稻田Dactylosporangium aurantiacum菌中脲酶的纯化与性质研究

经磷缓液提取 ,乙醇沉淀 ,超滤去杂 ,然后经CM -纤维素柱层析 ,DEAE -SephadexA -5 0柱层析纯化了Dactylosporangiumaurantiacum菌脲酶 ,纯化倍数达 5 0 .0 1 ,活力回收率为 1 7.81 %。经SDS -PAGE垂直平板电泳测得其分子量为 42 0 0 0。经氨基酸组成分析 ,该酶含 2 71个氨基酸残基 ,该酶的紫外吸收峰为2 75nm。     

毛栓菌木聚糖酶的纯化

[目的]进一步研究毛栓菌木聚糖酶的酶学性质。[方法]对毛栓菌木聚糖酶的粗酶液进行硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换柱层析S、ephadexG100柱层析3步纯化,探讨木聚糖酶的产酶曲线及纯化方法。[结果]毛栓菌在最适培养基中培养时,木聚糖酶活力从第2天迅速提升,第8天达高峰,随后下降。经饱和度为30%~70%的硫酸铵分级沉淀后,酶活力回收率为84.931%,蛋白质含量为粗酶液的24.640%,纯化倍数为3.445。经DEAE-纤维素离子交换层析后,酶活力回收率为44.345%,酶蛋白纯化倍数为11.772。经SephadexG100柱层析后,酶活力回收率为20.201%,酶蛋白纯化倍数为16.123。[结论]毛栓菌木聚糖酶的粗酶液经过3步纯化后,酶活力回收率达20.201%,酶蛋白纯化倍数达16.123。     

稻田Dactylosporangium aurantiacum菌种脲酶的纯化与性质研究

经磷缓液提取，乙醇沉淀，超滤去杂，然后经CM-纤维素柱层析，DEAE-SephadexA-50柱层析纯化了Dactylosporangium aurantiacum菌脲酶，纯化倍数达50.01，活力回收率为17.81%，经SDS-PAGE垂直平板电泳测得其分子量为42000。经氨基酸组成分析，该酶含271个氨基酸残基，该酶的紫外吸收峰为275nm。     

卷须链霉菌木聚糖酶B的纯化

为了进一步研究链霉菌木聚糖酶的酶学性质，探讨了卷须链霉菌一种木聚糖酶的纯化方法。粗酶液经硫酸铵饱和度为20％～50％的分级沉淀和Q-sephrose FF离子交换柱层析2步纯化，得到一种电泳纯的木聚糖酶。定名为XynB；酶蛋白纯化倍数达到10．0倍，酶活力回收率达到24．0％。SDS-PAGE结果表明，该木聚糖酶的分子质量为22．0ku，属于低分子质量的木聚糖酶。     

超声波对菜豆种子超氧化物歧化酶活性的影响

菜豆种子粗酶液经乙醇-氯仿、丙酮沉淀、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-75柱层析,获得比活力为127．45U／mg的超氧化物歧化酶(SOD),该酶活性受H2O2和KCN强烈抑制,经电泳鉴定为3种SOD同工酶,部分纯化的SOD证明为Cu,Zn-SOD,经不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳获得其中1种电泳纯的酶,超声波处理此酶后,酶活力发生改变,适宜的超声波参数能显著提高酶活力,经超声波处理后,SOD的紫外吸收光谱无明显变化,而紫外差示光谱在一定波长范围内出现正峰和负峰。     

树莓超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质研究

树莓SOD粗酶液经硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100柱层析,同时对比DEAE-52柱层析和金属螯合亲和柱层析,并对其部分性质做了研究。从树莓中纯化得到3种Mn-SOD同工酶:SODⅠ、SODⅡ、SODⅢ。结果表明经金属螯合亲和柱层析的回收率和纯化倍数远高于DEAE-52柱层析。3种SOD对KCN和H2O2均不敏感,最大紫外吸收峰均为280 nm,SODⅠ和SODⅡ受温度影响较小,SODⅢ受温度影响稍大,pH值在7~9范围内3种SOD的相对酶活力较高。     

假海源菌ZJCN121岩藻多糖酶的纯化及其性质

液态发酵培养假海源菌ZJCN121,粗酶液经过丙酮沉淀和Sephadex G-100柱层析分离纯化得到回收率为13.5%,纯化倍数为21.8,比活为20.59 IU·mg-1的电泳纯岩藻多糖酶。采用SDS-PAGE电泳和EIF-PAGE电泳,分别测得酶的相对分子质量为60.2 kDa、等电点为4.3。该酶的最适反应温度为50℃,最适pH为6.5。其催化Fucus vesiculosus岩藻多糖的Km为5.87 mg·mL-1,Vmax为6.11 g·L-1·min-1。Ca2+、Ba2+对酶稍有激活作用,Fe2+、Cu2+则强烈抑制酶活,Mn2+、K+、Zn2+也在一定程度上抑制酶活性,Mg2+对酶的作用效果不明显。     

一种新的镰刀菌Q7-31木聚糖酶Xyn9的分离纯化鉴定及酶学特性

为对植物病原菌镰刀菌(Fusarium sp.)Q7-31所产木聚糖酶进行鉴定及酶学特性分析,在发酵产酶培养基上对Q7-31进行发酵培养,获得能够高效降解植物细胞壁的粗酶液。然后,采用Sephacry S-100凝胶柱层析和DEAE弱阴离子交换柱层析对粗酶液进行分离纯化后得到木聚糖酶Xyn9,并对其开展蛋白质组学研究和酶学特性分析。结果表明:粗酶液中木聚糖酶比活为16.58 U/mg,纤维素酶比活为0.428 U/mg,细胞壁降解酶比活为0.019 8 U/mg,蛋白含量为2.17 mg/m L。Xyn9的蛋白质组学研究结果显示,其分子量为21 ku、等电点为6.86,接近GH10家族。纯化后Xyn9的酶学特性表明,最适反应温度为47℃,最适p H值为5.6,该酶在33℃以下和在p H值5~6的范围内较稳定;金属离子K+对该酶有激活作用,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+抑制该酶活性,Cu2+、Hg+使该酶完全失活。综合Xyn9的分子量、蛋白质组学结果以及酶学特性,最终将其鉴定为一种新的介于GH10家族与GH11家族之间的内切木聚糖酶。     

鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、 DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析、 Sephacryl S-200 凝胶过滤等步骤, 从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶, 该酶纯化倍数达58.3倍, 比活为337.4 U/mg. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121.0 kD, 亚基分子量为60.5 kD. 以磷酸苯二钠为底物, 测得该酶的最适pH为9.0, 最适温度为40 ℃. Na 、 K 、 Li 等一价离子对该酶活性基本无影响, Mg2 、 Mn2 对该酶活性有激活作用, Cd2 对该酶活性有抑制作用. 米氏常数Km为1.28 mmol/L.     

中华蚱蜢超氧化物歧化酶的提取纯化研究

经丙酮沉淀、硫酸铵盐析、DE—52柱层析从中华蚱蜢中提取纯化获得超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),当丙酮加入量为提取液体积的1．4倍,硫酸铵饱和度60％联用时能得到最佳的纯化效果,再经DE—52柱层析进一步纯化,效果更佳。经纯化的酶比活力为2411U／mgpro,纯化倍数为141,酶的回收率为41％,亚基分子量为16 000Da。     

青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性,筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料,采取不同料液比提取青梅SOD粗酶,以Sevage法除去杂蛋白,硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时,测得酶的比活最高,为25．34U／mg蛋白;粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显;粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好,比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1,温度为25～30℃,pH值为7．8,Sevage法除去杂蛋白,（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下,总蛋白为215．13mg,酶总活力为5415．74U／mg蛋白,比活为25．34U／mg蛋白。     

淋浆水中SOD提取工艺研究

[目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件。[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料，比较甲苯、异丙醇和乙醇一氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果，研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响，采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化，并采用H2O2，和乙醇一氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定。[结果]试验确定以80％的异丙醇为最佳粗酶液提取条件。丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品，其酶比活为1026U／mg，酶回收率达65．2％。该酶经H：0：和乙醇一氯仿敏感性鉴定为Cu·Zn．SOD，对热和酸碱度具有一定稳定性，在50℃以下，酶相对活性保持在91．2％～100％，pH为3．0～10．0时SOD活性保持在74．1％一93．6％。[结论]该提取工艺过程简便，易操作，是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺。     

牛乳中超氧化物歧化酶(SOD)的提纯与鉴定

新鲜牛乳经超速离心,氯仿乙醇处理,丙酮沉淀、透析、ＤＥＡＥ纤维素柱层析等步骤使其中Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ得到了纯化,提纯后酶的比活为１４９．５Ｖ／ｍｇ。该酶对Ｈ２Ｏ２敏感,并且在２７２ｎｍ和６７５ｎｍ处各有一吸收峰,证明被纯化的酶是Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

意大利蜜蜂蛹超氧化物歧化酶提取技术研究

以意大利蜜蜂蛹冻干粉为研究材料,经提取、盐析、浓缩、透析和DEAE纤维素离子交换柱层析等纯化步骤,获得了一种超氧化物歧化酶(SOD)。该酶蛋白结晶呈菱形,PAGE法显示为均一的蛋白谱带。在相同时间内,测定了pH值、温度对该酶活力的影响。结果表明:意大利蜜蜂蛹中SOD在pH值为8.3时,酶活力最高,pH值高于或低于8.3时,酶活力均有明显下降;温度在25℃左右时,该酶活力最高,40℃时保持活力在80%以上,到90℃时没有活力,说明意大利蜜蜂蛹SOD是一种比较耐热的酶,这为SOD的提取提供了新酶源。     

嗜热真菌Neosartorya fischeri P1脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

从云南酸矿废水中获得了一株脂肪酶活性较高的嗜热真菌,经显微形态及转录间隔区（ITS）序列分析鉴定为新萨托菌,命名为Neosartorya fischeri P1。通过同源克隆,从该真菌中获得了脂肪酶基因Lip024,并在Escherichia coli BL21 (DE3) 和Pichia pastoris GS115 中进行表达,表达量分别为0.09 U/mL、0.26 U/mL。重组酵母菌株在3.7L发酵罐进行高密度发酵后,重组酶酶活达5.22 U/mL。重组蛋白经超滤浓缩和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。重组酶酶学性质分析表明：该酶的最适pH为7.0,在pH 3.0~7.0的范围内非常稳定,酶活力均保持在95%以上;最适温度为50℃,并具有一定的热稳定性。此外,Ca2+和Mg2+能够显著提高Lip024重组脂肪酶的酶活。     

盐胁迫下丛枝菌根真菌对生菜生长和生理特性的影响

于盆栽条件下设0、50、100和150 mmol/L NaCl处理,对生菜(Lactuca sativa Hort.;品种"芳妮")接种丛枝菌根(arbuscular mycorrhizae, AM)真菌摩西管柄囊霉(Funneliformis mosseae),测定生菜的株高、茎粗、根系活力、叶片相对电导率和防御性酶活性.结果表明,随NaCl浓度的增加,生菜根系AM真菌侵染率逐渐降低;生菜株高、茎粗、根系活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、过氧化物酶(peroxidase, POD)活性也呈下降趋势,而叶片电导率显著提高.于低盐浓度(特别是50 mmol/L NaCl)处理下,接种AM真菌显著提高了生菜的茎粗、株高和根系活力,降低叶片电导率,并提高叶片SOD和POD酶活性.结论认为,较低盐浓度胁迫下,接种AM真菌可通过提高根系活力和防御性酶活性、降低细胞膜质透性而缓解盐胁迫对植株的伤害,提高植物的耐盐性.     

大蒜超氧化物歧化酶的分离纯化及其性质的研究

以壳聚糖为基质的金属螯合亲和层析法纯化大蒜SOD ,得到比活为 1191U/mg的酶蛋白 ,回收率为 71% ,纯化倍数为7.2 9。实验表明 ,经 8mol/L的尿素处理后大蒜SOD活性不发生变化 ,并且可耐 6 0℃高温 1h而活性不下降     

木瓜超氧化物歧化酶粗酶提取工艺初探

[目的]筛选木瓜超氧化物歧化酶(SOD)粗酶最佳提取工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为原料,以溶解SOD,去除杂蛋白,沉淀SOD为基本工艺程序,对SOD的4种提取工艺进行比较研究。同时对4种工艺提取的SOD单位蛋白、活性、比活的检测结果进行比较。[结果]磷酸缓冲液的用量对提取效果有直接影响,缓冲液与木瓜之比为3∶1,测得其比活最高,为54.55 U/mg。粗酶液加2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去除杂蛋白效果比较明显。粗酶液添加(NH4)2SO4到90%饱和度沉淀SOD效果较好,比活较提取液上升44.52 Umg。[结论]木瓜SOD粗酶最佳提取工艺条件:温度为25～30℃,pH值为7.8,0.05 mol/L磷酸缓冲液与木瓜比例为3∶1,用2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去杂蛋白,添加55%(NH4)2SO4至90%饱和度沉淀SOD。