分生孢子杂交配对筛选高价值蛹虫草新菌株试验

从退化菌株中筛选出具有原有特性的新菌株,对于蛹虫草的稳定生产具有重要的实际意义。本文首先从退化菌株中分离筛选出高活性的纯分生孢子,然后按照不同亲本、两两对峙的方式进行杂交选育,最终选育出2株高价值菌株(A5×B2和A5×B5)。其中,A5×B2菌株所产子实体中虫草素含量0.83%,子实体高度4.3 cm,干品单产5.25 g/瓶,外观评级好;A5×B5菌株所产子实体中虫草素含量0.62%,子实体高度5.6 cm,干品单产6.01 g/瓶,外观评级最好。     

蛹虫草无性孢子的交配型基因类型的分子鉴定

采用PCR方法对供试的蛹虫草栽培用亲本菌株及其100株无性孢子单孢分离株的交配型基因类型进行了鉴定。结果显示:栽培用的亲本菌株同时含有MAT-HMG(MAT1-2-1)和MAT-alpha(MAT1-1-1和MAT1-1-2)两种类型交配型基因;100株单孢分离株中,40株只含有MAT-alpha类型交配型基因,25株只含有MAT-HMG类型交配型基因,其余35株含有两种与亲本相同交配型基因。     

蛹虫草子囊孢子单孢分离与交配型基因鉴定

[目的]明确蛹虫草亲本和子囊孢子单孢菌株交配型基因类型.[方法]以自主分离保存的CM1901菌株新鲜子实体为材料,采用孢子弹射和梯度稀释培养法,获得子囊孢子单孢菌株.采用PCR方法对蛹虫草的亲本及单孢菌株的交配型基因进行鉴定.[结果]获得102个子囊孢子单孢菌株.亲本菌株同时含有MAT1-1和MAT1-2两种交配型;102株单孢分离株中,仅含MAT1-1交配型菌株57株,仅含MAT1-2交配型菌株24株,另外21株为亲本型(同时含有MAT1-1和MAT1-2),MAT1-1∶MAT1-2为78∶45.[结论]分离获得102个蛹虫草子囊孢子单孢菌株,发现这些单孢菌株交配型有3类,且MAT1-1∶MAT1-2比例为78∶45,与理论值1∶1有较大差值,所以蛹虫草不属于典型的二极性异宗配合型子囊真菌.     

辐射诱变高产虫草素蛹虫草菌株的研究

[目的]筛选高产虫草素蛹虫草菌株。[方法]采用放射性元素60Co-γ射线辐射诱变方法对蛹虫草菌株进行处理。[结果]筛选出yccGy1016诱变菌株为目标菌株,其生物转化率达12.5%,菌丝中虫草素含量达481.6 mg/kg,子实体虫草素含量达9 600 mg/kg,明显高于对照菌株。[结论]经10代加富PDA斜面继代培养及罐头瓶小麦培养基栽培试验,yccGy1016诱变菌株具有产量性状稳定、产生虫草素能力强的特点。     

不产子实体蛹虫草单孢子分离株的获得及RAPD分析

对优势蛹虫草原始菌株WWM04进行单孢子分离,共获得9个单孢子分离株,采用米饭培养基培养确证并且获得6个完全不产子实体的单孢子分离株。利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记方法对菌落差异的4个菌落特征典型的不产子实体单孢子分离株(SSP2、SSP7、SSP19和SSP21)、原始菌株以及由原始菌株12次转接后退化的菌株进行遗传多样性分析。结果表明,引物S37、S61对6个菌株的扩增谱带具有非常明显的特异性,该结果为蛹虫草退化分子标记奠定基础,并且在一定程度上也印证了蛹虫草异核现象和准性生殖理论。     

人工蛹虫草固体培养基虫草素的分离纯化研究

以人工蛹虫草固体培养基为原料,首先热水浸提虫草素,然后设计单因素试验和正交试验,通过离子交换层析进行分离。结果表明:洗脱流速、料水比为主要影响因子。最优条件为:料水比1∶16,洗脱流速为30滴/min,离子柱pH 3.5,此时虫草素的得率为0.014 2%。     

蛹虫草培养基中虫草素分离提取的工艺综述

查阅了相关文献,对蛹虫草的化学成分及其药理作用、蛹虫草培养基的配制及蛹虫草的栽培作了简介。对虫草素的物化性质及生理活性作了详细综述,并对虫草素分离提纯在国内外研究动态进行了介绍,从而为从蛹虫草培养基中分离虫草素的新工艺提供了分析资料。     

大孔树脂分离纯化蛹虫草中虫草素工艺研究

考查了7种大孔吸附树脂对蛹虫草中虫草素进行吸附纯化效果,以高效液相色谱(HPLC)法测定样液中虫草素含量,筛选出适宜的树脂AB-8,研究了pH值等因素对该树脂静态吸附的影响,以及洗脱剂甲醇体积分数对静态解吸效果的影响,同时还研究了虫草素的动态吸附与解吸曲线。结果表明,AB-8树脂对蛹虫草中虫草素有良好的吸附纯化性能。当上样液pH值为5.0、吸附温度20℃、吸附液质量浓度为0.15 mg.mL-1、上样液量为10倍树脂柱体积及吸附流速为1.8 BV.h-1时,吸附效果最好。洗脱工艺条件为2.5倍树脂柱体积的15%甲醇。     

蛹虫草无性型的研究：I.分生孢子形态观察与发酵液的检测

对蛹虫草的无性型进行培养，观察了分生孢子的形态，并对其深层发酵培养物进行了检测。     

北冬虫夏草组织分离及复壮菌种的试验研究

试验结果表明:采用组织分离+复壮的技术手段可明显提高北冬虫夏草菌种菌丝的生长活力,复壮后菌丝日平均生长速率达2.65mm/d,液体培养7d后净增干物质重0.65g;复壮后菌种的出草性状得到了明显改善,平均每瓶鲜子实体产量可达27.2g。     

蛹虫草鲁山株C0511菌丝液体培养基筛选试验

液体培养蛹虫草鲁山菌株,以菌丝体产量为指标,对培养基的碳源、氮源、无机盐、维生素B1进行单因素试验,并在单因素基础上进行四因素三水平正交试验,结果表明:影响液体培养菌丝产量的主次因素依次为氮源、碳源、维生素B1和无机盐。最佳培养基为:蔗糖20 g/L、蛋白胨25 g/L、维生素B10.15 g/L,无机盐为KH2PO41.5 g/L+MgSO40.5 g/L+CaCl20.25 g/L。     

山西省北冬虫夏草优良菌株与母种培养基的筛选

从引进的北冬虫夏草菌株中筛选出适合山西省栽培的优良菌株,并且对北冬虫夏草的母种培养基进行了研究。结果表明:在供试的4个北冬虫夏草菌株中,C1菌株的栽培性状明显优于其余菌株;筛选的最适母种培养基配方为马铃薯20%,蔗糖2%,蛋白胨2%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,琼脂2%。     

外植体处理及接种部位对鲁山虫草菌种分离的影响

研究了野生状态下鲁山虫草的菌种分离方法。发现以0．5％的碘伏浸泡30s,然后用无菌水冲洗,再加入0．1％升汞中浸泡3min为外殖体消毒剂时表面消毒效果最佳。而对不同接种部位试验发现虫草子实体顶端2cm左右为最佳分离部位。     

北虫草最佳组织分离期的筛选

为提高北虫草母种质量,促进其商业化生产,采用组织分离法研究北虫草5个不同生长发育期(原基期,子实体生长15d、30d、45d和60d)组织分离对母种质量的影响。结果表明:原基期组织分离得到母种的菌丝体生长速度最快,为3.18mm/d,菌丝体生长整齐、纯白、浓密且转色效果最好,与其他4个时期得到母种的菌丝体生长速度间差异极显著。北虫草组织分离母种宜选用原基期组织。     

蛹虫草菌种退化的检测方法和影响因素

从蛹虫草菌种的退化表现、早期的检测方法、菌种退化的影响因素和退化菌种的复壮等方面对蛹虫草菌种退化进行总结,以期为蛹虫草菌种退化的研究提供新思路。     

蛹虫草001号高产菌株栽培试验

对001号蛹虫草菌种与市售蛹虫草菌种进行了对比试验,并观察了菌株在人工培养基上的生长状况.结果表明,蛹虫草001号菌种生长良好,菌丝和子实体生长速度快,产量和质量均超过对照菌株.001号蛹虫草菌种适合人工栽培和工业化生产.     

北冬虫夏草高产菌株人工培养条件研究

采用单因素试验和主要因素正交试验,对经12C6+重离子辐照选育的北冬虫夏草高产菌株G5的人工栽培最佳条件进行研究。结果表明,北虫草高产菌株G5栽培的最佳培养基为大米80%+蚕蛹粉20%,培养基料水比为1∶1.5;菌丝和子实体生长的最佳温度分别为23℃和21℃;最佳散射光照强度为500 Lx。