禽用活疫苗外源病毒污染情况的调查研究

为对禽用活疫苗污染外源病毒的情况进行彻底摸底调查,抽取了目前使用量大、覆盖面广的禽用活疫苗重点品种共8种28批,涉及18家国内生产企业、7家国外企业,疫苗生产用SPF鸡胚来自国内8家企业。按照《中国兽药典》2010年版三部鸡检查法和《欧洲药典》对抽检的禽病活疫苗进行了外源病毒污染和禽腺病毒污染检验。结果显示所抽检的禽用活疫苗均无外源病毒污染和禽腺病毒污染,表明我国禽用活疫苗的质量控制和安全性良好。     

病毒类疫苗中外源病毒污染、检测方法与控制措施

就疫苗中污染外源病毒的 情况、外源病毒传统检测技术及新型分子检测技术等进行了综述,并提出通过严格按照GMP规范组织生产,加强对菌(种)毒和细胞库的质量控制,严格控制生产检验原材料质量,进一步完善标准方法、提高检验水平,开展外源因子风险评估研究等措施以降低污染风险。     

部分禽源生物制品外源病毒的检测

进行了部分禽用生物制品外源病毒检测的鸡胚检查法、细胞检查法和鸡检查法。鸡胚检查法应用SPF鸡胚检验;细胞检查法主要通过鸡红细胞吸附试验、禽白血病病毒ELISA和禽网状内皮组织增生症病毒IFA检验疫苗是否含有外源鸡红细胞吸附因子、禽白血病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒,并提出疫苗检验的判定标准,为各兽用生物制品生产企业新城疫疫苗的外源病毒检验提供参考。     

禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病病毒nested-PCR检测方法的建立

疫苗中污染鸡传染性贫血病毒(CIAV)是造成CIAV感染的途径之一,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了更灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,根据Gen Bank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用引物,通过优化反应体系和反应条件建立了检测CIAV的nested-PCR检测方法。结果显示,所建立的检测方法灵敏度比常规PCR高100倍,该方法可以检测到1 000羽份弱毒疫苗中1 EID_(50)的低剂量CIAV污染,应用该方法从送检的50个疫苗样品中检测出4个样品为CIAV阳性。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克氏病病毒等的基因均无交叉反应,具有很好的特异性。提示所建立的nested-PCR灵敏度高、特异性强,可用于检测禽弱毒疫苗中CIAV低剂量的污染。     

牛结节性皮肤病疫苗研究进展

牛结节性皮肤病（LSD）是2019年8月传入我国的新发传染病,对养牛业产生了重大经济影响。疫苗免疫是控制LSD传播的关键措施。目前只有商品化弱毒活疫苗（LAV）用于预防LSD,包括同源弱毒活疫苗和异源羊痘弱毒活疫苗,而灭活疫苗以及多种病毒的重组亚单位疫苗正在研究中;不管是同源疫苗还是异源疫苗,大都具有良好的临床保护效果,但部分疫苗不能提供足够的免疫保护;进行良好的疫苗质量控制可有效避免疫苗生产过程中的外源病毒污染以及类疫苗重组毒株的产生。我国可进一步借鉴国际先进经验,积极开展疫苗研发,以及流行病学、监测诊断等相关防控技术研究,尽早消灭LSD。本文着重介绍了国内外常用疫苗的种类、副作用及其免疫效果和质量控制等,可为该病控制和消灭提供技术支持。     

禽呼肠孤病毒ZJS株种毒的纯净性鉴定

将禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(弱毒)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传代,对其CI、C2、C3代种毒进行了无菌和支原体污染检验,对C5、C8和C10代种毒进行了外源病毒污染检验,对C3、C8和C10代种毒还进行了特异性鉴定,以确定禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(弱毒)作为种毒的可行性.结果显示,禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(...     

鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用

为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的污染,根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针,通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的检测方法灵敏度可达10拷贝·μL~(-1),比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应,具有很好的特异性;批内重复和批间重复显示变异系数均小于2%,呈现良好的可重复性。在模拟试验中,该方法能够检测到1 000羽份弱毒疫苗中1个EID50的低剂量污染,应用该方法从送检的39种(批)商品化禽用弱毒疫苗中检测到2份为CIAV阳性。上述结果表明,本研究建立的荧光定量PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于检测疫苗中CIAV低剂量的污染。     

鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织 增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究

通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID_(50)的REV。使用该方法对国内16家企业生产的60批鸡痘病毒活疫苗进行了检验,结果显示2个企业生产的4批疫苗REV检测为阳性。随机选取5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染的检测结果的符合率为100%。     

禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸斑点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RTPCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。     

鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ法荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用

为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中可能存在的鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)污染,根据CIAV基因组保守区域VP2部分基因设计和合成了1对特异性引物,通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示,建立的检测方法灵敏度可达6.36 copies/μL,是常规PCR灵敏度的1000倍。该方法与禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)、禽白血病病毒(Avian leukemia virus,ALV)、鸡马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)等均无交叉反应,特异性良好;批内和批间重复试验显示变异系数均小于2.5%,呈现良好的可重复性。在模拟试验中,建立的SYBR Green I荧光定量PCR能够检测到1000羽份弱毒疫苗中1个EID50的低剂量污染,应用该方法从送检的14种(批)商品化禽用弱毒疫苗中检测到2份为CIAV阳性,阳性样品按照经典的SPF鸡检查法进行检测也为CIAV阳性。因此,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,适合用于疫苗中CIAV污染的检验。     

关注我国SPF鸡胚生产——SPF鸡的概念

今年1月1日起,农业部对GMP疫苗生产企业疫苗菌（毒）种制备与鉴定、活疫苗生产以及疫苗检验使用无特定病原体（SPF级）鸡、鸡胚情况进行全面监督检查。对达不到标准要求的,将根据《兽药管理条例》规定进行处理。这就意味着我国对SPF种蛋生产企业、禽用活疫苗生产企业及其使用单位强制实施SPF化管理,兽药行业监管部门将加强禽用活疫苗生产SPF化的监督工作,全力推进禽用活疫苗生产的SPF化进程。     

电镜技术检验犬四联弱毒苗种子毒及品的外源病毒

我们用电子显微镜（电镜）技术，检验犬四联弱毒疫苗种子毒及其成品疫苗中的外源毒。经对每批种子毒细胞培养物及间隔一定批次成品疫苗抽样检查，其中一批种子毒细胞培养物中发现了呼肠病毒污染，得到及时有效的处理。同时证明应用电镜技术检验外源病毒确是一种快速而有效的方法。     

鸡群禽流感和大肠杆菌病的鉴别诊断

1传播途径禽流感主要通过发病禽或携带病毒的禽类与健康禽类直接接触传播,或通过病毒污染的空气、物体间接接触传播。禽流感病毒存在于病禽和带毒禽的消化道、呼吸道和禽体脏器组织中。因此,病毒可随眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外,含有病毒的分     

禽白血病病毒的综合诊断

<正>在感染鸡的众多病毒中,某些病毒如禽白血病毒、禽网状内皮组织增生病毒、鸡传染性贫血病毒等可以通过种鸡垂直传播,其中禽白血病毒还可以引起肿瘤和免疫抑制,是近年来国内外高度关注的禽类病原。在国务院颁布的《国家中长期动物疫病防治规划(2012~2020年)》中明确提出,2020年全国所有种鸡场的禽白血病必须达到净化标准。1禽白血病毒病原学禽白血病毒(ALV)是鸡的一种反转录病毒,类似于人的人     

禽网状内皮组织增生病流行现状及防控

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。     

灭治疫苗与活毒疫苗:两者均应使用

在种鸡的免疫程序中,应该既使用活毒疫苗,也使用灭活疫苗。活毒疫苗与灭活疫苗之间的差别主要在于它们在鸡体内如何产生免疫力。当使用活毒疫苗时,疫苗病毒进入鸡体组织后,可以在那里生长繁殖,产生更多的病毒,而这些新产生的病毒又可进一步侵     

疫苗的纯净与运输对免疫效果的影响

一、疫苗的纯净程度 疫苗的纯净程度是衡量疫苗质量的重要因素之一,纯净疫苗与普通疫苗的关健区别:普通疫苗很难根除外源病毒污染,在疫苗接种后会受到外源病毒的干扰而产生部分免疫抑制,影响免疫效果;虽然接种后可能暂时见不到明显的异常症状,但对生长、发育、饲料报酬等方面造成长久影响,如果有携带外源病毒,有的可在动物中缓慢传播,一代影响一代,造成恶性循环,对疫病的预防、控制、扑灭带来严重影响和困难,使疫病复杂化,不利养殖业的健康,有序发展.     

家禽免疫失败的原因与对策

弱毒活疫苗的优缺点 (1)优点：免疫效果好，免疫力坚强，免疫期较长，对种禽接种可使雏禽获得被动免疫。(2)缺点：存在散毒和造成新疫源的问题，如NDI系苗；一般来说弱毒疫苗残留毒力较强的保护力也强，但副作用也较大。有的可引起接种家禽发生免疫抑制，对其他抗原物质的免疫应答降低，如IBD中等毒力活疫苗，常对雏鸡的法氏囊造成损伤而导致免疫抑制。外源病毒污染：若使用非SPF鸡胚，常因疫苗接种而感染其他疾病。弱毒活疫苗存在毒力返祖的潜在危险，如果研制的疫苗遗传性状不稳定，必将造成严重后果。     

鸡群免疫失败的原因及常见问题分析

１疫苗质量问题１．１疫苗的抗原量不足抗原量不足，导致免疫后抗体上升的滴度不高，维持时间不长。１．２做疫苗所用的毒（菌）株免疫原性差抗原量达到了标准而所选的疫苗株免疫原性差，疫苗同样不能很好地产生免疫抗体，或产生的抗体不能有效地对抗当地的流行株。１．３疫苗被污染疫苗在生产过程中若污染有其他病原，则会在疫苗接种的同时将新病传给鸡群，如在用普通鸡胚生产冻干疫苗时，许多疾病如禽脑脊髓炎（AE）、禽白血病（AL）、禽支原体病（MG）等容易通过鸡胚传播。因此，生产疫苗最好使用无特定病原（SPF）种蛋，实现疫苗的S…     

蛋种鸡新城疫的防控思路及建议

新城疫是危害我国养禽业最严重的疾病之一,被称为禽病“万病之源”。近年来随着弱毒疫苗和灭活疫苗的广泛应用,新城疫的暴发流行已受到极大控制,但是由于我国广大农村养鸡散户的比例很大,且饲养环境多被病毒严重污染,给新城疫的防制增加了不少困难。