Effect of phytohormones on in vitro shoot multiplication and rooting of lime Citrus aurantifolia (Christm.) Swing

Multiple shoots were produced from node explants of lime (Citrus aurantifolia (Christm.) Swing) on MS medium supplemented with 6-benzylaminopurine (BAP), 6-furfurylaminopurine (kinetin) and α-naphthaleneacetic acid (NAA). The highest number of shoots, nine shoots per node, were produced on a medium containing 2 mg l⁻¹ BAP (8.8 μM), 1 mg l⁻¹ kinetin (4.6 μM) and 1 mg l⁻¹ NAA (5.4 μM). Depending on the concentration of BAP and kinetin, NAA either inhibited, stimulated or did not affect shoot multiplication, which also depended on the cytokinin level. Maximum shoot length was obtained from treatments containing 0.5 mg l⁻¹ BAP (2.2 μM) combined with 1 mg l⁻¹ kinetin (4.6 μM) and 0.5 mg l⁻¹ NAA (2.7 μM). The largest leaves of resultant shoots were produced on a medium containing 0.5 mg l⁻¹ each of kinetin (2.3 μM) and NAA (2.7 μM). Transferring in vitro shoots to rooting media containing indole-3-butyric acid (IBA) and NAA produced complete plantlets. The highest rooting percentage was obtained on a medium containing either 1 mg l⁻¹ NAA (5.4 μM) alone or 0.5 mg l⁻¹ NAA (2.7 μM) combined with 2 mg l⁻¹ IBA (9.6 μM), whereas the highest number of roots were produced on a treatment containing both 2 mg l⁻¹ NAA (10.8 μM) and 2 mg l⁻¹ IBA (9.6 μM). Roots elongated most on treatments containing 0.5 mg l⁻¹ of either NAA (2.7 μM) or IBA (2.4 μM). Shoot growth associated with the rooting phase was the highest in response to 2 mg l⁻¹ IBA (9.6 μM) or 0.5 mg l⁻¹ NAA (2.7 μM). Plantlets that survived acclimatization, 82%, exhibited normal growth in soil under greenhouse conditions.     

溆浦甜橙高效离体再生研究

本研究以溆浦甜橙实生苗为试材,对影响其离体再生的各种因素进行了研究,建立了一个高效离体再生系统。结果表明,30d龄溆浦甜橙实生苗上胚轴水平置于MT＋3mg·L^-16-BA分化培养基中,不定芽的诱导率可高达83-3％,该不定芽在MT＋0．5mg·L^-1,6-BA＋1．5g·L^-1,麦芽提取物的增殖培养基上生长良好,增殖率可达96．7％,增殖系数为3.79。生根培养基以1／2MT＋0．5mg·L^-1IBA比较适宜。这一系统再生频率高,操作简便,适合于溆浦甜橙的遗传转化。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用三个辣椒品种的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体和激素组合等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率提高。通过比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为MB5＋6--BA5mg／L＋IAA0．5mg／L＋AgNO3 4mg／L＋蔗糖30g／L＋卡拉胶7g／L;芽伸长培养基为MB5＋6-BA3mg／L＋IAA1mg／L＋GA3 2mg／L＋蔗糖30g／L＋卡拉胶7g／L;生根培养基为1／zMS＋IAA0．2mg／L＋NAA0．1mg／L。     

满园香梨叶片不定芽的诱导

采用正交试验设计研究了不同基本培养基、TDZ、生长素种类及其浓度4个因素组合对满园香梨(Pyrusus鄄suriensisMaxim.cv.Manyuanxiang)离体叶片不定芽再生的影响。结果表明,基本培养基的种类是影响叶片不定芽再生最重要的因素,其次是生长素的种类。通过叶片不定芽再生频率和平均每叶再生不定芽数分析表明,NN69+TDZ3.0mg/L+IAA0.2mg/L为满园香梨叶片不定芽发生的最佳培养基组合,在该培养基组合上,满园香梨叶片再生率和平均再生芽数分别达到了74.8%和4.40。同一叶片的基部和顶端比中部更有利于不定芽的再生。     

外植体及培养条件对葡萄不定芽再生的影响

以优良无核葡萄品种莫利莎、皇家夏天为试材,分别从外植体类型、叶片接种部位、接种方式及培养条件等方面进行不定芽再生技术研究。结果表明,2品种葡萄试管苗离体叶片切割后接种较节间和叶柄容易诱导不定芽再生;将叶片切分为叶尖、叶中、叶基部叶块分别接种,其不定芽再生能力没有差异;取自培养30～50d继代苗上的叶片,其不定芽再生效果相同;叶块以近轴面或远轴面接触培养基的接种方式对不定芽再生影响不大,不过叶片远轴面贴近培养基接种,产生的愈伤组织状态较好;25℃左右小幅变温或恒温的条件能诱发2个葡萄品种产生较多的不定芽;葡萄不定芽再生须经黑暗培养或弱光培养,暗培养时间在2周与4周之间再生效果差异不显著。     

Evaluation of conditions for in vitro storage of commercial and minor grapevine (Vitis vinifera L.) cultivars

In vitro culture represents a tool for the ex situ conservation of a high number of sanitised plants in a reduced space. However, the culture media and/or other growing conditions need to be optimised to minimising plant growth and storage cost. Growth on MW medium was evaluated in the commercial cultivars ‘Airén’, ‘Bobal’, ‘Chardonnay’, ‘Garnacha Blanca’, ‘Moscatel de Alejandría’, ‘Moscatel de Grano Menudo’, ‘Pedro Ximénez’, ‘Pinot Blanc’, ‘Pinot Gris’, ‘Sauvignon Blanc’, and ‘Tempranillo’; the minor cultivars ‘Chelva’, ‘Valencí Negre’, ‘Valencí Blanc’, and ‘Verdil’; and the endangered cv. ‘Esclafacherre’. Different growth rates were observed among cultivars: those with faster growth need to be subcultured every 1.5–2.0 months; those with the slowest growth every 3.5–4.0 months. The effect of halving the sucrose in MW reduced the growth of the cultivars that grew faster without compromising survival. When IBA was removed from MW, growth was also reduced in some cultivars. Therefore, small modifications of the MW composition are adequate for grapevine in vitro storage under standard incubation conditions. This is an advantage with respect to the change of temperature used in other work to achieve growth reduction, and allows the use of the same chamber for different in vitro culture procedures.     

番茄叶片离体再生的影响因素及其评价

番茄高效、稳定再生体系的建立是进行番茄细胞工程和基因工程研究的基础。现对影响番茄叶片离体再生的主要因素进行分析,得出激素是影响番茄叶片再生的首要因素,多数以BA 0.5~2.0 mg/L+IAA 0.05~1.0 mg/L组合为最佳;外植体基因型及叶片成熟度、培养条件等也对再生有较大的影响,一般选择8~20 d无菌苗或18~20 d实生苗叶片,在20~28℃、14~16h/d光照条件下培养再生率较高。此外,提出了该领域研究中存在的问题及发展趋势。     

寒富苹果叶片离体再生及四倍体诱导

为建立寒富苹果高效的离体再生体系和多倍体诱导体系,以试管苗叶片为外植体,研究了培养基中激素对寒富叶片再生芽的影响及适宜的四倍体诱导方法。结果表明,当培养基中BA质量浓度为0.5mg/L时,再生频率最高达35.7%;当培养基中BA质量浓度为2.5mg/L时,再生频率超过90%,平均再生芽数在4以上。在培养基中附加1.0mg/LTDZ,再生频率达100%,平均再生芽数达19.47。以附加15、30、60、120mg/L秋水仙素的液体再生培养基处理叶片5d,各个质量浓度处理均诱导出四倍体植株,诱变率在5.3%～22.2%之间;寒富苹果叶片在附加50mg/L秋水仙素固体再生培养基上处理5d亦获得了四倍体植株。研究结果表明寒富苹果叶片具有极强的不定芽再生能力,叶片再生过程中进行秋水仙素处理是获得其四倍体的一个有效途径。     

食用百合种质资源离体保存技术研究

为建立食用百合种质资源离体保存体系,将试管苗接种到6种不同培养基中,分别在不同温度、光照下保存6个月,观察不同浓度的脱落酸和甘露醇对试管苗生长的影响。结果表明:2℃和5℃,培养基中加入甘露醇和脱落酸均可有效抑制试管苗生长,保存6个月后均正常生长;10℃和25℃不同浓度的甘露醇和脱落酸对百合试管苗存活率、株高及鳞茎形成均有影响。甘露醇浓度低对生长抑制效果差,浓度高对生长势影响严重,浓度20 g/L时保存6个月存活率仍达94.6%,且利于鳞茎形成,对百合试管苗保存效果最好;脱落酸较甘露醇更能抑制试管苗生长,但随保存时间延长存活率减低,叶尖枯死,浓度越高越严重,不利于鳞茎的形成。     

桃叶片再生不定芽的研究

以桃栽培品种曙光、金童5号和甜桃王试管苗叶片为外植体,研究了基本培养基、植物生长调节剂种类及质量浓度组合、基因型和试管苗继代次数等因素对叶片再生的影响。结果表明,适宜暗培养的培养基为LP+1.5mg·L-1TDZ+0.15mg·L-1NAA;光培养基为LP+0.5mg·L-1TDZ+0.3mg·L-1KT+0.3mg·L-1NAA和LP+0.6mg·L-1TDZ+0.3mg·L-1KT+0.4mg·L-12,4-D;金童5号和曙光具有较强的再生能力,再生率分别为21.8%和14.5%;曙光和金童5号试管苗继代第1～11次叶片的再生能力与继代前3次愈伤组织相比形成率较高;曙光再生苗在培养基1/2MS+0.5mg·L-1NAA上生根率为100%,平均生根条数为7.9。     

红叶石楠‘红罗宾’离体再生技术研究

以红叶石楠‘红罗宾’的茎段为外植体建立再生体系。结果表明:适宜的诱导培养基为MS+BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L;增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L,增殖系数可达3.0;红叶石楠瓶外生根适宜的方案为:以草炭土为基质,插条在500 mg/L的生长素中浸泡10 s,生根率可达94.2%。     

红将军苹果离体叶片高频再生体系研究

以中熟红富士品种红将军组培苗的叶片为试材,研究了离体叶片诱导再生不定芽过程中不同激素种类与组合、暗处理时间、取叶部位等因素对再生率的影响。结果表明,试管苗继代培养3～4代,当代培养25～30d,取顶部嫩叶3～4枚,剪除叶片边缘,将剪切的叶片中部以近轴面接触在最佳诱导分化培养基上:MS+TDZ1.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L,培养基pH值5.8,黑暗培养10d后,转入光照培养条件下,再生频率达100%,再生芽数平均4.6个。叶片再生不定芽分化后15～20d转接到苹果继代培养基MS+BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L上,当不定芽长度约2cm时再转接到1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+Ac0.5g/L+蔗糖2%的生根培养基上,光培养15d后,生根率可达86.0%。     

甜樱桃品种吉列玛叶片再生不定梢的研究

在基本培养基NN69或WPM上附加BA和低浓度的NAA，IAA，IBA作培养基，诱导甜樱桃品种吉列玛试管苗的叶片产生了不定梢。以WPM附加BA 3mg/L和IAA0．3mg/L的处理，不定梢再生率最高为33．3％。     

香玲核桃离体叶片再生体系的建立

为解决核桃种质资源的实验室保存及转基因研究等问题,研究了暗培养时间、叶片放置方式及不同浓度激素组合(BA、NAA、TDZ)对香玲核桃叶片再生的影响。试验结果表明,最适宜的暗培养时间为14d;近轴面放置效果最好;不同组合的激素配比对叶片再生不定芽能力不同,最适宜香玲核桃叶片再生的培养基为:MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+TDZ1.0mg·L-1+sucrose30g·L-1+agar6g·L-1,在该培养基上,离体叶片不定芽再生率达60%,每叶片平均再生不定芽数超过1.1个。筛选得到了香玲核桃离体叶片的最适分化及生根培养基,对离体再生培养条件进行优化,为香玲核桃的种质资源保存及遗传转化研究奠定了基础。     

印度彩叶榕‘红关公’离体培养体系的研究

以印度彩叶榕‘红关公’茎尖及带腋芽茎段为材料,以MS为基本培养基附加不同的激素组合,筛选最佳培养基配方,成功的建立了‘红关公’的离体快繁优化体系。结果表明:外植体初代诱导最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L,诱导率达66.7%;丛生芽增殖培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,增殖系数达2.43;最佳生根培养基为:1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L,其生根率达100%。该研究成功建立了印度彩叶榕‘红关公’的离体再生体系,为其规模化生产提供技术支撑。     

紫叶稠李叶片离体培养再生植株

以紫叶稠李为试材,采用组织培养方法,研究不同激素对其试管苗不定芽诱导、不定芽生根及成苗影响。结果表明:叶片切块可诱导产生大量的不定芽,MS附加0.5mg/L BA和0.01mg/L NAA的培养基不定芽诱导率为50.1%;利用植物激素0.5mg/L BA,0.5mg/LNAA,0.5mg/L KT和0.2mg/L IBA的组合,不定芽可多次继代培养增殖;不定芽在附加0.4mg/L IBA的MS培养基上生根,生根率为67%。该试验结果说明,紫叶稠李试管苗叶片可作为外植体离体培养获得再生植株,BA是主要的调控植物激素,IBA对生根有一定促进作用。     

铁皮石斛兰离体培养再生植株的研究

选用铁皮石斛兰组培苗为试验材料,以添加椰汁的MS培养基为基本培养基,研究在不同激素浓度配比条件下,对于铁皮石斛兰产生愈伤组织、诱导不定芽以及继代培养的影响,并优化铁皮石斛兰的再生条件,进而获得铁皮石斛兰离体茎尖高效扩繁再生体系。结果表明,以铁皮石斛兰的幼嫩茎尖作为试验材料,可达到高效繁殖的目的,诱导不定芽的最佳激素配比为2,4-D 0.5 mg/L和NAA 0.2 mg/L。     

黑莓试管苗叶片植株的再生

以黑莓带芽茎段试管苗叶片为外植体,诱导形成不定芽并进一步形成再生植株。在MS+TDZ2.0mg/L的培养基中叶片不定芽最高分化频率达93.7%(6.52不定芽/外植体),在不定芽伸长培养基BA0.5mg/L上,分化完全的不定芽能够长大伸长,当其高度达到4cm时,切下转接于IBA为0.3mg/L培养基上诱导生根,生根率100%。     

磨盘柿离体叶片愈伤组织发生及不定芽诱导

研究了培养基种类、植物生长调节剂配比、叶片不同部位及培养条件对磨盘柿离体叶片愈伤组织发生及不定芽再生的影响。适宜磨盘柿叶片再生的基本培养基为改良MS(1／2 N),生长调节剂为ZT 4.0~6.0 mg/L或TDZ 1.0mg／L与IAA 0.1 mg／L组合,不宜用BA和高浓度的NAA;ZT和TDZ促进叶片再生的方式不同,前者利于直接再生,后者需降低细胞分裂素浓度,二次诱导使芽点生长成苗;叶片接种后暗培养2~3周再生效率高;叶片不同部位中以叶基部最易再生,其次为叶中部,叶尖最差。     

辣椒离体培养研究进展

本文综述了辣椒幼苗外植体器官再生、单倍体培养、胚培养及原生质体培养等离体培养技术的研究进展,并评述了该技术的应用前景。