猪囊尾蚴重组抗原和基因工程疫苗的研究进展

猪囊尾蚴病（Cysticercosis）是由猪带绦虫的幼虫囊尾蚴寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。严重威胁着人体健康,并给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行。然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。该文就近年来猪囊尾蚴病诊断重组抗原和基因工程疫苗的分子生物学研究进展进行了综述。     

猪囊尾蚴病重组抗原和基因工程疫苗的研究进展

猪囊尾蚴病(Cysticercosis Cellulosae)是由猪带绦虫的幼虫囊尾蚴寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一,严重威胁着人体健康,并给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行.然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者.该文就近年来猪囊尾蚴病诊断重组抗原和基因工程疫苗的分子生物学研究进展进行了综述.     

猪囊尾蚴抗原成分及其诊断价值分析

猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患寄生虫病。囊尾蚴病的快速诊断是囊尾蚴病治疗和预防的前提,免疫学诊断方法是近年来的囊尾蚴病临床诊断中的重要辅助手段,高特异性诊断抗原的筛选为近年来的研究热点。囊尾蚴抗原组成复杂,包括囊液抗原、头节抗原、囊壁抗原、循环抗原和排泄分泌抗原等。其中的囊液抗原特异性较好,可用于免疫学诊断,而排泄分泌抗原诊断囊尾蚴的价值尚待进一步研究。     

猪囊尾蚴抗原的免疫化学研究

应用琼脂双扩散(DID),免疫电泳(IEP),聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对猪囊尾蚴的匀浆抗原和囊液抗原进行分析。结果表明,两种抗原间存在相同的抗原成份,囊液的免疫化学性质优于匀浆抗原,并从免疫学和生物化学角度初步探索了囊液抗原和匀浆抗原中蛋白质之间的相互关系及主要蛋白质组分。     

异源性抗原抗猪囊尾蚴感染的研究

本文报道了泡状带绦虫活化六钩蚴的超声裂解抗原可以诱导猪体产生抗猪带绦虫攻击感染的交叉保护作用。猪囊尾蚴匀浆抗原也使猪体产生了较强的抗猪带绦虫攻击感染的保护作用。泡状带绦虫六钩蚴超裂抗原免疫组与猪囊尾蚴匀浆抗原免疫组的保护情况是相似的,这表明异源免疫也可使猪体产生较好的抗猪囊尾蚴感染的免疫。由于制备异源性抗原的泡状带绦虫能够从狗的体内获得,因此在体外培养猪带绦虫未获成功之前可以解决从人体获取猪带绦虫的困难。     

猪囊尾蚴循环抗原和排泄分泌抗原研究进展

猪囊尾蚴病是由带科(Taeniidae)带属(Taenia)的猪带绦虫(有钩绦虫)(Taenia solium)的幼虫-猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)寄生于猪的肌肉和其他器官中而引起的一种人畜共患寄生虫病,俗称囊虫病。该病主     

猪囊尾蚴囊液抗原制备及ELISA检测条件的优化

本试验采用SephadexG-200层析技术纯化猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）的囊液粗抗原。共获得两种（CF1、CF2）层析抗原，以酶联免疫吸附试验（ELISA）判定抗原的最适包被浓度以及抗体的最适稀释倍数，各阶段最适反应条件，结果证明CF1具有特异性强、敏感性高、稳定性好、重复性强的特点可以作为免疫诊断囊尾蚴病猪IgG。     

猪囊尾蚴头节抗原的制备及间接ELISA方法的建立

采用Sephadex G-200层析技术纯化猪囊尾蚴头节抗原,用纯化抗原包被ELISA板,建立间接ELISA方法。通过各种条件优化,最终确定最佳试验条件为:抗原最适包被量为30mg/L;血清稀释度为1∶800;血清最佳反应时间为60min。结果表明,该方法具有较好的稳定性和重复性,可用于分泌抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选。     

囊虫病猪循环抗原的研究(初报)

用琼脂凝胶双扩散试验发现了囊虫病猪的循环抗原,并用反向间接血凝技术作了检测。103份囊虫病猪血清琼扩试验对循环抗原的检出率为22.33％(23/103);反向间接血凝试验检出率为32.03％(33/103),其余70份呈阴性反应的血清经免疫复合物解离后,又有25份呈阳性反应,总检出率为56.31％(58/103)。     

囊虫病循环抗原酶联免疫试剂检测盒的研制

以部分纯化囊虫抗原免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠,取其脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 细胞融合制备抗囊虫循环抗原（ Ｃ Ａ） Ｍｃ Ａｂ ,共获得 ８ 株分泌抗囊虫 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ 细胞株。经鉴定,筛选出组合后能获得最佳检测效果的 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ细胞株 Ｍ ｃ Ａｂ １ Ｃ７（包被）和 Ｈ Ｒ Ｐ１ Ｂ５ 作为检测用的 Ｍ ｃ Ａｂ,用其建立了检测囊虫 Ｃ Ａ 的双抗体夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法,并研制了囊虫病 Ｃ Ａ 检测试剂盒。试剂盒用于检测囊虫病 Ｃ Ａ,敏感、特异、快速、简便,囊虫病血清 Ｃ Ａ的检出率为 ９１．４３％ ,脑脊液 Ｃ Ａ 的检出率为 ９４．４４％ 。     

抗猪囊虫循环抗原杂交瘤细胞系的建立和鉴定

建立了8株抗猪囊虫循环抗原(CA)的杂交病细胞系。其中6F12和2E7为抗囊虫特异McAb;McAb 1C6、1C7、1B5、4D9、2B9和8D8与囊虫、(?)球蚴、细颈囊尾蚴抗原均可发生反应。这些McAb的腹水ELISA效价为105～107,细胞培养上清液效价为102,并均可与病猪血清中的囊虫CA反应形成沉淀线。用1B5、6F12和8D8分别致敏血球,以反向间接血凝试验检测98份囊虫病猪血清,检出率分别为70.41%(69/98)、6.12%(6/98)和7.14%(7/98)。本研究制备的McAb可用于猪囊虫循环抗原检测。     

猪囊尾蚴病病原入侵与免疫机理以及免疫预防研究进展

猪囊尾蚴病是危害严重的人畜共患寄生虫病,其病原是复杂的真核生物,有猪带绦虫成虫、六钩蚴、囊尾蚴等多个发育阶段,在人猪之间循环感染寄生发育。目前国内外已在病原和宿主个体、细胞和分子水平上对猪囊尾蚴入侵与免疫、免疫与免疫逃避以及免疫预防等方面进行了大量的研究,初步明确了虫体的组成成分与结构形态以及发育形式,与病原入侵和免疫的关系,为免疫预防控制,特别是分子免疫预防奠定了坚实的基础。但要完全控制和消灭该病,要走的路还很长。     

猪囊尾蚴抗原基因Ag1V1的克隆及其序列分析

根据NCBI上已知序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中成功克隆了低分子量抗原基因Ag1V1,同源性和种系发育分析结果显示,河南分离株Ag1V1基因的核苷酸序列和预测氨基酸序列与日本分离株同源性为100％和98.9％,说明Ag1V1蛋白基因具有一定的保守性;通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原.     

猪囊虫循环抗原的特异性

用兔抗囊虫粗抗原IgG,以ELISA双抗体夹心法检测病、健猪血清,阳性率分别为10.68％和5.30％,两者之间无显著差异;经免疫复合物解离处理后,病、健猪血清的阳性率分别为35.29％和2.3％,两者之间差异显著。琼脂凝胶双扩散试验查明,某些病、健猪血清中存在一种共同的抗原成分,导致交叉反应。这种成分不易被3.5％PEG沉淀。病猪血清中还存在一种特异抗原成分,其反应性强,主要以免疫复合物的形式存在。     

猪囊尾蚴特异性单克隆抗体的制备及其识别抗原成分的鉴定

通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。     

阿苯达唑和奥芬达唑对猪囊尾蚴延胡索酸还原酶的抑制作用

研究测定了阿苯达唑和奥芬达唑对猪囊尾蚴组织匀浆延胡索酸还原酶活性的抑制作用。结果表明两种经物均能抑制延胡索酸还原酶活性，提示苯并咪唑氨基甲酸酯药物的作用机理可能是非竞争性抑制延胡索酸还原酶复合体，从而导致虫体因能量耗竭而死亡。     

猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达

采用RT—PCR方法扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因，将扩增产物与pGEM—Teasy载体连接，重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序；构建T24基因的pGEX-4T-1原核表达载体，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、Western—blotting；用所表达的蛋白免疫小鼠，经ELISA检测血清抗体，验证其免疫原性。结果显示，所克隆的T24基因片段长716bp，含有1个678bp的开放阅读框，其编码226个氨基酸，与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％；表达的融合蛋白大小为40ku，并能被猪囊虫阳性血清识别；免疫小鼠在免疫1周后即可检测到血清抗体，第30d达到较高水平，表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。