秋水仙素处理离体叶片获得皇家嘎拉苹果四倍体植株

采用皇家嘎拉苹果（Malus domestica Borkh.)离体新梢叶片作为外植体，研究了不同浓度的秋水仙素长时间处理（5d)诱导四倍本的效率。结果表明，以不定芽再生培养基附加25mg/L秋水仙素效果最好，最高在36．7％的叶片外植体上获得了四倍体植株。高浓度（75－200mg/L)秋水仙素处理严重抑制组织的再生。采用流式细胞技术测定出诱变植株的细胞核DNA含量比对照高出一倍，确定了植株为四倍体。四倍体植株不仅在遗传上而且在外观形态上也明显区别于二倍体。四倍体植株已移栽于大田，并进行了嫁接育苗和大树高接。     

皇家嘎拉苹果引种试验

陕西省果树研究所１９９１年从美国引进皇家嘎拉苹果品种,经高接观察和建园试验,认为该品种色泽艳丽,果面洁净,肉质细脆,酸甜适度,早果丰产,成熟期正值水果供应淡季,在市场上有较强的竞争力。１９９８年２月通过陕西省农作物品种审定委员会审定,目前正在渭北各县区推广栽培。１　试验园基本情况试验园设在渭北苹果优生基地南部的富平县梅家坪镇周家村,年均温１３．１℃,极端最高气温４０．９℃,极端最低气温－１５．７℃,≥１０℃积温４２４１℃。年降雨量５３３ｍｍ,多集中在７～９月份,伏天多干旱。年日照时数２４５１小时…     

同源四倍体皇家嘎拉苹果的生长结果特性

皇家嘎拉苹果四倍体是一个由皇家嘎拉苹果二倍体经诱变处理获得的品系。为了解皇家嘎拉苹果四倍体与二倍体对照植株在生长结果特性方面的差异,取2种果树的接穗高接到10年生大树上,在植株结果后进行了调查研究。结果表明,由皇家嘎拉苹果二倍体诱变成的同源四倍体植株在高接后第3年开始结果,其花萼、花瓣、雌蕊、雄蕊及花药比对照大;叶片变宽,叶柄和果柄变短粗;单果大,种子数少,果形指数小,果实可溶性固形物、总糖和可滴定酸含量增高;其节间长、叶长及果肉硬度与二倍体则无显著差异。     

寒富苹果叶片离体再生及四倍体诱导

为建立寒富苹果高效的离体再生体系和多倍体诱导体系,以试管苗叶片为外植体,研究了培养基中激素对寒富叶片再生芽的影响及适宜的四倍体诱导方法。结果表明,当培养基中BA质量浓度为0.5mg/L时,再生频率最高达35.7%;当培养基中BA质量浓度为2.5mg/L时,再生频率超过90%,平均再生芽数在4以上。在培养基中附加1.0mg/LTDZ,再生频率达100%,平均再生芽数达19.47。以附加15、30、60、120mg/L秋水仙素的液体再生培养基处理叶片5d,各个质量浓度处理均诱导出四倍体植株,诱变率在5.3%～22.2%之间;寒富苹果叶片在附加50mg/L秋水仙素固体再生培养基上处理5d亦获得了四倍体植株。研究结果表明寒富苹果叶片具有极强的不定芽再生能力,叶片再生过程中进行秋水仙素处理是获得其四倍体的一个有效途径。     

秋水仙素离体诱导同源四倍体青花菜

 以青花菜品种‘海兹’高频再生试管苗为外植体, 利用秋水仙素离体诱导四倍体。结果表明: 用含秋水仙素200 mg·L ^{- 1}的MS + 0.1 mg·L ^-1NAA + 6.0 mg·L ^{- 1} 6-BA液体培养基处理2 cm长的再生苗48 h, 每个外植体平均可产芽2.1个, 再生植株变异率为83.33% , 四倍体诱导率达79.17%。与二倍体相比, 四倍体植株叶片、花冠、气孔等均表现巨大性; 流式细胞仪倍性鉴定显示, 对照DNA相对含量为200, 四倍体再生植株为400。四倍体根尖染色体2n = 4x = 36。     

皇家嘎拉苹果生物学特性观察及其栽培技术要点

皇家嘎拉(Royal Gala)原产新西兰,由柯德用Kidd's Orange Red为母本,以金帅为父本杂交育成,由顿·麦肯齐博士1952年选出,1962年定名为“嘎拉”。1971年Tenhove发现了嘎拉的芽变,1974年由麦肯齐博士发表,定     

茎段外植体白化处理促进“皇家嘎拉”苹果不定芽再生

研究比较了来自正常和白化处理的皇家嘎拉（Royal Gala)苹果（Malus domestic Borkh)新梢节段外植体不定芽的离体再生，。结果表明，白化处理的新梢顶部第一节段外植体所产生的不定芽数比第二、第三、第四节段分别高2、8、73倍；白化新梢的外植体不定芽再生数目比同一部位正常新梢高7倍。培养基添加较低浓度的TDZ有利于不定芽再生，对白化外植体来说，1μmol/L比10μmol/L高2．5倍，非白化外植体则高7倍,平均每个外植体的不定芽再生数高达68．8个。白化第一节段外植体的不定芽再生能力比常用的叶片外植体高4倍，表明该类外植体可用于苹果的转基因和染色体组工程育种。     

不同纸袋对皇家嘎拉苹果品质的影响

2003年以皇家嘎拉苹果为试材，研究了不同纸袋对果实品质的影响。结果表明，供试的6种纸袋均改善了果实的外观品质，内在品质无明显差异.其中以遮光性较强的双层袋或单层袋较好，双层袋内袋为红色或蓝色，外袋内层涂黑，单层袋以内层涂黑的复合纸袋为最好.     

苹果离体叶片植株再生研究进展

对影响苹果离体叶片植株再生的主要因子,包括基因型、叶片来源和接种方式、培养基及其添加物、黑暗培养等研究进展进行了综述,并提出了存在问题及今后发展方向。     

皇家嘎拉苹果早期丰产栽培技术

我区于2000年通过市农委园艺站引进新西兰早熟苹果皇家嘎拉,在嵩沟乡高滩村中日友好苹果示范园进行早期丰产栽培试验.几年的观察认为,该品种成熟早,果个大而整齐,色泽艳丽,品质优,是一个综合性状优良的早熟品种.     

抗菌肽MB39基因导入‘皇家嘎啦’苹果及其四倍体植株的培育

 采用农杆菌介导法, 将抗菌肽MB₃₉基因转入‘皇家嘎啦’苹果, 获得了7 个转基因株系。通过秋水仙素诱变染色体组工程育种技术, 由转化体叶片获得了20 个四倍体植株。经PCR 检测和Southern Blotting 杂交证明, 抗菌肽MB₃₉基因已经整合到皇家嘎啦苹果的染色体组中。转基因株系TR21、TR23 提高了对火疫病的抗性。采用流式细胞技术( Flow Cytometry) 确定植株为四倍体。     

秋水仙素处理‘罗田甜柿’获得12倍体再生植株

 以‘罗田甜柿’试管苗离体叶片为材料，研究了秋水仙素浓度及处理时间对诱导染色体倍性变异的影响。结果表明：0.3％秋水仙素处理4～6 d，可诱导染色体加倍; 与对照比较, 再生变异植株的气孔孔径增大，密度降低，根尖染色体数2n=12x=180，叶片DNA含量为对照的两倍。LI、LⅡ、LⅢ细胞层均加倍的证据表明，获得的倍性变异株为同质12倍体。     

金冠苹果成熟胚离体诱导四倍体的研究

 以自然授粉的‘金冠’苹果种子为材料，研究了秋水仙素处理成熟胚离体诱导四倍体技术和嵌合体分离方法。结果表明：将完整胚在0.5%秋水仙素+1%二甲基亚砜的混合溶液中暗处理48 h，然后接种在MS+TDZ 1.0 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂6 g·L^-1的再生培养基中，变异率高达10.6%。与二倍体相比，四倍体试管苗生长缓慢，节间变短，叶片增大，叶形指数趋小化，气孔密度降低，保卫细胞增大。经压片法鉴定茎尖染色体数和流式细胞仪分析DNA含量，表明多数变异植株为同质四倍体。利用叶片离体再生器官技术，从诱导获得的嵌合体植株中分离出同质突变体。     

树脂吸附法提高苹果浓缩清汁色值和透光率研究

采用固定床式树脂柱对苹果汁进行吸附处理，不仅可以大幅提高苹果汁的色值，而且对苹果汁的透光率也有一定程度的提高，并可有效降低苹果汁的浊度；而对苹果汁的糖度、酸度、pH值等理化指标无明显影响。在实际生产中应用此项技术，对于苹果浓缩清汁产品的理化品质特别是色值的提高具有显著的效果，并具有高效、无害、成本低廉等优点。     

苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素溶液处理苹果的栽培品种嘎拉试管苗的离体叶片,发现以０．５％的秋水仙素溶液处理４ｄ效果最佳,诱变频率达５６．１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上均发生了明显变异。与对照株比较,变异株茎矮、粗壮、节间短、叶片厚、叶色浓绿;叶背面的气孔体积增大,单位面积气孔数目减少、茸毛数量增加;染色体数目加倍,２ｎ＝４ｘ＝６８（对照２ｎ＝２ｘ＝３４）,细胞核核仁数目增加。梢端组织学切片证明,变异株中同质突变体的频率达７３％。     

初夏追肥对渭北地区嘎拉苹果树体营养生长和果实品质的影响

以氮、磷、钾含量比例为1∶1∶1的化学肥料为肥源,在初夏对嘎拉苹果施不同量(0.25、0.5、0.75、1.0 kg/株)的肥料,研究初夏追肥对渭北地区嘎拉苹果树体营养生长和果实品质的影响。结果表明:各施肥水平处理均能显著提高叶面积和叶绿素含量,促进新梢生长,处理5(N∶P∶K=1∶1∶1 kg/株)的叶面积比对照高18.95%,叶绿素含量比对照高36.08%,新梢长度和新梢基径比对照增加20%～30%;各施肥水平处理也提高了果实品质,处理5在提高单果重、硬度、可溶性固形物、可滴定酸含量方面的效果最佳。综合分析,采用处理5的追肥模式最好。     

秋水仙素离体诱导冬枣和酸枣四倍体

 以冬枣和酸枣组培苗丛芽为材料, 研究了秋水仙素诱导染色体倍性变异的最佳浓度与时间组合、多倍体的特征及其纯化技术。结果表明: 秋水仙素处理的最佳组合为50 mg·L ^{- 1}秋水仙素处理40 d,诱导酸枣和冬枣染色体加倍的频率分别达36.37%和26.67%。嵌合体经3～4次继代分离得到了纯化, 并对纯化后的变异株进行了增殖和生根。变异株根尖染色体数加倍(2n = 4x = 48) , 叶片增厚, 栅栏组织、海绵组织明显发达, 茎尖LⅠ、LⅡ和LⅢ层细胞均显著变大, 充分表明获得的变异株为同质四倍体。同质四倍体的主要特征为: 叶片增大, 叶色浓绿, 叶缘锯齿增大, 保卫细胞增大, 气孔密度降低。变异株在诱导期间表现出生长缓慢、叶片变圆、节间变短的暂时现象。     

苹果离体叶片高效再生不定芽技术研究

苹果不同品种叶片再生不定芽能力不同,嘎拉再生能力最强,其次是乔纳金,富士最难再生。用继代培养３ 年以上、当代培养３０ ～５０ ｄ 的试管苗,取顶部第２ ～４ 叶位幼嫩叶片,远轴面向下接触培养基,再生效率高。诱导叶片再生不定芽适宜培养基为ＭＳ＋ ＴＤＺ１．０ ｍｇ·ｌ－ １（ 富士、乔纳金）或ＢＡ５ ．０ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ ＮＡＡ０ ．１ ～０．２ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ 蔗糖３５ ．０ ｇ·ｌ－ １ ＋ 琼脂６ ．２ ｇ·ｌ－ １（ 嘎拉） 。     

培养条件对长富2号苹果新梢增殖和生长的影响

苹果离体新梢在继代培养过程中，以２０００一３０００ｌｘ光照１０ｈ对增殖、生长较好，而以２０００ｌｘ、１０ｈ效果更为理想；昼夜变温２８℃／２４℃与恒温（２６℃）处理增殖和生长无显著差异，但在昼夜２６℃／２２℃、２４℃／２０℃变温下降低了增殖量与有效新梢数；长富２号增殖和生长以ＭＳ＋ＢＡ１ｍｇ·ｌ￣（－１）＋ＩＢＡ０．１ｍｇ·ｌ￣（－１）＋ＣＨ２００ｍｇ·ｌ￣（－１）效果较好，但依继代次数和新梢状态可在ＢＡ０．７一１．０ｍｇ·ｌ￣（－１），ＩＢＡ（或ＩＡＡ）０．１一０．２ｍｇ·ｌ￣（－１）（Ｈ３０一２００ｍｇ·ｌ￣（－１）范围内变动。     

秋水仙素诱导樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'获得六倍体再生植株

 以三倍体樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'（Prunus ceransus × P. canescens）的离体叶片为外植体,采用秋水仙素诱导处理再生出六倍体植株。将外植体首先在加有秋水仙素（50 mg. L-1）、生长素（IBA 0.5 mg. L-1）和细胞分裂素（BA 5.0 mg. L-1）的改良WPM液体培养基中培养5 d,再转移到不含秋水仙素（其它成分相同）的固体培养基上继续培养56 d,再生出形态变异明显的新梢。采用流式细胞仪鉴定染色体倍性,确定其为六倍体新梢。六倍体植株与三倍体的'吉塞拉6号'植株形态学上有明显差异。六倍体的试管苗已在大田移栽成活,并已成功高接在甜樱桃大树上。