造血器官机能障碍对家蚕存活性能的影响

为了研究造血器官机能障碍后家蚕免疫机能的变化，用重离子射线局部照射家蚕幼虫的造血器官，调查了造血器官机能障碍后不同饲料饲养条件下家蚕的体重、血淋巴中多酚氧化酶的活性、添食苏云金杆菌后的生存率及大肠杆菌注射后在体内诱导产生的应急蛋白质量的变化。结果表明：造血器官机能障碍后，血淋巴中多酚氧化酶的活性减弱，大肠杆菌注射后在体内诱导产生的应急蛋白质量显著减少，添食苏云金杆菌后的家蚕生存率明显下降；用桑叶饲养时5龄的体重几乎没有增加，而用无菌的人工饲料饲养时体重增加与对照蚕的差异不显著。由此得出结论：家蚕造血器官受到破坏后，引起由血球参与的细胞性反应和体内抗菌蛋白质参与的液性反应减弱，最终导致机体的免疫机能下降；而通过清洁饲养可以改善由造血器官机能障碍所带来的影响。     

家蚕肾脏形卵(ki)的荧光差异显示研究

为了探明家蚕（Bombyx mori)肾脏形卵的胚子不能正常发育的原因。使用FDD（flourescent different display)法对ki(kidney)基因同质型与异质型的母蛾所产未受精卵及受精24h卵的mRNA进行了差异显示研究。通过137组引物组合进行FDD差异显示，结果检出8254条扩增带。其中未受精卵与受精后24h卵之间的差异片段为206条，占总片段数的2．5％，而ki同质型与ki异质型的差异片段为141条，占总片段数的1．7％，其余的95．8％的扩增片段为4方共有，并且约60％的差异带是比较清晰的。回收了较明显的差异片段计199条，占总扩增带数的2．4％，并对其中部分差异片段进行序列分析表明，其中5个克隆序列分析为：small heat shock proteins,proprotein convertase,cancer antigen like protein fusion RNA-binding protein及receptor like protein kinase同源序列，其余5个克隆序列未发现同源性，可能是新基因。     

家蚕耐氟笥RAPD分子标记研究

在含有耐氟主效基因的家蚕品种T6和高敏感品种733新及其近等基因系NF733新中，采用200个RAPD随机引物进行扩增，获得了与家蚕耐氟性有关的两个分子标记OPD－08850和OPB－10917，用OPB－10917，分子标记在加交世代中进行检测，其结果是各回交世代耐氟性个体都出现同样的特异带，从而验证了分子标记的可靠性。     

低分子量热激蛋白Bmhsp19.9基因的表达

利用RT-PCR技术，对家蚕(Bombyx moil)低分子量热激蛋白Bmhsp19．9基因进行了定量表达分析。Bmhsp19．9在各组织中均有一定量的表达，但不同组织间的表达差异达10多倍，表达量丰富的组织是生长发育旺盛的组织，如精巢和卵巢，然后是丝腺、蛹等组织。其应激表达模式可分为3类，以其在精巢、后部丝腺和脂肪体中的强应激表达模式为主，经热刺激处理后其表达量有显著增加。经刺激诱导2h后其表达量达到最高，随后逐渐降低，在热刺激诱导12h后是未刺激的2～3倍，而此时Bmhsp19．9在脂肪体中的应激表达是其对照的10多倍。根据Bmhsp19．9在不同组织中的基本表达量、应激表达量和应激表达的持续时间各不相同，显示其与细胞分裂与分化等生命活动有一定联系。并认为其在后部丝腺、脂肪体、精巢、卵巢与血液中作用方式不一样，推测其作为分子伴侣在组织间的作用对象与作用效应也应有所差异。     

壬基酚对家蚕（Bombyx mori）生长发育的影响

采用添加环境激素壬基酚（Nonylphenol,NP）人工饲料饲养家蚕（Bombyx mori）的验方法,观察了家蚕的生长速度、生长量、变态、生命力情况。结果表明,连续取食0．500mmol·L^-1以上浓度壬基酚的饲料,家蚕幼虫和蛹的生长速度、生长量、发育整齐度、生命力等都明显下降,在发育后期和蜕皮、化蛹、羽化等变态时期更加明显。同时,NP在蚕体内可能有累积作用。2．000mmol·L^-1浓度的NP能使家蚕幼虫很快死亡。NP对家蚕生长发育的影响有明显的性别差异,导致家蚕的雌雄大小开差缩小,并且具有显著的浓度效应和时间效应,是环境激素效应的典型表现。     

家蚕卵黄蛋白组成及其胚胎时期的变化

家蚕(Bombyx mori)卵黄蛋白是家蚕胚胎发育的重要营养和能量来源。采用直接解剖蚕卵获取卵黄蛋白，结合蛋白质双向电泳和图像分析，对家蚕处女蛾卵及不同胚胎发育阶段蚕卵的卵黄蛋白质进行了研究，发现家蚕卵黄蛋白有203个蛋白质斑点；不同家蚕品种之间卵黄蛋白的组成存在一些差异；同一品种不同发育时期胚胎卵黄蛋白的组成基本保持不变。暗示了在胚胎发育过程中，胚胎不是选择性地吸收利用卵黄蛋白颗粒中的某种或某些蛋白质，而是以卵黄蛋白颗粒为单位，一个个地吸收利用。     

家蚕杆状病毒bro-d基因缺失对病毒基因转录和细胞凋亡的影响

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)bro (baculovirus repeated ORF)-d基因普遍存在于多种感染鳞翅目昆虫的多角体病毒基因组中,是杆状病毒中一类重复开放阅读框序列.为了解bro-d基因在病毒感染过程中的作用及其与宿主细胞凋亡之间的关系,本研究利用Red重组技术敲除BmNPV基因组中的bro-d基因,构建基因缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid,并将该缺失型病毒转染家蚕BmN细胞,利用qRT-PCR技术检测bro-d基因的缺失对病毒基因组复制、转录水平以及抑制凋亡蛋白2基因(inhibitor of apoptosis protein 2,iap2)的影响.结果显示,bro-d基因缺失后会导致病毒基因组的复制水平显著下降(P＜0.05),同时病毒的早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p1O的转录水平也都显著下降(P＜0.05);iap2的转录水平显著下调(P＜0.05).在bro-d基因缺失型病毒的复制水平明显低于野生型病毒的情况下,仍会导致细胞活力显著下降(P＜0.05);bro-d基因缺失引起细胞B淋巴细胞瘤-2(B-celllymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量明显低于野生型病毒,而Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)含量显著高于野生型病毒(P＜0.05),进而导致细胞凋亡水平上升.结果表明,bro-d基因不仅对病毒各时期基因表达水平具有调控作用,也可通过调控iap2的表达进而调控宿主细胞的凋亡水平.研究成果为深入了解bro-d基因在病毒感染过程中的功能提供了基础资料,也为通过延长宿主细胞寿命、提高目的蛋白表达产量来进行杆状病毒表达载体的改造提供了新思路.     

家蚕AFLP分子连锁图谱的构建及其分析

以F2代91个个体作为作图群体，为家蚕（Bombyx mori）茧质性状的QTLs定位构建了一张较高密度的AFLP家蚕分子连锁图谱。692个有效位点中的550个构成了a和b亚群，其中a亚群21个连锁群含233个标记，b亚群为28个连锁群含317个标记。a、b亚群中各连锁群上标记数目变化范围在4～43和3～35个，连锁群总长度为1868．10和2677．50cM，连锁群的长度变化在22．3～424．3和2．4～366．5cM，标记的平均图距变化在3．39～17．43和0．80～26．96cM，位点间的平均距离为8．81和9．26cM。平均图距小于10cM的连锁群有14和18个，大于10cM小于20cM的连锁群有7个。连锁群上位点平均数为11．1和11．31个，连锁群的平均长度为89．0和95．6cM。a、b亚群平均总长为2272．8cM，平均图距9．06cM。符合QTLs定位的基本要求。     

家蚕肠道产蛋白酶菌株的分离与鉴定及其发酵条件

为探明家蚕肠道中产蛋白酶细菌的种类分布及其作用效果,本研究以家蚕(Bombyx mori)4龄幼虫肠道内容物为材料,采用牛肉膏蛋白胨培养基和酪蛋白培养基分离筛选产蛋白酶细菌菌株,利用16SrDNA序列分析鉴定其种属,并研究其产酶能力和产酶活力较高菌株的最适发酵条件。结果获得3株产蛋白酶菌株皓月NA1、951NA3和951NA6,均归属于不动杆菌属(Acinetobacter),其中皓月NA1号细菌产酶能力最强,最佳产酶量为29.5U/mL。以玉米粉10000mg/L、黄豆粉10000mg/L、MgSO4400mg/L、NaC115000mg/L和K2HPO41000mg/L作为发酵培养基成分,在35℃、起始pH9.0、装液量为80mL/150mL、180r/min振荡培养48h的优化发酵条件下,皓月NA1号细菌最大产酶量可达50U/m L。研究结果对家蚕肠道微生物的分布及肠道益生菌的作用效果调控有着十分重要的意义。