鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

PCR检测鸭瘟病毒的研究

根据鸭瘟病毒DNA聚合酶基因序列，设计、合成了1对引物，以1株鸭瘟病毒疫苗株DNA为模板，进行：PCR扩增，扩增出预期563bp的目的DNA片段。将扩增出的DNA片段克隆到pMDl8—T载体，经Amp／IPTG／X-gal平板筛选，HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定，获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定，与参考序列比较，二者同源性为99．3％。小鹩瘟病毒、鸭肝炎病毒、鹅副黏病毒：PCR扩增均为阴性。用此方法检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织(脑、肝、脾)，均能检测到鸭瘟病毒DNA。PCR检测鸭瘟病毒具有高度的特异性、敏感性，能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断。     

鸭瘟病毒实验室检测方法研究进展

鸭瘟是危害养鸭业的一种重要传染病。本文概述了鸭瘟病毒(DPV)实验室检测方法的研究进展。在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、ELISA法、血清中和试验等病毒特异性抗原及其抗体的检测等。在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的PCR技术、实时荧光定量RT-PCR技术、LAMP技术和核酸杂交技术等。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。     

鸭瘟病毒DNA的快速诊断研究

根据文献报道的鸭瘟病毒基因序列，设计合成了一对引物，其扩增跨幅为498bp。用这对引物，以采用纯水直接研磨临床病料组织再按常规酚一氟仿抽提DNA的方法制备模板，对2株鸭瘟病毒进行扩增，均获得了与设计大小相符的明亮条带，为阳性；而对其他7株非鸭瘟病毒病料的基因扩增不出任何条带，为阴性；以该PCR方法检测14份DPV临床病料，均为阳性，与病毒分离和血清中和试验的结果一致。敏感性试验表明可检测到10fg的鸭瘟病毒DNA模板。研究建立的直接从临床样品微量检测DPV的PCR方法，能达到鸭瘟病毒基因的快速诊断要求。     

Dot—ELISA检测鸭瘟病毒的研究

用斑点酶联免疫吸附试验检测15头份鸭中毒人工发病毒雏鸭的粪便，检出率达87％，三次重复检测，符合率达100％，该法简便、快速、准确、经济、易于在基层推广应用。     

鸭瘟病毒的分离和鉴定

1999年 8月广西玉林的养鸭大户送来一批一周龄左右的死亡雏鸭 ,称其养的 2 0 0 0多只雏鸭死亡过半 ,药物治疗不能控制病情。经临床剖检病变很象小鸭肝炎 ,我们采集了几份死鸭肝病料进行分离鉴定 ,现将结果报告如下。1　试验材料和方法1 .1　材料鸭瘟病毒阳性血清、Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清由中国农业大学苏敬良博士惠赠。鸭胚与2日龄雏鸭购自本市健康鸭场孵化场。1 .2　病料处理对病鸭的肝脏先进行细菌分离 ,镜检。然后按常规方法作成 1 :5乳剂 ,离心取上清液 ,检验无菌后 ,-2 0℃保存备用。1 .3　病毒分离将处理好的病料经尿囊腔接种 1 1日…     

鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒在同一鸭体的免疫反应

鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒在同一鸭体的免疫反应张大丙，郭玉璞，高福，苏敬良（北京农业大学动物医学院１０００９４）鸭肝炎病毒（ＤｕｃｋＨｅｐａｔｉｔｉｓＶｉｒｔｉｓ－ＤＨＶ）￣［１、２］属小ＲＮＡ病毒科，主要引起５周龄以下的雏鸭发生鸭病毒性肝炎（ＤｕｃｋＶｉ...     

鸭瘟的综合防治

鸭瘟是由鸭瘟病毒引起的鸭的一种急性、热性、败血性传染病。临床特征为高热,两腿发软无力,下痢,口渴,流泪和部分病鸭头颈部肿大,俗称大头瘟。本病传播迅速,发病率和死亡率都高。本文就鸭瘟病毒的研究历史、病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断、治疗预防等研究进行了一次综合整理,希望为鸭瘟的研究提供一些理论上的帮助。     

鸭瘟病毒的PCR鉴定及相关序列分析

设计、合成了2对鸭瘟病毒引物，对云南省发现的1例鸭瘟可疑病例(YN-DPV01)进行PCR鉴定，并对其扩增产物进行测序。结果显示，引物对被检测病料的扩增正确；所扩增的片段经序列测定与参考毒株p481的同源性为99．5％。     

鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立

The study was conducted to establish the duplex Real-time PCR assay for detecting both duck tembusu virus (DTMUV) and duck plague virus (DPV). According to the sequences of DTMUV E gene and DPV UL6 gene in GenBank, two sets of specific oligonucleotide primers for DTMUV and DPV along with two TaqMan probes were designed. The duplex Real-time PCR assay was developed through optimization of reaction conditions and validation of specificity, sensitivity and repetitiveness of the method. The sensitivity of the assay were both 100 template copies for DTMUV and DPV. There was no specific bands of the same sizes were amplified from other duck pathogens, such as duck Newcastle disease virus, duck hepatitis virus, muscovy duck parvovirus, duck circovirus, H9 subtype avian influenza virus, egg drop syndrome virus. This duplex Real-time RT-PCR assay is a sensitive, quick, specific and quantitative test for detection of DTMUV and DPV, and will be useful for the control of these viruses in ducks.     

四川省鸭瘟病原的分离鉴定

用9～10日龄鸭胚和血清交叉中和试验从四川省七个疑似鸭瘟发病片区分离鉴定了七株鸭瘟病毒。经测定,这七个毒株与鸭瘟标准强毒AV1221F16代的血清型、抗原性一致,没有血凝特性,对氯仿敏感,属于DNA病毒;鸭胚半数致死量DELD50为10^-4.59～10^-5.92/0.2mL;本动物回归使四川麻鸭在3～7天死亡;电镜下观察成熟病毒粒子呈球形成近似球形,带有囊膜,直径150～160nm,具有疱疹病毒的典型形态结构。     

新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测方法的建立及初步应用

根据基因库中新城疫病毒(Newcastle diseases virus,NDV)和鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)的基因序列,分别设计了2对针对NDV和DPV保守基因序列的引物。用这2对引物对同一样品中的NDV和DPV模板进行二重PCR扩增,结果同时得到了2条特异性的、大小与试验设计相符的419(NDV)和602 bp(DPV)的扩增条带,而对其他禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出0.4 pg的NDV模板和126 pg的DPV模板。     

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21日。感染后14日采血测定红细胞压积,21日统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14日,均能引起红细胞压积显著下降;21日时,胸腺病毒载量最高,可达106.7copies/mg 。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量（100000EID50）出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。     

外源病毒检验用抗鸭瘟病毒特异性阳性血清的制备与检定

为制备鸭瘟种毒和鸭瘟活疫苗检验用抗鸭瘟病毒特异性阳性血清,对6个月龄左右的山羊进行五次免疫。最后一次免疫后2周采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行了无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定、均匀性检验。结果表明,本研究制备的抗鸭瘟病毒阳性血清特异性良好,无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合《中华人民共和国兽药典》(2010年版三部)规定;血清中和效价大于1∶100,均匀性良好,可满足兽药典标准中鸭瘟种毒和鸭瘟活疫苗的鉴别检验和外源病毒检验。     

4株鸡IBD活疫苗对鸡ND免疫抗体的影响

４株不同毒力鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）活疫苗,分别接种３０ｄＳＰＦ公维,４ｄ后再接种鸡新城（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ系活疫苗,同时每组捕杀５只,观察法氏囊损伤情况,另４组用同１天的ＳＰＦ公无接种ＮＤ－Ｌａｓｏｔｑ系疫苗４天后再接种不同毒力的ＩＢＤ疫苗。试验结果表明,４株ＩＢＤ活疫苗对雏鸡法氏囊不同程度损伤,并且对ＮＤ免疫抗体产生有明显抑制作用。     

采用Real-time PCR技术评价三种药物体外抗鸭瘟病毒效果

本研究采用real-time PCR技术,对阿昔洛韦、利巴韦林及禽重组干扰素等三种药物体外抗鸭瘟病毒的作用进行了评价。结果显示,该方法具有客观、快速、敏感、高通量等特点;阿昔洛韦能有效抑制鸭瘟病毒在鸭胚成纤维细胞中的增殖。研究结果为抗鸭瘟病毒药物筛选提供了一种有效的技术平台,同时说明阿昔洛韦制剂有可能作为一种有效的抗鸭瘟病毒药物用于其感染的防治。     

野生水禽鸭瘟病毒的分离与鉴定

取急性死亡的某动物园野生水禽进行病毒分离,通过鸡(鸭)胚接种、动物回归试验、病毒主要理化特性测定、免疫预防试验等证实分离株为鸭瘟病毒,揭示野生水禽完全有自然感染鸭瘟的可能性,家鸭与野生水禽在相互间传播鸭瘟病毒上具有双向性.     

病毒类疫苗中外源病毒污染、检测方法与控制措施

就疫苗中污染外源病毒的 情况、外源病毒传统检测技术及新型分子检测技术等进行了综述,并提出通过严格按照GMP规范组织生产,加强对菌(种)毒和细胞库的质量控制,严格控制生产检验原材料质量,进一步完善标准方法、提高检验水平,开展外源因子风险评估研究等措施以降低污染风险。     

一种新型鸭瘟病原的分离鉴定及其特性

从2000年起．山东省的潍坊、临朐、昌乐、昌邑、沂源等饲养肉鸭集中的地区发生一种同鸭瘟症状、剖检变化相似的疾病．但该病主要侵害1月龄以下的雏鸭．成年鸭发病率较低。从自然感染该病典型病死鸭脏器中获得1株病毒，病毒粒子直径80～200nm，呈圆形．有囊膜。进一步试验鉴定，该病毒核酸类型为DNA,ELD50为10^-3.46／0．2mL，对樱桃谷鸭胚、番鸭胚、麻鸭胚及SPF鸡胚的致死率分别为100％、90％、20%和0％。该病毒对氯仿、乙醚、酸碱处理敏感，56℃ 30min能使病毒灭活，该病毒无血凝活性．不能凝集“O”型人、鸡、鸭、鹅、猪、小鼠、豚鼠、绵羊等的红细胞。血清学试验表明，该病毒与鸭肝炎病毒阳性血清、雏番鸭细小病毒阳性血清、小鹅瘟阳性血清之间无中和作用，而能部分中和鸭瘟病毒阳性血清，表明该分离株与传统鸭瘟病毒呈部分相关性。初步确定该病毒为疱疹病毒属疱疹病毒科成员。鉴于该病用传统的鸭瘟疫苗不能预防．故现暂定名为“新型鸭瘟”。