复合抑制剂对核桃青皮多酚氧化酶活性的影响

为给核桃采摘、生产及加工中褐变现象的抑制提供理论参考依据,从核桃青皮中提取多酚氧化酶(PPO),采用光谱法研究了不同抑制剂及其复合物对其PPO活性的影响情况。单因素试验结果显示:不同抑制剂对核桃青皮PPO酶活性的影响差异明显,亚硫酸钠(Na_2SO_3)、氯化钠(Na Cl)、L-半胱氨酸(L-Cys)、芦丁对核桃青皮PPO活性的最适抑制浓度分别为0.3、0.6、0.3、0.3 mol/L,其中,L-Cys对其PPO活性的抑制效果最为显著。正交试验结果表明:以0.4 mol/L的Na_2SO_3、0.5 mol/L的Na Cl、0.2 mol/L的L-Cys和0.8 mol/L的芦丁配制的复合液对其PPO活性的抑制效果最好。文中综合分析认为,核桃青皮PPO是引起其酶促褐变的主要影响因素,在核桃采摘、生产及加工中可通过添加L-Cys或多种抑制剂的复合物来抑制其PPO活性。     

华盖木多酚氧化酶酶学特性研究

以华盖木嫁接苗当年生茎段为试材提取PPO酶液,研究温度、pH值、底物邻苯二酚浓度及抑制物对PPO活性的影响。结果表明:华盖木多酚氧化酶的最适温度为35℃,最适pH值为7.0,温度和pH值过高或过低都会降低酶活性;邻苯二酚浓度为0.14 mo.lL-1时,PPO活性最大,低于0.14 mo.lL-1时,随底物浓度的增加,酶活性增加,超过0.14 mol.L-1时,加大底物浓度酶活性降低;Na2SO4、柠檬酸、抗坏血酸(Vc)对华盖木PPO的活性均有一定的抑制效果,其中Vc的抑制效果最显著。     

漆酶对酚类化合物生物催化氧化动力学研究——以儿茶酚和表儿茶素为模式底物

以白腐菌漆酶为试材,儿茶酚和表儿茶素为模式底物进行了酶促氧化反应动力学参数的测定。结果表明,以儿茶酚和表儿茶素为底物,漆酶催化氧化的产物最大吸收波长分别为388和408nm,作用最适pH值分别为5.5和5.75;最适反应温度均为55℃。漆酶对2种底物的催化氧化反应均符合米氏方程规律。在25℃反应条件下测得儿茶酚和表儿茶素2种底物的Km值分别为0.279和0.145mol/L;Vmax分别为0.114和1.139A/(U.min)。漆酶对表儿茶素的催化活性大大高于对儿茶酚的,作用于其混合物时需以儿茶酚的酶用量为准,即底物浓度0.5mol/L时加酶0.04U/mL。     

山药多酚氧化酶部分特性的研究

采用分光光度法测定波长410 nm处山药多酚氧化酶(PPO)的活性,研究了pH、温度、底物浓度、vmax和Km值以及抑制剂对山药PPO活性的影响.结果表明,山药PPO的最适pH=6.0,最适温度为35℃,底物浓度低于0.06 moL·L-1时,山药PPO活性与底物浓度呈线性关系,其Km=0.078moL·L-1,Vmax=0.259(△OD·min-1),抑制剂柠檬酸、苹果酸、L-抗坏血酸对山药PPO活性均有抑制作用.     

刺嫩芽采集加工过程中多酚氧化酶活性研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对采集的刺嫩芽鲜样及加工过程中各阶段的刺嫩芽产品进行多酚氧化酶（PP0）活性进行测定,测定结果是：刺嫩芽样品在同样温度及pH值条件下不同的腌制时间对多酚氧化酶活性大小有一定的影响,刺嫩芽由鲜样（样品1）至盐溃后期样品（样品2、样品3）的多酚氧化酶活性分别是：108．142U／g·min、31．714U／g·min、15．428U／g·min。酶活力单位定义为：在一定温度、pH值条件下1mmol／L底物浓度每分钟改变0．01吸光度所需的酶量为1个酶活力单位。     

山药多酚氧化酶部分特性的研究

采用分光光度法测定波长410nm处山药多酚氧化酶（PPO）的活性,研究了pH、温度、底物浓度、vmax和Km值以及抑制剂对山药PPO活性的影响．结果表明。山药PPO的最适pH=6．0,最适温度为35℃,底物浓度低于0．06moL·L^-1时。山药PPO活性与底物浓度呈线性关系,其Km=0．078moL·L^-1,Vmax=0．259（△OD·min^-1）,抑制剂柠檬酸、苹果酸、L-抗坏血酸对山药PPO活性均有抑制作用．     

Penidiella sp. HEY-1β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

通过Penidiella sp. HEY-1发酵豆渣可制备产胞外β-葡萄糖苷酶(BGL)。粗酶液经过乙醇沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析等步骤后获得了凝胶电泳均一的BGL。通过SDS-PAGE测得其分子质量为65.5 ku。该酶反应的最适温度为60~70℃,最适pH值为3.0,在70℃以下及pH值2.0~8.0范围内均能保持稳定。Mn2+对酶有激活作用,而Na+对酶有抑制作用,其他金属离子对酶的活性影响不大。底物专一性实验表明,该酶可作用于对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p-NPGlu)、邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(o-NPG)。作用于p-NPGlu和o-NPG的米氏常数(Km)值分别为0.434和0.411 mmol/L,酶促反应的最大速度(vmax)分别为1.0×10-3和3.3×10-4mol/(L.min)。     

黑曲霉胞外耐高糖β-葡萄糖苷酶的分离纯化及部分特性研究

采用硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析等步骤,从黑曲霉的发酵液中获得了凝胶电泳均一的两种β-葡萄糖苷酶。其中一种为耐高糖的β-葡萄糖苷酶,葡萄糖抑制系数(Ki)为41.01 mmol/L,纯化倍数和得率分别为56.7倍和22.66%。耐高糖β-葡萄糖苷酶单亚基分子质量为114.6 ku,以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物时,米氏常数(Km)值和酶促反应的最大速率(vmax)分别为0.904 mmol/L和1.08μmol/min。该酶最适反应温度60℃,最适反应pH值为4.0;在60℃以下及pH值3~7范围内均能保持稳定。所测定的化学试剂中,Ag 对酶具有较强的抑制作用,其它金属离子及乙二胺四乙酸对酶的活性影响不大。甲醇、正丁醇有明显激活酶活性的作用,但乙腈、丙酮对酶的抑制作用明显。     

核桃青皮提取物对玉米蚜的毒杀活性

研究不同条件下核桃青皮提取物对玉米蚜的毒杀活性。采用单因素和正交试验的方法,计算不同浓度、温度和时间核桃青皮提取物对玉米蚜的死亡率和校正死亡率,确定不同因素对核桃青皮毒杀活性的影响。试验表明,提取物浓度为100mg/mL、温度为25℃、时间为48h时核桃青皮提取物对玉米蚜毒杀活性最高。提取物浓度对核桃青皮毒杀活性影响最大,其次为时间因素。研究可为开发以核桃青皮为原料的植物性杀虫剂,实现安全高效的防治玉米蚜提供理论依据。     

黑曲霉发酵豆渣产酸性β-葡萄糖苷酶及其水解京尼平苷的性质

利用单因素、正交试验考察了黑曲霉L菌株发酵豆渣产β-葡萄糖苷酶的条件和酶解京尼平苷的特性。结果表明:2%豆渣适宜作为实验菌株液体发酵产酶培养基,当培养基中接种孢子浓度大于每毫升2×105个时,菌株产酶受发酵温度、装液量的影响显著,而不受接种量、摇床转速的影响,培养基初始pH值1.5时,菌株仍能正常产酶;优化的产酶培养基组成为豆渣1%、米糠1%和Tween 800.1%,初始pH值5.5;菌株在发酵温度28℃、装液量50 mL(250 mL摇瓶)、摇床转速150 r/min的发酵条件下发酵120 h,发酵液酶活为(200±10)U/mL。所产β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的最适温度为55℃、最适pH值2.5、最佳水解时间15 min;在该条件下酶的表观米氏常数(Km)为1.35 g/L,最大水解速率(Vmax)为26.45 g/(L.min.mg),酶活半衰期为15 min,50℃时大于60 min;酶的水解活性受Na+、Ca2+的显著激活,受Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe2+、Hg+、Zn2+、Mn2+等离子(10 mmol/L)和葡萄糖、乙醇的抑制。     

膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶特性的初步研究

该文初步研究了荚膜黄芪苯丙氨酸解氨酶(PAL)的基本特性。结果表明:PAL的最适反应时间为30min,PAL在Tris-HCl缓冲液中适宜的pH值为8.0,最适反应温度为37℃,PAL酶浓度过高或过低不利于酶的活力,PAL最适底物浓度为2mmol/L。     

来源于解酯菌的嗜热耐碱脂肪酶的表达纯化及其酶学性质研究

脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,将来源于解酯嗜热菌(Thermosyntropha lipolytica DSM 11003)的脂肪酶基因(tll2)克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a TLL2,将pET28a TLL2转入大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行高效表达。通过热处理和镍柱亲和层析得到电泳纯的蛋白TlLip2,对其进行酶学性质表征。结果显示,TlLip2的亚基分子质量为57 ku,比酶活为31 U/mg,最适反应pH及温度分别为8.0和60℃。在60℃以下、pH 6.0~11.0范围内,TlLip2的稳定性较好,相对酶活均维持在60%以上。金属离子K+和Na+对TlLip2有较大激活作用,而Co^2+、Zn^2+、SDS和Tween 80对TlLip2酶活力抑制作用明显。TlLip2在极性小的有机溶剂中具有较好的耐受性。TlLip2对中等碳链长度的对硝基苯酯显示出更高的活性,其中以对硝基苯己酯为底物时,TlLip2的酶活最高;以对硝基苯棕榈酸酯为底物时,该酶的动力学常数Km为0.29 mmol/L,Vmax为2.28 mmol/(L·min^-1),kcat为6.19 s^-1。此外,将其应用到油酸乙酯的合成研究中,以油酸和乙醇为底物,研究TlLip2催化制备油酸乙酯的转化条件,结果表明在60℃、加酶量为100 U/g的TlLip2,催化摩尔比为1∶2的油酸和乙醇,12 h后油酸乙酯的转化率达到62.1%,表明TlLip2在催化脂肪酸酯化方面具有较大的应用潜能。     

β-葡萄糖苷酶合成龙胆二糖及产物分离

以葡萄糖为原料,通过β-葡萄糖苷酶发生转糖苷反应制备龙胆二糖,研究不同来源的酶、反应温度、pH、加酶量、底物浓度、反应时间等对龙胆二糖的影响。结果表明:南京林业大学自产酶适合于龙胆二糖的制备,用900 g/L的葡萄糖溶液,加酶量为60 U/g葡萄糖,在pH 5、温度60℃的条件下,以80 r/min振荡转化24 h后得到浓度为46.9 g/L龙胆二糖。得到产物后采用高效阴离子交换色谱进行鉴定和定量。阳离子交换树脂2次洗脱分离后,得到纯度97.0%的龙胆二糖。用制备的龙胆低聚糖增殖青春双歧杆菌,36 h代谢了含有碳元素74.9mmol/L的碳源,生成含有碳元素62.1 mmol/L的有机酸和7.1 mmol/L的菌体,菌体浓度增长了3.8倍,表明实验得到的龙胆二糖可以有效增殖对人体有益的青春双歧杆菌。     

漆树多酚的负压提取工艺及其抑制酪氨酸酶活性的研究

采用负压提取工艺从漆树中提取漆树多酚,并研究其对酪氨酸酶活性的抑制作用。通过单因素和响应曲面试验优化负压提取漆树多酚的最佳工艺条件为真空度0.082 MPa,乙醇体积分数83%,时间1.5 h,液料比20∶1(m L∶g),提取次数2次,漆树多酚得率为2.193%。通过溶剂逐级萃取漆树多酚,得到含漆树多酚53.43%的乙酸乙酯萃取物,其对酪氨酸酶具有较强作用,抑制率为63.4%,相对抑制率50%的乙酸乙酯萃取物质量浓度为308 mg/L。对酪氨酸酶单酚酶的抑制效应表现为迟滞效应,500 mg/L乙酸乙酯萃取物能将反应初速度由29μmol/(L·min)降至8μmol·(L·min)。通过Lineweaver-Burk图显示对二酚酶的抑制作用表现为混合型抑制。     

1-MCP浓度对'清香'青皮核桃冷藏期间 品质及抗氧化活性的影响

为给青皮核桃的贮藏保鲜提供参考依据和技术支持,以‘清香’核桃为试材,分别以1、3和5μL/L的1-MCP对其采后鲜果进行熏蒸处理,就不同浓度的1-MCP处理对‘清香’青皮核桃在冷藏期间的品质及抗氧化活性的影响情况进行了试验研究。结果表明:低温贮藏60 d,浓度分别为3和5μL/L的1-MCP处理对青皮核桃的保鲜效果显著优于浓度为1μL/L的1-MCP处理和未以1-MCP熏蒸的对照处理;与对照处理相比,浓度分别为3和5μL/L的1-MCP处理的果皮转色指数分别降低了55.14%与75.06%,其腐烂率分别下降了92.11%和93.83%,其核桃仁中的总酚含量分别提高了65.3%和52.8%,其总黄酮含量分别提高了31.5%和24.25%,VE含量分别提高了59.97%和79.21%。浓度分别为3和5μL/L的1-MCP处理均可有效抑制青皮核桃的腐烂,均能促使核桃仁保持较好的品质,且此2个浓度处理间的差异不显著。综合考虑成本等因素认为,生产上可采用浓度为3μL/L的1-MCP对‘清香’青皮核桃进行贮藏保鲜处理。     

峨眉拟单性木兰多酚氧化酶活性与总酚含量的初步研究

以峨眉拟单性木兰嫩枝茎段为测试材料,研究多酚氧化酶(PPO)活性和总酚含量及其季节变化规律。结果表明,测定峨眉拟单性木兰PPO活性的最适pH值为7.0,最佳底物为0.14 mol.L-1的邻苯二酚,最佳温度为25℃;峨眉拟单性木兰PPO活性在生长期明显高于休眠期;峨眉拟单性木兰总酚含量在每年的4月、5月、9月3个时段最低,为无性繁殖取材最佳时间。     

酶法糖化玉米芯发酵生产乙醇的研究

研究了玉米芯的酶法水解及酶解液的乙醇发酵。采用里氏木霉ZU-02纤维素酶水解酸预处理后的玉米芯为原料,适宜的酶用量为20 FPIU(以每克底物计,下同),48 h后酶解得率为67.5%;添加黑曲霉ZU-07所产纤维二糖酶可有效解除纤维二糖累积引起的反馈抑制作用,当纤维二糖酶用量为6.5 CB IU时,48 h后酶解得率提高到83.9%。采用分批补料酶解工艺,使底物质量浓度提高到200 g/L,酶解60 h后还原糖质量浓度达到116.3 g/L,酶解得率为80.1%。利用一株耐高温酿酒酵母HTR-11在38℃下对酶解液进行乙醇发酵,质量浓度95.3 g/L的葡萄糖在18 h内发酵生成质量浓度为45.7 g/L的乙醇,其得率达到理论值的94%。     

冬枣贮藏期间枣果褐变和发酵机理的研究

试验结果表明：1、气调贮藏可有效地延缓冬枣PPO活性高峰的到来,阻止总酚含量的下降,较好地保持了冬枣细胞膜的完整性,延迟了褐变的发生。2、枣果PPO的最适pH值为7.0。冬枣PPO作用的最适天然底物为没食子酸。3、冬枣在采后贮藏前65天内,乙醇含量逐步增多;65天后乙醇含量又略有下降,但在整个贮藏期间,CA的乙醇含量明显低于对照。气调贮藏会提高ADH的活性,尤其是在贮藏后期这种作用更加明显。     

优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究

对香菇发酵产漆酶条件进行了优化并研究了部分漆酶性质。结果发现静置培养优于振荡培养;pH值≥5.6时香菇菌体基本无法生长,香菇最适生长及产酶pH值为3.5;20℃低温有利于香菇漆酶生长,但最适产酶温度是25℃;Cu2 浓度为0.2~1.0 mmol/L时有利于香菇漆酶的合成,其中0.4 mmol/L是香菇产漆酶的最佳铜离子浓度,当铜离子终浓度超过5 mmol/L时,严重抑制香菇菌丝的生长;除了2,5-二甲基苯胺之外,阿魏酸、愈创木酚、没食子酸、黎芦醇等诱导剂促进香菇合成漆酶的作用不明显,反而会抑制菌丝生长;Tween-80的加入不利于漆酶合成。香菇漆酶在60℃条件下保温1 h后仍残余了2%的活力;以2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)为底物的最佳反应温度是65℃,最适反应pH值为2.2(柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液体系)。     

沙棘叶片过氧化物酶的研究

沙棘是一种生命力极强的灌木,一般生长在干燥、寒冷的贫瘠山区。沙棘果实和叶片中含有丰富的生物活性成分,是珍贵的药食两用植物资源。同时沙棘还对防止水土流失、改善生态环境,具有十分重要的作用。对沙棘进行高层次的综合开发利用具有重要意义。过氧化物酶（POD）作为植物细胞内保护酶系统的一种,与植物抵御极端温度、干旱、重金属胁迫、病害等各种不良环境有着密切的关系。研究了在不同pH、温度条件下,从沙棘叶片中提取的过氧化物酶的稳定性。结果表明,沙棘叶片过氧化物酶的pH值稳定性和热稳定性都比较低,其作用最适pH值为6．2,最适温度为35℃。同时,实验还检测了底物浓度对沙棘叶片过氧化物酶活性的影响,其最适底物浓度为0．06mol／L。