纳米ZnO对小鼠肺的毒性效应

[目的]采用长期纳米氧化锌腹腔内注射,初步测定纳米氧化锌颗粒对小鼠一般状态、肺及炎症介质的慢性影响。[方法]取25 g左右健康小鼠22只,雌雄各半,随机分为空白对照组和试验组,每组11只。试验组小鼠给予腹腔注射83 mg/ml纳米氧化锌悬浊液各0.15 ml,连续注射7 d,对照注射等量生理盐水,注射药物结束3 d后观察小鼠一般状态并取材,肺叶称重测定湿干比(W/D),采用HE染色在光学显微镜下观察肺组织形态。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液及血清中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。[结果]与对照组小鼠相比,试验组小鼠死亡率增加,平均体重明显减轻,肺的湿干比增高;血清及灌洗液中炎症因子TNF-α及ICAM-1含量显著升高,存在显著性差异(P0.05);显微镜下可见肺组织有损伤。[结论]长期纳米氧化锌腹腔注射可对小鼠肺产生慢性不良影响。     

抗MATSA单克隆抗体的制备与鉴定

【目的】制备抗鸡马立克氏病肿瘤相关表面抗原(Marek’s disease tumor-associated surface antigen,MATSA)的单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAb),为马立克氏病的相关研究及研制以MATSA单克隆抗体为载体的抗肿瘤药物提供材料。【方法】用纯化的MATSA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其染色体进行分析。将阳性杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠,制备McAb腹水,采用硫酸铵盐析法粗提McAb,并鉴定其所属亚类。【结果】获得了3株能稳定分泌MATSA McAb的杂交瘤细胞株B3、H6和D6,其培养上清液抗体效价为26~27,Balb/c小鼠接种细胞制得的腹水效价为210~211。染色体分析结果显示,3株杂交瘤细胞染色体数目均为52±2对。3株杂交瘤细胞株所分泌的McAb均为IgG 2b亚类,可与MSB1细胞反应。【结论】获得了MATSA的McAb。     

小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养及鉴定

目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化肺泡Ⅱ型上皮,进行原代培养.用改良巴氏染色法和透射电镜观察对所分离的细胞进行鉴定.结果:每只胎鼠可获得(5±2)×106的细胞产量,细胞活力为95%±2%,纯度达到92%±2%,改良巴氏法镜下观察可见胞质内含较多深色颗粒,透射电镜观察到特征性的嗜锇小体即板层小体和细胞膜上有明显的微绒毛.结论:该方法能成功分离出小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,且产量大、纯度高,能满足体外研究的需要.     

干扰素单克隆抗体的研究进展

多功能细胞因子干扰素（IFN）是生物细胞受到适量的干扰素诱生剂刺激后所产生的一类微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒、抗肿瘤、免疫调节及影响细胞分化等生物活性。与之相对应,抗IFN的单克隆抗体McAb作为一种重要的研究、检测IFN的手段,已被广泛应用于免疫机制研究、免疫功能检测、纯化IFN等领域。综述了各种IFN单克隆抗体、用途及其前景。     

纯化前后半枝莲多糖的药效学研究

采用Sevage法纯化半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)多糖,并通过苯酚-硫酸法测定多糖含量;进行急性毒性试验考察半枝莲多糖对小鼠的毒性;通过体内移植肿瘤试验测定不同剂量纯化前后半枝莲多糖对小鼠S180瘤的抑制作用.纯化后半枝莲多糖的纯度为49.99％;急性毒性试验表明800 mg/kg及以下剂量半枝莲多糖对小鼠无毒.纯化后半枝莲多糖的抑瘤率低于半枝莲粗多糖,100 mg/kg半枝莲粗多糖的抑瘤率为46.85％.     

美国西北三州的小麦育种

一、西北三州小麦生产情况 华盛顿、俄勒冈及爱达荷三州小麦收获面积常年稳定在550—600方英亩左右。单位面积产量近年来平均为52.5蒲式耳/英亩左右,总产量保持在3亿蒲式耳(1蒲式耳=35.238升)左右。西北三州是美国主要小麦产区之一。近几年来收获面积平均为579.1万英亩,约占美国小麦收获面积的8.18％。但由于单位面积产量较高,每英亩平均产量为     

松田鼠的发生与防治

农区害鼠是威胁我省农牧业生产、农牧民生命财产安全的重要有害生物之一。全省农牧区各类鼠害发生面积约12400. 05万亩,其中农区农田年发生鼠害面积约450万亩,农舍年发生66万户左右,平均鼠密度地上鼠6. 63%,地下鼠1. 84只/亩;鼠害造成的粮油年均损失约为5. 5万吨,折合人民币约1. 65亿元,极大制约了我省农业发展,影响了农民增收。本文主要介绍松田鼠在我省的发生与防治情况。     

小鼠超数排卵效果分析

本试验通过对 80只昆明白小鼠超数排卵效果的观察分析表明,超排月份、小鼠日龄及注射PMSG剂量均对超排效果有显著或极显著的影响.每只小鼠获平均可用胚数,以 4月份、35和 36日龄小鼠、注射PMSG剂量 11 2iu时最多     

伊氏锥虫单克隆抗体制备及性质研究

本研究运用杂交瘤技术成功地分离了B_8、I_2两株分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体(McAb)的细胞系。首先用可溶性伊氏锥虫抗原接种BALB/C小鼠,经过一定的免疫程序后,取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经过两次有限稀释法克隆,用ELISA方法选育出B_8、I_2两株产生抗伊氏锥虫McAb的细胞株。用琼脂扩散法与标准羊抗鼠亚类血清反应证明两种McAbs皆隶属于IgG_1亚类。细胞株在连续传代及冻存复苏后其分泌抗体能力稳定;经多种血清学反应证实,这两株McAb与伊氏锥虫可溶性抗原不起凝集反应,只有ELISA反应阳性。pH稳定试验表明,B_8株McAb比I_2株稳定。     

重组热带螨Blo t 21变应原诱导小鼠变态反应气道炎症模型的建立

为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。     

抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的研制及应用

将纯化的猜传染性胃肠炎病毒免疫 BALB/C 小白鼠后,取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞在 PEG 存在下进行融合,HAT-1640培养液筛选,并用 ELISA 间接法检测阳性克隆。通过有限稀释法进行三次克隆化后,获得了二株稳定分泌抗 TGEV 的单克隆抗体杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞染色体皆在95条以上;其分泌抗体均属 IgG_1亚类。通过阻断试验证明其作用的特异性。对该单抗在诊断上的初步应用作了探讨。     

抗雌二醇单克隆抗体的制备与鉴定

活化雌二醇(E2)C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备得E2的完全抗原,利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,最后获得了E2的单克隆抗体,对纯化的单克隆抗体的性质鉴定,结果显示:其抗体效价为1:106,抗体属于IgG2a型;分子量为179000Da;E2单克隆抗体的亲和常数K2.9108L/mol。     

抗猪轮状病毒VP6单克隆抗体的制备与鉴定

用纯化的重组PRV VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗PRV VP6的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名C5D10。经鉴定C5D10为IgG1亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数为93,细胞培养液上清及腹水效价分别为18∶00和11∶×106,且C5D10单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒发生交叉反应,显示良好的特异性。     

Production and Identification of High Affinity Monoclonal Antibodies Against Pesticide Carbofuran

To produce high-affinity monoclonal antibodies against pesticide carbofuran, and the develop immunochemical assays for people＇s health and environmental protection, the hapten 4-[[（2,3-dihydro-2,2-dimethyl-7-benzofuranyloxy） carbonyl]- amino]-butanoic acid （BFNB） of carbofuran was synthesized and Balb/c mice were immunized by the hapten-carrier （BFNB-bovine serum albumin, BFNB-BSA） conjugates. The splenocytes of immunized mice were fused with Sp2/0 cells and the cultural supernatants of hybridoma cells were screened by the indirect enzyme-linked immunoabsorbent assay （ELISA）, based on BFNB-ovoalbumin conjugates （BFNB-OVA）. Purified monoclonal antibody （McAb） was obtained from fluids of ascites, deposited by octanoic acid and ammonium sulfate. The affinity and the specificity of McAb were characterized by ELISA or indirect competitive ELISA. A hybridoma cell line （5D3） secreting anti-carbofuran McAb had been established. The titer of culture medium and ascites was up to 1：2.048 × 10^3 and 1：1.024 × 10^6, respectively, and the subtype of the McAb was IgG1. The affinity constant of the McAb was about 2.54 × 10×9 L mol^-1, with an IC50 value of 1.18 ng mL^-1 and a detection limit of 0.01 ng mL^-1. Cross-reactivity studies showed that the McAb was quiet specific for carbofuran, as among the four analogous compounds, they were all hardly recognized （4.59 × 10^-4% for 2,3-dihydro-2,2- dimethyl-7-benzofuranol and less than 3.0 × 10^4% for others）. The prepared McAb had a very high affinity and specificity, and it could be used to develop ELISA for rapid determination of carbofuran.     

抗牛轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以从黑龙江省腹泻犊牛粪便中分离的牛轮状病毒(bovine rotavirus)为抗原,免疫6～8周龄BALB/_c小鼠,取血清抗体阳性小鼠的脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。用ELISA间接法检测抗体,通过有限稀释法,克隆出一株分泌抗牛轮状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,此杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为IgM,轻链为K链。通过连续传代证明,此杂交瘤细胞株具有稳定分泌单克隆抗体的性质。杂交瘤细胞诱生BALB/_c小鼠腹水的单克隆抗体滴度可达1:10000以上。     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

伏马菌素B1单克隆抗体的制备及鉴定

 【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol•L-1;IC50值可达3.589 ng•mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫转印法鉴定抗体具有高特异性。【结论】本试验制备FB1单克隆抗体具有较好亲和力和高特异性,具有良好的应用价值。     

哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

为制备哺乳动物促卵泡素(FSH)单克隆抗体,比对了人类、家畜、部分野生动物、鼠类等哺乳动物FSH氨基酸序列,分析其种间同源性,结果发现,多种哺乳动物FSHβ亚基氨基酸序列的同源性高于80%,且线性抗原表位高度保守。从奶牛垂体组织扩增FSHβ亚基CDS片段,构建p ET28aFSH重组质粒,诱导表达FSH重组蛋白,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞孔,取效价最高孔进行克隆和亚克隆,获得1株能够分泌抗FSH的单克隆抗体细胞株,命名为B4A5。B4A5细胞株经过数次传代培养、反复冻融后生长状态良好,且能够稳定分泌抗体。采用细胞株体外培养和小鼠腹水诱生法均制备了抗FSH的单克隆抗体,其效价分别为1∶640、1∶106。分别采用Western blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的结合特异性和交叉反应性,结果显示,制备的单克隆抗体与FSH反应呈阳性,与促黄体素(LH)、促甲状腺素(TSH)、促乳素(PRL)、人绒毛膜促性腺激素(h CG)均无交叉反应性。综上,获得了1株能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体可特异性结合FSH蛋白。     

应用ELISA间接法检测抗IBDV单克隆抗体

本文用 ELISA 间接法,研究并建立了抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的检测体系。实验证明,该法具有简便、灵敏、迅速、特异性强、准确性高及重复性好的优点。是研究筛选抗 IBDV单抗杂交瘤细胞的可靠方法。