal已成为应用广泛的抗球虫药物之一。由于Hal毒性大,其在动物组织中的残留越来越受到关注。为了保证食品安全,有必要对动物组织中的Hal残留进行监控。目前,国外已有很多关于Hal检测方法的报道,大多数是高效液相色谱法[5～     

氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10％和30％;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93％～108％、96％～110％、92.5％～104％和93％～102％.     

磺胺类药物多克隆抗体的制备与ELISA检测方法的初步研究

模拟磺胺母核结构合成了3种人工免疫原,免疫新西兰白兔,用间接竞争ELISA方法监测免疫效果。选择抑制效果较好的2组多抗血清建立磺胺类药的ELISA检测方法,绘制竞争标准曲线,并进行添加回收试验。结果表明：A组多克隆抗体对6种常用磺胺药SMD、SMM、SMZ、SDM、SDM、SD的IC10分别为0．010、0．046、0．010、0．100、0．067、0．019μg／mL,低于最高残留限量（0．10μg／mL）;C组多克隆抗体对SMD、SMM、SMZ、SDM、SQ、SD、磺胺氯哒嗪、磺胺氯吡嗪的IC10分别为0．0091、0．051、0．058、0．088、0．020、0．010、0．014、0．011μg／mL,亦低于最高残留限量。2组多克隆抗体对磺胺药的回收率为54．5％～111．8％和54．2％～130．3％,变异系数为3．6％～10．9％和3．7％～5．9％。     

猪表皮生长因子间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测猪血清或尿液中猪表皮生长因子(porcinee pidermal growth factor,pEGF)的含量,以pEGF为包被原,人表皮生长因子(hu-mane pidermal growth factor,hEGF)为竞争抗原,两者与一定量的抗pEGF多抗反应。结果表明,理想的包被抗原浓度为0.625μg/mL,抗pEGF工作浓度为1∶64000,酶标二抗工作浓度为1∶20000,可检测的最适范围为0.4ng/mL~32ng/mL,最低检测限为1ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.50%和5.22%。得到回归方程y=-34.53x 76.06(R2=0.993)和标准曲线,从而建立了快速定量测定pEGF含量的酶联免疫吸附试验方法。     

牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC₅₀)为2.1 ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2 μg/L。在5、10和20 μg/L添加浓度下,回收率为79.2%~90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。     

Establishment of Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Tilmicosin in Milk

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting tilmicosin residue in milk was developed and applied to milk samples after the determination of dilution of coating antigen and antibody to timicosin by using checkerboard method,and the optimization of coating condition,reaction time and temperature,and reaction time of enzyme-labled secondary antibody.The results showed that the 50% inhibition concentration (IC₅₀) of the indirect competitive ELISA was 2.1 ng/mL and the limit of detection (LOD) of tilmicosin in milk was 2 μg/L.The recoveries of tilmicosin added in milk at 5,10 and 20 μg/L ranged from 79.2% to 90.1% with the coefficients of variation (CV) not higher than 9.0%.The indirect competitive ELISA would not react with other common macrolide drugs.The sensitivity of indirect competitive ELISA developed in the study complied to the maximum residue limit of tilmicosin set by China,and laid the foundation for the test kit of the rapid detection of tilmicosin in milk.     

二氟沙星残留检测的Ci-ELISA方法建立

以合成的二氟沙星（DIF）人工抗原为基础，制备出了高效价抗DIF血清（1∶29×104），并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci-ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x+0.9631(r=0.9929)，中值（I50）=119.21 ng/ml，最低检测限（LOD）=1.14 ng/ml，线性范围为1.14~10000 ng/ml，方法的平均批内变异系数（CV）为4.83%,平均批间CV为10.69%。DIF以浓度15~10000 ng/ml在鸡肉中添加时，回收率为81.24%~90.64%，变异系数为8.18%~11.75%。     

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（CAP－BSA）为包被抗原，氯霉素（CAP）为竞争半抗原，两者与一定量的抗CAP－McAb反应。结果表明，理想的包被抗原质量浓度为1．25mg/L，抗CAP－McAb稀释倍数为1∶12000，酶标二抗稀释倍数为1∶5000，最适检测范围为1－100μg/L，最小检测为0．1μg/L，批内和批间变异系数分别为3．62％和5．19％。得到回归方程（y=1.2730-0.6745x,r^2＝0．9779）和标准曲线，从而建立了快速定量测定CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ciELISA）。     

醋酸甲孕酮（MPA）间接竞争ELISA检测方法的建立

将半抗原醋酸甲孕酮（MPA）衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联后，作为包被原与游离的醋酸甲孕酮竞争抗MPA多克隆抗体，通过该模式建立间接竞争ELISA方法检测MPA的残留量。试验结果表明：理想的包被抗原为0.625 μg/ml,抗体的工作浓度为1∶8000，标准曲线在1 ～50 ng/ml之间线性关系较好，最低检测限0.1 ng/ml, 得回归方程y=-1.1479x+0.9426(r2=0.9679),批内和批间变异系数分别为5. 35%、10. 89%。     

间接竞争ELISA检测兔肉中氯霉素残留方法的确定

建立了快速定量测定氯霉素(CAP)含量的间接竞争酶联免疫吸附试验方法。游离氯霉素与氯霉素辣根过氧化物酶标记物(HRP)在同一系统中竞争数量有限的氯霉素抗体结合位点,氯霉素酶标记物与氯霉素抗体结合的数量反比于游离氯霉素的数量。氯霉素浓度在0.2～20μg·ml-1范围内具有良好的线性关系回归方程为y=0.8327-0.5260x,r2=0.9862;测定低限为20ng·ml-1;方法平均回收率为83.5%,符合目前国际上氯霉素残留量检测的要求。     

达氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立

将达氟沙星（danofloxacin, DFLX）与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原, 达氟沙星为竞争的半抗原，建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25 μg/L, 多抗(DFLX-PcAb)工作浓度为1∶10000,酶标二抗的工作浓度为1∶4000,最适检测范围为0.1～10 ng/L,最低检测限为0.2 ng/L, 批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%。得到回归方程y=0.7975-0.125x（R2=0.989）和标准曲线，从而建立了DFLX的快速检测残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ci-ELISA）。     

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。