斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

以斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶,对分离条件进行了优化,并对部分酶学性质进行了研究。结果表明:鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70%时,所得沉淀中酶活力最高。经过阴离子交换层析分离后,蛋白酶的纯化倍数达到了218倍。该蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.5,具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性,米氏常数为5.4 g/L。K+和Ca2+离子对该蛋白酶活性有较弱的激活作用,Mg2+则能显著激活蛋白酶活性;Na+和Zn2+对蛋白酶的活性有较弱抑制作用,而Cu2+和EDTA能显著抑制蛋白酶活性。     

斑点叉尾鮰鱼头明胶性质的研究

比较了斑点叉尾鮰Ietalurus punetaus鱼头骨明胶与猪皮明胶的凝胶强度、黏度、氨基酸组成、红外结构以及相对分子质量分布等物理化学性质的差异.结果表明:斑点叉尾鮰鱼头骨明胶的Bloom强度和黏度分别比猪皮明胶高26.7 Bloom和3.93 mPa*s;明胶氨基酸总量比猪皮明胶高10.78%～24.63%;斑点叉尾鮰鱼头骨明胶的结构与猪皮明胶一致,同时头三道胶相对分子质量分布与猪皮明胶相似.研究表明,斑点叉尾鮰鱼头明胶具有作为可部分替代哺乳动物明胶的潜力.     

斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白(Ig)，结果表明，斑点叉尾鮰血清Ig主要分布在35％～55％的硫酸铵沉淀区间；而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰。SDS—PAGE分析表明，纯化后的血清Ig纯度提高。通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Westernblot)试验对血清Ig的结构进行初步分析，发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72kD，轻链有3条，其分子量分别为21kD、23．5kD和26kD；在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式，主要条带的分子量分别为760kD、525kD、330kD和230kD；而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式，分子量约为870kD。     

斑点叉尾鮰细菌性病原的分离与鉴定

报道从湖北省宜都市和长阳土家族自治县内清江河内养殖网箱中患病斑点叉尾鮰体内和体表分离致病菌的初步鉴定结果。从患病斑点叉尾鮰上共分离19个菌株,经分别采用注射和浸泡法人工感染试验,证明其中11个菌株能导致试验鱼80%~100%的死亡。根据对菌株的形态和生化特性的测定结果,11个菌株中的BH-001、BH-005、BH-009和BH-011等4个菌株属于叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri),而BH-002、BH-015、BH-017和BH-019等4个菌株属于嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。而BH-004、BH-013和BH-016等3个菌株尚未能鉴定其种类。     

斑点叉尾鮰鱼肠型败血症病例治疗实报

斑点叉尾鮰肠型败血症是其养殖期一种常见的细菌性鱼病,在中国南方较多发,在北方的内蒙古自治区此病的报道尚属首次。此次对该病的治疗分别采用了土霉素、磺胺甲基异嗯唑、氟苯尼考等3种抗菌素。并结合内服中草药、外泼聚维酮碘和益生菌调节水质的方法,很好地控制了该病,对今后防治该病具有指导作用。     

斑点叉尾鮰气单胞菌的分离与鉴定

集约化养殖中,气单胞菌属细菌已成为危害渔业生产的重要致病菌。本研究自患病斑点叉尾鮰体内分离出5株气单胞菌,经形态学观察、生长特性及生理生化反应测试、鉴定,其中AHIA02、AHIA04、AHIA05为嗜水气单胞菌;AHIA01、AHIA03为豚鼠气单胞菌。用20种常规抗生素分别对分离菌株进行药物敏感性试验,结果表明:所有分离菌株仅对奥复星、复方新诺明、先锋必素等3种抗生素敏感,交叉耐药性和多重耐药性现象严重。     

斑点叉尾鮰人工繁殖研究

根据斑点叉尾鮰适合在德宏州生长繁殖的生物学特性,在2004~2005年进行了人工繁殖试验。结果表明：斑点叉尾鮰产卵温度范围为25～29℃,最适温度为27℃,水温超过31℃不利于受精卵的胚胎发育和鱼苗成活。孵化水温27～29℃。水中溶氧在5mg/L以上。为今后苗种规模化的生产提供了技术参数,解决了鱼苗长期靠引进,生产规模难以扩大等实际问题。     

斑点叉尾鮰鲇鱼爱德华氏菌的分离与鉴定

[目的]研究爱德华氏菌的鉴定方法,为爱德华菌病的快速诊断及防治提供参考依据。[方法]选取患病斑点叉尾鮰的表皮、肝脏和肾脏组织进行细菌分离,对选择性培养基上生长出来的疑似菌株进行革兰氏染色、氧化酶试验、葡萄糖发酵及生化特性试验鉴定菌株。[结果]共分离得到3株形态不同的肠杆科细菌,经过鉴定其中1株为鲇鱼爱德华氏菌。[结论]患病斑点叉尾鮰感染了爱德华氏菌。     

斑点叉尾鮰下脚料蛋白酶水解工艺优化

以蛋白质水解度为考察指标,从木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中筛选水解斑点叉尾鮰下脚料的适宜蛋白酶,并通过单因素试验和正交试验优化工艺条件。结果表明：5种蛋白酶中复合蛋白酶的水解度最高;复合蛋白酶酶解斑点叉尾鮰下脚料的最佳酶解条件为温度55 ℃,时间4 h,pH 9.0,酶质量浓度2 500 U/g,料液比1∶3,在该条件下,蛋白质的水解度为53.26%。     

斑点叉尾鮰生物学特性及人工养殖

阐述了斑点叉尾鮰的生物学特性及人工养殖技术。     

微波法测定分析鱼油脂成分(英文)

采用微波提取斑点叉尾鮰内脏鱼油,然后加酸使其甲酯化,以气相色谱/质谱法分析鱼油中的脂肪酸。结果表明斑点叉尾鮰内脏纯油脂中鱼油达到99%。从鱼油中共鉴定出23种成分,有饱和及不饱和脂肪酸,还有少量烷烃类物质。不饱和脂肪酸含量为72.84%,其中多不饱和脂肪酸为19.12%,以C18:2(16.54%)为主,单不饱和脂肪酸为53.72%,以C18:1(48.52%)为主。饱和脂肪酸含量为19.21%,主要有C16:0(14.46%)和C18:0(4.17%),多是低于C18以上的中长链脂肪酸。因此斑点叉尾鮰油脂可作功能性脂肪酸的重要膳食来源。该研究为探讨斑点叉尾鮰纯油脂成分构成,综合利用和开发斑点叉尾鮰鱼提供理论基础和质量控制方法     

敌百虫对斑点叉尾鮰的急性毒性试验

[目的]了解敌百虫对斑点叉尾鮰的急性毒性情况。[方法]以健康斑点叉尾鮰鱼种为试材,平均体重46.7 g,敌百虫设6个浓度梯度(0.1、0.4、0.8、1.2、2.4和3.2 mg/L),在室内常温静水条件下,对斑点叉尾鮰进行急性毒性正交试验。[结果]敌百虫对斑点叉尾鮰的24、48、72、96 h的半致死浓度分别为1.6、1.1、0.8、0.7 mg/L;安全浓度0.07 mg/L。敌百虫毒性强,使用时必须等毒性消失后才能放鱼苗;不同鱼类对敌百虫敏感性有差异很大,斑点叉尾鮰对敌百虫非常敏感,浓度为0.8 mg/L时已有将近50%的鱼死亡,而未死亡的鱼也表现出不同的中毒症状;大剂量使用不仅会出现残留、阻碍鱼类生长,而且还会污染水质。[结论]建议生产上敌百虫与其他药物轮用,使用时须等毒性消失后使用。     

斑点叉尾鮰致病菌株的鉴定及特性

菌株IP0004是从患病斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus肝脏中分离出的一株致病菌。经形态学观察、生理生化特性分析和16S rRNA基因序列测定分析对其进行分类鉴定,确定其为类志贺邻单胞菌Plesiomonasshigelloides。该菌为革兰氏阴性杆菌,极生单鞭毛,无芽孢,有荚膜;发酵葡萄糖、麦芽糖、海藻糖产酸,鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、β-半乳糖甙酶、α-半乳糖甙酶为阳性;其生长盐度为0~25,pH值为5~10,最适生长温度为37℃。菌株IP0004 16S rRNA基因部分序列与类志贺邻单胞菌16SrRNA相应基因序列的同源性均大于99%,构建的系统进化树显示该菌株与类志贺邻单胞菌聚为一类。菌株IP0004的细胞毒性外膜蛋白COMP（cytotoxic outer-membrane protein）基因与类志贺邻单胞菌的COMP基因序列相似性大于99.9%,说明该菌株为类志贺邻单胞菌,具有COMP基因,有一定的致病力。药物敏感试验结果表明,菌株IP0004对头孢曲松、头孢拉定、头孢唑林、氧氟沙星敏感,而对新生霉素、利复平、复方新诺明不敏感。     

斑点叉尾鮰下脚料鱼糜加工漂洗工艺研究

[目的]为了优化漂洗工艺,提高鱼糜品质。[方法]以斑点叉尾鮰鱼片加工下脚料为原料加工鱼糜,取肉后分别用纯净水（A）、0.15%NaCl（B）、0.25%NaHCO3（C）、0.15%CaCl2（D）、0.10%柠檬酸钠（E）1次漂洗,再用纯净水2次漂洗,然后离心,以白度、凝胶强度、脱脂率、脱水效果作为评价指标。[结果]无论采用哪种漂洗液,都是一次漂洗对鱼糜白度的影响最大,其中0.10%柠檬酸钠漂洗后的鱼糜白度最高,0.25%NaHCO3漂洗后的鱼糜凝胶强度最大;脱脂效果为离心〉1次漂洗〉2次漂洗,0.25%NaHCO3漂洗的鱼糜脱脂效果最好,0.15%CaCl2漂洗后的鱼糜脱水效果最好。[结论]0.25%NaHCO3溶液漂洗10min→纯净水漂洗5min→离心5min的漂洗效果最好。这是一种适合斑点叉尾鮰鱼糜加工的高效漂洗方法。     

沅水五强溪水库斑点叉尾鮰的染色体组型分析

[目的]了解沅水五强溪水库引进外来物种斑点叉尾鮰的体细胞染色体组型。[方法]采用植物血球凝集素和秋水仙素胸腔注射,取活体肾细胞低渗、固定、火焰干燥法制作染色体标本,对沅水五强溪水库引进外来物种斑点叉尾鮰的染色体核型进行分析。[结果]斑点叉尾鮰中期染色体二倍体数为2N=58,染色体配成29对,其中中部着丝点染色体4对,亚中部着丝点染色体5对,亚端部着丝点染色体13对,端部着丝点染色体7对。核型公式为2N=8M+10SM+26ST+14T,染色体臂数(NF)=76。[结论]该研究可为洞庭湖区斑点叉尾鮰的种质资源保护、遗传育种改良提供参考依据,也为进一步探讨引进外来种对本地相近物种的遗传多样性影响提供基础性资料。     

Purification and characterization of an extracellular protease from Clonostachys rosea

An extracellular protease from Clonostachys rosea (syn . Gliocladium roseum) was purified to SDS-PAGE homogeneity with 14-fold purification by ultrafiltration、ammonium sulfate precipetation、hydrophobic interaction chromatography and anion exchange chromatography. The molecular weight of the protease was 32 kDa as estimated by SDS-PAGE. The N-terminal sequence of first 10 amino acids was A-T-Q-S-N-A-P-W-G-L. This enzyme exhibited pH and temperature optima of 9-10 and 60 ℃, res…