不同继代培养次数对苹果八棱海棠离体培养和遗传转化的影响

以苹果八棱海棠离体新梢和幼叶为外植体,研究不同继代次数对其离体繁殖、再生和遗传转化的影响。结果表明,随着继代培养次数的增加,继代10次和48次的八棱海棠离体增殖倍数、生根能力、不定芽的再生频率、每外植体再生芽数和GUS基因瞬时表达率均显著高于继代5次的;继代10次的增殖倍数和GUS阳性率明显多于继代48次的,其它指标相互间差异不显著;说明继代10次的芽苗较适合用于八棱海棠离体培养的外殖体材料,其幼叶较适于遗传转化研究。     

多裂叶荆芥离体再生体系的建立

以多裂叶荆芥无菌幼苗根、茎段、叶片等为外植体,进行不定芽离体再生,建立了多裂叶荆芥离体快速繁殖体系,研究了不同外植体和附加不同外源激素配比对不定芽离体再生的影响。结果表明:多裂叶荆芥离体再生的最佳外植体为带有叶腋的茎段,诱导不定芽再生的适宜培养基为MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L TDZ,每个外植体产生不定芽数平均为18个;不定芽增殖培养每4周为1个周期,理论年繁殖系数可达1×1812;当不定芽生长至3~4cm时移入生根培养基诱导生根;适宜的生根培养基为MS+0.2mg/L NAA,移栽成活率为53.85%。     

草莓叶片再生体系的建立

以草莓‘红颜’和‘章姬’的叶片为外植体,研究暗培养时间、不同植物激素及浓度对不定芽诱导的影响,不同植物激素种类浓度及继代次数对不定芽增殖的影响,以及组培苗生根的最佳培养基。结果表明:草莓叶片不定芽诱导的最适宜培养基为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D,暗培养天数15~20 d;不定芽增殖的最适宜培养基为2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,‘红颜’组培苗适宜继代4代,‘章姬’组培苗适宜继代5次;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA生根效果最好。     

马哈利樱桃叶片再生的研究

利用马哈利樱桃的无菌苗叶片做外植体 ,进行离体叶片再生不定芽研究。结果表明 :培养基中添加的激素浓度、种类、配比均影响不定芽再生 ,BA诱导马哈利樱桃离体叶片再生的活性强于TDZ ;在WPM BA 5mg/L IBA 0 .7mg/L培养基上 ,通过 3次继代培养的不定梢的叶片 ,再生不定芽的频率达 5 2 .4%。     

紫叶稠李叶片离体培养再生植株

以紫叶稠李为试材,采用组织培养方法,研究不同激素对其试管苗不定芽诱导、不定芽生根及成苗影响。结果表明:叶片切块可诱导产生大量的不定芽,MS附加0.5mg/L BA和0.01mg/L NAA的培养基不定芽诱导率为50.1%;利用植物激素0.5mg/L BA,0.5mg/LNAA,0.5mg/L KT和0.2mg/L IBA的组合,不定芽可多次继代培养增殖;不定芽在附加0.4mg/L IBA的MS培养基上生根,生根率为67%。该试验结果说明,紫叶稠李试管苗叶片可作为外植体离体培养获得再生植株,BA是主要的调控植物激素,IBA对生根有一定促进作用。     

茎段外植体白化处理促进“皇家嘎拉”苹果不定芽再生

研究比较了来自正常和白化处理的皇家嘎拉（Royal Gala)苹果（Malus domestic Borkh)新梢节段外植体不定芽的离体再生，。结果表明，白化处理的新梢顶部第一节段外植体所产生的不定芽数比第二、第三、第四节段分别高2、8、73倍；白化新梢的外植体不定芽再生数目比同一部位正常新梢高7倍。培养基添加较低浓度的TDZ有利于不定芽再生，对白化外植体来说，1μmol/L比10μmol/L高2．5倍，非白化外植体则高7倍,平均每个外植体的不定芽再生数高达68．8个。白化第一节段外植体的不定芽再生能力比常用的叶片外植体高4倍，表明该类外植体可用于苹果的转基因和染色体组工程育种。     

苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。     

‘苹果梨’离体叶片再生体系的建立

【目的】为了给梨转基因研究提供稳定、高效的离体再生体系,【方法】以‘苹果梨’为试材,NN69作为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、暗培养时间及外植体类型等因素对其再生体系建立的影响,筛选出较适合‘苹果梨’不定芽分化的培养条件。【结果】结果表明,较适合‘苹果梨’分化的外植体为继代4次以上(含4次)的组培苗叶片,适宜分化的培养基为NN69+1.5 mg.L-1TDZ+0.4 mg.L-1NAA,结合20 d的暗培养,再生频率达到71.00%,平均再生芽数为2.21。【结论】影响‘苹果梨’离体叶片再生的最关键因素是外植体的继代次数。     

石榴离体培养再生体系的研究

对石榴休眠枝段、成熟叶片及当年生新梢离体培养 ,建立其再生体系。结果表明 ,以休眠枝段、成熟叶片为外植体均能形成愈伤组织并分化出不定芽 ;当年生新梢茎段培养 ,以MS +BA 2 0mg·L-1+NAA0 3mg·L-1对茎段腋芽的增殖最适宜。诱导生根 ,用 1/2MS为基本培养基附加NAA 0 5mg·L-1+活性炭0 1mg·L-1+蔗糖 2 0g·L-1,生根率达 95 8%。培养基中附加 0 1%活性炭 ,对促进生根均有显著效果。     

菊花不同外植体组培快繁及其再生体系的研究

以菊花不同外植体为试材,采用离体培养快速繁殖的方法,研究菊花不同外植体在不同的培养基中诱导不定芽再生的频率。结果表明:菊花不同基因型外植体在含适宜6-BA、NAA等激素的培养基中形成愈伤组织的难易程度不同,愈伤组织诱导形成不定芽的能力强弱也不一样;不同基因型菊花外植体的不定芽诱导率高低排序是花蕾花瓣茎段叶片;对菊花的花蕾、花瓣、茎段和叶片来说最适合的培养基配方是MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L,不同培养基诱导不定芽的能力为花蕾花瓣茎段叶片,其中,菊花花蕾和花瓣的再生能力较强。最合适的生根培养基是1/2MS+NAA 0.2mg/L。该研究成功的建立了菊花不同外植体离体培养再生途径,并获得了再生植株。     

Plant regeneration of Fraxinus angustifolia by in vitro shoot organogenesis

The in vitro regeneration of Fraxinus angustifolia through bud/shoot organogenesis on embryonic explants was investigated. Embryo axes and cotyledons from mature seeds underwent adventitious regeneration after exposure to growth regulators, the embryo axes showing a greater regenerative potential than cotyledons. While the MS medium proved effective for the induction and initiation phases, it was inadequate for bud development, and was replaced by DKW medium. A constant supply of benzyladenine (BA) appeared essential for all phases. The gelling agents used had an important role in morphogenesis: Duchefa Gelrite positively affected the number of new buds per explant. The rooting of developed shoots was easily achieved on auxin-free WPM medium and most of the rooted plantlets “hardened” after a period of acclimation in a mist greenhouse.     

甜樱桃砧木离体叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的樱桃不定芽离体再生体系,以30～40d苗龄的甜樱桃砧木ZY-1的组培继代苗为试材,取上部幼嫩叶片或不含腋芽的茎段,分别从培养基生长调节剂配比、接种材料类型、叶片接种部位、接种方式以及培养条件等方面进行了不定芽再生技术研究。结果表明,培养基中添加7.0mg/L的6-BA与0.5～1.0mg/L的IBA配比时不定芽再生率和出芽数均较高,TDZ和NAA不适于诱导ZY-1叶片再生不定芽;接种继代苗茎段比叶片再生率高;接种叶片以选择嫩叶横切2刀、远轴面向下接触培养基的方式为好;叶片不同部位处理以带叶柄的基部叶块最易再生;叶片接种后在25℃室温条件下,先暗培养3周再照光,利于不定芽的再生。     

华东葡萄白河-35-1器官离体再生体系建立的研究

以华东葡萄株系白河-35-1(Vitis pseudoreticulata clone Baihe-35-1)的茎段和叶片为材料,通过器官发生途径研究了不同激素及浓度处理组合对华东葡萄白河-35-1无菌苗茎段和叶片诱导不定芽的影响。结果表明,通过调整不同的激素浓度组合和选择不同的外植体可以成功诱导出不定芽。较低的激素浓度组合有利于外植体不定芽的再生。所选用的外植体中,茎段比叶片更易诱导出不定芽。诱导出不定芽的最适激素组合为TDZ1mg·L-1+NAA0.05mg·L-1,其中茎段不定芽诱导率为12.8%,叶片不定芽的诱导率为3.3%。将不定芽置于MS基本培养基+0.2mg·L-1IBA培养基上培养,获得了完整植株。     

车轮梅茎段高效再生体系的建立

 以车轮梅 (Rhaphiolepis indica L.)茎段为外植体。探讨基本培养基种类、植物生长调节剂组合、蔗糖浓度和AgNO3等因素对茎段器官发生和植株再生的影响。结果表明：MS+6-BA 2.0 mg·L^-1 +NAA 0.5 mg·L^-1 + AgNO3 1.0 mg·L^-1+蔗糖40 g·L^-1培养基最适合不定芽的分化和增殖,不定芽分化率达90%以上,平均每外植体分化不定芽数达5.38个。不定芽可在1/2MS培养基中有效伸长,适宜生根培养基为1/2MS+NAA 1.0 mg·L^-1,生根率达到100%。     

外植体及培养条件对葡萄不定芽再生的影响

以优良无核葡萄品种莫利莎、皇家夏天为试材,分别从外植体类型、叶片接种部位、接种方式及培养条件等方面进行不定芽再生技术研究。结果表明,2品种葡萄试管苗离体叶片切割后接种较节间和叶柄容易诱导不定芽再生;将叶片切分为叶尖、叶中、叶基部叶块分别接种,其不定芽再生能力没有差异;取自培养30～50d继代苗上的叶片,其不定芽再生效果相同;叶块以近轴面或远轴面接触培养基的接种方式对不定芽再生影响不大,不过叶片远轴面贴近培养基接种,产生的愈伤组织状态较好;25℃左右小幅变温或恒温的条件能诱发2个葡萄品种产生较多的不定芽;葡萄不定芽再生须经黑暗培养或弱光培养,暗培养时间在2周与4周之间再生效果差异不显著。     

地被月季‘Royal Bassino’高频再生体系的建立

 以地被月季‘RoyalBassino’为试材, 进行了组培快繁和外植体再生条件的研究。结果表明,以带有腋芽的茎段为外植体, MS中添加6-BA 1.5 mg/L和IBA 0.1 mg/L 为最适诱导培养基, 诱导出芽率100%; MS中添加6-BA 0.5 mg/L和IBA 0.05 mg/L可以获得最高增殖倍数(6.3) ; 而添加IBA 0.01 mg/L的1/2MS为最佳生根培养基, 生根率92%。试管苗经7 d驯化后, 移栽成活率在99%以上。分别以叶柄、叶盘和茎段为外植体进行再生培养, 以MS为基本培养基, 叶柄在添加噻苯隆(TDZ) 7μmol /L的诱导培养基中暗培养10 d后, 转接到添加6-BA 0.5 mg/L的再生培养基中光照培养约20 d, 可以获得57.1%的芽再生率。     

西瓜高效再生体系的建立

以优质小果型西瓜品种西173和小麒麟为材料,系统研究了以子叶为外植体的西瓜组培高效再生体系。结果表明:2个西瓜品种在不定芽和愈伤组织诱导上存在着较大差异,在MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1的分化培养基上,西173不定芽诱导率最高达到92.6%,在MS+6-BA2.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1培养基上小麒麟不定芽诱导率最高达到89.7%;诱导出的不定芽丛伸长以MS+KT0.2mg·L-1培养基最佳;2个西瓜品种不定芽在MS+IBA0.2mg·L-1培养基上均获得了较好的生根效果。组培苗移栽后保持高温、高湿是移栽成活的重要条件。西瓜高效再生体系的建立为应用基因工程技术改良西瓜品质和提高其抗逆、抗病性奠定了基础。     

薯蓣茎段组织培养的研究

以薯蓣的单芽茎段为外植体,采用不同种类、浓度的植物生长调节剂进行离体培养。研究结果表明,以MS为基本培养基(蔗糖30g/L、琼脂6g/L),附加0.2 mg/L BA 0.01 mg/L NAA作为芽诱导培养基效果最好,诱导率高达83.2%,芽苗长势良好,叶片较大,叶色浓绿;继代增殖培养以MS 0.5 mg/L BA 0.05 mg/L NAA为最佳培养基,培养25d后增殖系数达4.38;诱导生根的最佳培养基为1/2 MS 0.2 mg/L IBA,生根率为86.7%,组培苗根系粗壮,长势旺盛。