鸡源志贺氏菌的分离鉴定及耐药性研究

昆明地区某鸡场部分鸡群突发痢疾,并有小部分鸡群死亡,疑似肠道病原菌感染所致,将采集的12份病死鸡病料进行志贺氏菌的分离鉴定、生化试验及PCR鉴定,并检测分离菌的耐药性。结果表明,共分离鉴定出志贺氏菌5株,分离菌均能发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇,其中有1株菌能迟缓发酵发酵乳糖,有2株菌不发酵蔗糖;针对志贺氏菌特异性ipaH基因设计的1对引物,扩增出393 bp的目的条带,与预期大小一致;抗生素抑菌结果显示,5株志贺氏菌对加替沙星、头孢氨苄、恩诺沙星、氨苄西林和庆大霉素均产生了耐药性,并且是多重耐药,对卡那霉素和四环素的耐药程度处于中介,对氧氟沙星具有较高的敏感性。中药抑菌方面,5株分离菌对诃子、五味子和黄芩高度敏感,但是对大黄和白头翁处于低敏程度。     

袋鼠源铜绿假单胞菌分离鉴定

为确定袋鼠死亡原因,本研究采用Biolog快速鉴定系统、16SrRNA序列分析以及传统细菌鉴定方法对2株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性、系统发育分析等生物特性的鉴定和分析,结果表明2菌株均为铜绿假单胞菌,对昆明小鼠有强致病性。系统发育分析结果表明2株袋鼠源铜绿假单胞菌16SrRNA序列与ATCC10145模式株差异很小,同源性分别为99.9%和100%,并且位于系统发育树的同一分支。     

一株鸡源志贺氏菌的分离、鉴定及耐药性分析

为了对鸡源志贺氏菌性腹泻进行快速准确的诊断和耐药性研究,试验对由贵州省动物疫病研究室提供的一株鸡源志贺氏菌进行进一步的分离、PCR鉴定及药敏试验。结果显示,经细菌分离培养、革兰氏染色及生化鉴定试验,该菌符合志贺氏菌的特点及其生化特性;PCR检测结果显示,针对志贺氏菌ipa H基因设计的一对引物可扩增出393 bp的目的条带,与预期大小一致,具有高度的特异性;对其耐药性的研究显示,该株志贺氏菌对参试的20种药物产生不同程度的耐药性。研究鸡源志贺氏菌的分离与鉴定中所结合的PCR方法具有快速、简单、特异性强的特点,能够迅速确定病原菌,并在药敏试验中发现了针对该菌敏感性较高、疗效更好的药物。结果为鸡源志贺氏菌耐药性的有关研究与临床用药提供了科学的参考依据。     

袋鼠摩根氏菌病病原鉴定

新引进一批袋鼠，于2006年8月间死亡数只，从三只死亡的袋鼠肺组织中均分离到毒力较强的摩氏摩根氏菌。     

不同动物源志贺菌的分离鉴定及耐药性检测

采用常规法对青海省牦牛、藏羊、猪、鸡等4种动物新鲜粪便中志贺菌进行了分离鉴定,并检测其耐药性。结果显示,475份样品经分离培养、染色镜检、生化试验及血清型检测分离鉴定出72株志贺菌,平均分离率为15.16%(72/475)。血清学鉴定结果为,痢疾1~4型9株、痢疾1型25株、痢疾2型17株、痢疾5~8型15株、痢疾9~12型5株、宋氏2相1株。在刚果红琼脂培养基上27株为Crb+表型,45株为Crb-表型,与致死性试验无显著相关性。72株分离菌对15种抗生素的平均耐药率为28.15%。不同动物源菌株耐药性有较大差异,鸡源、猪源、羊源、牛源志贺菌耐药现象顺序由高到低。阿莫西林+头孢噻吩为主要耐药谱。氨基糖苷类抗生素(丁胺卡那)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)、头孢类抗生素(头孢他啶、头孢噻吩)可作为相关疾病的首选药物。     

一株鸭源志贺氏菌的分离鉴定与药敏试验

用常规的细菌学诊断方法对分离自种鸭输卵管的一株未知菌进行鉴定,结果表明该菌为志贺氏杆菌;动物接种试验表明该菌对雏鸡具有很强的致病作用;药敏试验表明该菌对喹诺酮类药物和头孢类药物高度敏感。     

貉源志贺菌分离鉴定、致病性及耐药性分析

为鉴定引起河北地区貉腹泻的志贺菌并分析其相关生物学特性,本研究对2017年～2019年采自河北地区养殖场中患腹泻病貉的肛拭子、粪便及病料样品共计193份进行细菌分离,并经生化特性及PCR鉴定。将分离的志贺菌以0.25 m L/只(108cfu/mL)感染小鼠分析分离菌对小鼠的致病性。采用玻板凝集试验、PCR分别检测分离志贺菌的血清型及相关毒力基因。通过K-B药敏纸片法和PCR分别检测分离菌的耐药性及相关耐药基因,采用SPSS18软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。结果显示,从193份腹泻病貉样品中共分离到83株志贺菌,其中65株对小鼠具有致病性,且以致小鼠死亡4只(30.1%)、5只(22.9%)的菌株为主;65株致病性志贺菌分属于9种血清型,以福氏志贺菌2a (23.1%,15/65)、3a (20.0%,13/65)和1b (18.5%,12/65)型为主要流行的血清型;65株致病性志贺菌毒力基因ipaH、ipa BCD、ial、sen、Sat、Set1A、Set1B、sigA检出率均在50.8%以上,其他毒力基因检出率在38.5%～40%,未检...     

南京地区仔猪源志贺菌分离鉴定与耐药性分析

为了分析南京地区仔猪源志贺菌血清型流行趋势与耐药性。采集南京地区养殖场中患腹泻仔猪的肛拭子、粪便等病料组织126份对志贺菌进行分离鉴定,采用人工感染试验、凝集试验和K-B药敏纸片法分别检测志贺菌的致病性、血清型分布及耐药性。结果显示,从126份病料组织中分离得到52株致病性志贺菌;分离52株致病性志贺菌属于4种血清型,福氏志贺菌1a和1b血清型为地区流行优势血清型,分别占致病菌株的30.1%、40.4%;分离52株致病性志贺菌对阿莫西林、氨苄西林、磺胺间甲氧嘧啶等9种药物耐药率在53.8%～98.1%;对头孢噻呋、头孢曲松、氟苯尼考等5种药物耐药率在9.6%～40.4%。说明该地区仔猪致泻性志贺菌以F1a血清型和F1b血清型为主,耐药性严重。本试验为该地区仔猪源致泻性志贺菌病的防控提供研究基础。     

犬源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

为了对采集自天津市某动物医院犬子宫蓄脓脓汁进行病原菌的鉴定,试验采用分离培养方法进行病原菌的分离,同时对分离到的菌株进行生化试验、药敏试验、16S rRNA测序鉴定,对测序结果进行同源性分析并构建系统遗传进化树。结果表明:共分离得到两株(Fl-rj、Fs-rj)革兰氏阴性短杆菌,两株分离菌的生化特性基本一致,且都与肺炎克雷伯氏菌的生化特性相似。两株分离菌16S rRNA基因测序结果相似度高达99.8%,且两株分离菌与肺炎克雷伯氏菌(NR_117683.1)的同源性分别高达99.6%和99.9%,在系统进化树中位于同一分枝。两株分离菌均对氨曲南、头孢唑林、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素敏感,对氨苄西林、头孢噻吩、麦迪霉素、哌拉西林耐药。说明本试验分离菌株目前耐药性不强,可使用头孢类药物抑制。     

牦牛源志贺菌分离鉴定、毒力基因检测与分型

本试验旨在阐明牦牛源志贺菌致病性及分子流行特性,为探索志贺菌流行途径,制定合理的防控策略提供新思路。2017年在甘肃、青海、西藏三省(区)共采集牦牛肛门棉拭子样品1 396份,通过选择培养基筛选、生化鉴定、血清凝集试验对分离菌株进行系统鉴定,应用PCR方法检测分离株中ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B和stx七种毒力基因流行情况。参照McMLST网站数据库提供的15对管家基因序列进行MLST分型;并参考美国CDC的PulseNet实验方法,用限制性内切酶NotⅠ和XbaⅠ分别对福氏志贺菌和宋内志贺菌染色体进行酶切,对这些分离菌株进行PFGE分析。结果显示,41株分离株符合志贺菌生化特征,分为4个生化表型,B3(36.59%)和B4(32.35%)为主要生化表型。血清凝集试验鉴定23株为福氏志贺菌,包括四个血清型1a(n=2)、2a(n=16)、2b(n=3)、Xv(n=2);18株为宋内志贺菌,分为Ⅰ相(n=12)和Ⅱ相(n=6)。共检测到6种毒力基因ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B,携带率分别为100%、92.68%、73.17%、70.73%、26.83%、26.83%。具有7种毒力基因型,其中VT5和VT7型为主要流行型,分别占43.9%和24.39%,同时携带两种及以上毒力基因的志贺菌占92.68%。41株志贺菌共分为10个ST型,其中ST100、ST116、ST155型为主要流行型。NotⅠ酶切的福氏志贺菌分为13个PT型,而XbaⅠ酶切的宋内志贺菌分为14个PT型。综上所述,牦牛源志贺菌生化表型、血清型、ST型和PT既存在多态性,又有优势流行型。本试验分离的志贺菌与人源志贺菌携带相同的毒力基因,其中ipaH、ipaBCD、ial、sen基因携带率较高,对公共安全具有潜在的威胁。     

牦牛源志贺菌分离鉴定、毒力基因检测与分型

本试验旨在阐明牦牛源志贺菌致病性及分子流行特性,为探索志贺菌流行途径,制定合理的防控策略提供新思路。2017年在甘肃、青海、西藏三省(区)共采集牦牛肛门棉拭子样品1 396份,通过选择培养基筛选、生化鉴定、血清凝集试验对分离菌株进行系统鉴定,应用PCR方法检测分离株中ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B和stx七种毒力基因流行情况。参照McMLST网站数据库提供的15对管家基因序列进行MLST分型;并参考美国CDC的PulseNet实验方法,用限制性内切酶NotⅠ和XbaⅠ分别对福氏志贺菌和宋内志贺菌染色体进行酶切,对这些分离菌株进行PFGE分析。结果显示,41株分离株符合志贺菌生化特征,分为4个生化表型,B3(36.59%)和B4(32.35%)为主要生化表型。血清凝集试验鉴定23株为福氏志贺菌,包括四个血清型1a(n=2)、2a(n=16)、2b(n=3)、Xv(n=2);18株为宋内志贺菌,分为Ⅰ相(n=12)和Ⅱ相(n=6)。共检测到6种毒力基因ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B,携带率分别为100%、92.68%、73.17%、70.73%、26.83%、26.83%。具有7种毒力基因型,其中VT5和VT7型为主要流行型,分别占43.9%和24.39%,同时携带两种及以上毒力基因的志贺菌占92.68%。41株志贺菌共分为10个ST型,其中ST100、ST116、ST155型为主要流行型。NotⅠ酶切的福氏志贺菌分为13个PT型,而XbaⅠ酶切的宋内志贺菌分为14个PT型。综上所述,牦牛源志贺菌生化表型、血清型、ST型和PT既存在多态性,又有优势流行型。本试验分离的志贺菌与人源志贺菌携带相同的毒力基因,其中ipaH、ipaBCD、ial、sen基因携带率较高,对公共安全具有潜在的威胁。     

猪源假结核耶尔森氏菌的分离与鉴定

2014年8月26日云南省富宁县某生猪散养户饲养的中大猪群发生疑似猪丹毒疫情,送检病死猪组织样品经猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒II型的Real-time PCR检测,结果均为阴性。同时进行病原体的分离培养,从淋巴结中分离获得1株革兰氏染色阴性杆菌,呈两极浓染,经昆明小白鼠致病性实验、本动物回归实验、细菌生化实验鉴定,该病原体为假结核耶尔森氏菌。药敏实验结果显示该菌株对氧氟沙星、庆大霉素、诺氟沙星、头孢噻肟高度敏感,对呋喃唑酮、头孢曲松钠、四环素中度敏感,对氨苄青霉素低度敏感,对青霉素耐药。     

袋鼠摩根氏菌生物特性鉴定及系统发育分析

本研究利用Biolog快速鉴定系统、16S rRNA序列分析及传统细菌鉴定方法对3株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性等生物特性的鉴定及系统发育分析。结果表明,3株菌株均为摩根氏菌,对昆明小鼠有强致病性;3株袋鼠摩根氏菌16S rRNA序列与LMG7874模式株同源性均为99.8%,且位于系统发育树的同一分支。     

弗格森埃希氏菌的分离与鉴定

为了阐明伴侣动物发生化脓性疾病的原因,试验采用微生物学方法对天津市某动物医院的一例犬子宫蓄脓病例的脓汁进行病原学研究,包括细菌的分离、纯化、涂片和革兰氏染色镜检及基因序列分析。通过观察分离菌菌落形态和染色特征、生化培养鉴定特性、药敏试验测定该菌对不同抗菌药物的敏感程度、PCR方法扩增16S rRNA基因并测定序列、进行同源性分析和基因进化树的构建,确定病原菌的种类。结果表明:该菌在普通琼脂培养基上形成圆形、湿润的菌落,染色镜检为革兰氏阴性杆菌,生化培养特征与埃希氏菌属一致;该菌对链霉素、麦迪霉素、哌拉西啉、妥布霉素、头孢曲松、氧氟沙星、头孢西叮药物高度敏感,对头孢吡肟、头孢呋辛、头孢他啶、氨曲南、头孢哌酮和卡那霉素耐药;该菌16S rRNA基因核苷酸序列的同源性比对与弗格森埃希氏菌最接近,基因进化树构建与弗格森埃希氏菌属在同一分支上。说明该分离菌属于弗格森埃希氏菌。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

1株猪源摩氏摩根菌的分离及鉴定

从猪小肠内容物分离得到1株疑似致病菌进行鉴定。革兰染色显示,该菌为革兰阴性短杆菌;16S rDNA及同源性结果,确定其为摩氏摩根菌,命名QX01。回归试验表明,该菌能够引起昆明系小鼠肝脏和肺脏不同程度充血和出血,具有较强的致病力。19种药物的敏感性试验结果表明,该菌对头孢噻肟、左氧氟沙星和环丙沙星等10种药物敏感,对恩诺沙星、磺胺二甲嘧啶、红霉素等5种药物耐受。本试验首次从猪小肠内容物分离的摩氏摩根菌具有较强致病力,其潜在危害应引起重视。     

鸡胚源致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

在江苏五个种鸡场,从孵化后期死亡的186枚鸡胚及84羽出壳弱雏中分离出99株大肠埃希氏菌,死胚分离率为36.81％,出壳弱雏分离率为46.43％。分离菌中有50株对昆明(KM)小鼠具有强毒力,对其进行大肠杆菌O群抗原鉴定,共有15种血清型,O_(11)、O_(81)、O_(88)及O_(115)为优势血清型,其余为O_3、O_4、O_(18)、O_(26)、O_(36)、O_(60)、O_(75)、O_(93)、O_(103)、O_(1l4)、O_(113)其中O_3、O_(18)、O_(36)、O_(81)、O_(114)为国内外首次发现,未定型菌9株,占待检菌株的18％。本文还对所分离大肠埃希氏菌的培养特性,形态特征,生化特性,致病性及抗生素敏感性进行了研究。     

鸡胚源致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

在江苏五个种鸡场，从孵化后期死亡的１８６枚鸡胚及８４羽出壳弱雏中分主了出９９株大肠埃希氏菌，死胚分离率为３６．８１％，出壳弱雏分离率为４６．４３％。分离菌中有５０株对昆明（ＫＭ）小鼠具有强毒力，对其进行大肠杆菌Ｏ群抗原鉴定，共有１５种血清型，Ｏ１１、Ｏ８１及Ｏ１１５为优势血清型，其余为Ｏ３、Ｏ４、Ｏ１８、Ｏ２６、Ｏ３６、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ９３、Ｏ１０３、Ｏ１１４、Ｏ１１３其中Ｏ３、Ｏ１８、Ｏ３６、     

猪场源大肠埃希氏菌分离鉴定及耐药性分析

旨在分析新疆某规模化猪场大肠埃希氏菌耐药情况,为其临床治疗提供依据。采集某规模化猪场动物源和环境源样本240份,分离、纯化并鉴定大肠埃希氏菌,采用K-B法对临床常用18种抗菌药物进行药敏试验,同时对相关药物耐药基因进行检测。经分离、纯化、生化鉴定得到大肠埃希氏菌182株。分离菌株药敏试验结果显示,敏感率在头孢噻呋钠为100%、庆大霉素为71.2%、卡那霉素为69.1%、氟苯尼考为68.2%、氨苄西林为64.3%,耐药率在青霉素和四环素为100%、林可霉素为71.3%、阿莫西林为67.6%、复方新诺明为67%、链霉素为58.2%、磺胺甲恶唑为57.3%。分离菌株耐药基因检出率显示,tetB为96.2%、floR为95.5%、tetA为84.1%、aadA为80.8%、aac(6′)-Ib为72.0%、strA为70.9%、qnrS为68.1%、ermC为59.0%、sul3为57.1%、qnrB为53.3%、qnrA为51.6%。结果表明,该猪场大肠埃希氏菌耐药情况严重,并携带多种耐药基因。     

犬源大肠埃希氏菌的分离鉴定及药敏试验

为深入了解从郑州市某动物医院一例腹泻病犬粪便中分离出的菌株及其耐药性,对该菌株进一步进行纯化、生化鉴定、质谱检测、致病性试验和药敏试验。结果表明:所分离菌株为致病性大肠埃希氏菌,该菌株对环丙沙星、恩诺沙星、甲氧嘧啶、头孢吡肟高度敏感,对青霉素、阿莫西林、磷霉素等药耐药。