间接ELISA技术检测近江牡蛎病原一类立克次体

以近江牡蛎病原一类立克次体为抗原,制备鼠抗血清,利用辣根过氧化酶标记的羊抗鼠血清（HRP-IgG）为酶标二抗。建立了检测近江牡蛎类立克次体的间接ELISA快速检测方法。结果表明,应用间接ELISA技术检测近江牡蛎类立克次体有较高的灵敏度,最低的检测量为50ng的全菌抗原蛋白量。同时交叉反应试验表明该方法具有较高的特异性。利用建立的间接ELISA技术,对50份自然患病的近江牡蛎鳃组织进行类立克次体检测,阳性率为89％。     

近江牡蛎

名称近江牡蛎(Ostrea riuularis Gould)，属软体幼物门、瓣鳃纲、异柱目、牡蛎科、牡蛎属。两广一带称蚝，福建叫做蚵、江浙一带称蛎黄，北方俗称海蛎子。是海产双壳类软体动物中经济价值较大的种类之一。     

构建近江牡蛎产业带，促进粤西广西沿海水产业发展

广西钦州市茅尾海是全国最大的近江牡蛎采苗基地，每年可生产近江牡蛎种苗1．5亿支（串），其中有部分种苗销往广东湛江、汕头、中山、台山等市及海南省进行养殖。近江牡蛎属滤食性贝类，主要滤食海水中的藻类，从理论上说，它是无公害产品。粤西与广西沿海一衣带水，气候与海洋环境十分相似，而近江牡蛎产品营养丰富，历来是消费者喜爱的食品，因此，构建粤西、广西沿海近江牡蛎产业带，将极大地促进两地渔农民的增收和水产业的发展。     

近江牡蛎Ostrea vivularis Gould深水桩式吊养技术

近江特蛎是一种浅海养殖的重要经济贝类,其味美肉细,营养丰富。近几年来广西合浦廉州镇掀起了一种牡蛎深水桩式吊养方法。本文作者将其养殖方法作扼要的介绍。     

近江牡蛎深水桩式吊养技术

近江牡蛎（广东、广西称大蚝,以下称大蚝）是一种浅海滩涂养殖的重要经济贝类。其味美肉细,营养丰富。鲜蚝汤素有海中牛奶之称,浓缩后称“蚝油”,肉可鲜食,也可制成干品或罐头。大蚝不仅广销国内市场,而且也是重要的出口水产品。大蚝的常规养殖方法主要分为滩涂插植、筏式垂下养殖、棚架式养殖等类型。而广西合浦县廉州镇近两年来兴起了一种大蚝深水桩式吊养方法,１９９９年全镇引进资金６００万元,大蚝深水桩式吊养面积６２０亩,养殖户４６户,取得了显著的经济效益。廉州镇马安村养殖户林芝坚吊养６５００支木桩,盈利１０多万元。为了适应…     

盐度骤降对近江牡蛎和长牡蛎能量收支的影响

采用实验生态学方法,研究了盐度骤降(盐度分别为10、20,自然海水为对照组)对近江牡蛎(Crassostreaariakensis)和长牡蛎(Crassastreagigas)生理代谢的影响.结果显示,盐度骤降对长牡蛎和近江牡蛎的耗氧率(OR)、排氨率(NR)、排粪率(FER)均有显著影响(P＜0.05),且2种牡蛎对...     

太平洋牡蛎与近江牡蛎的种间杂交

为了评估太平洋牡蛎与近江牡蛎能否产生远缘杂种优势,于2010年5月,以成熟的两种牡蛎亲本为材料开展了2×2远缘杂交研究,由长牡蛎自繁组GG(Crassostrea gigas♀×C.gigas♂)、近江牡蛎自繁组AA(C.ariakensis♀×C.ariakensis♂)、正交组GA(Crassostreagigas♀×C.ariakensis♂)、反交组AG(C.ariakensis♀×C.gigas♂)4个实验组组成。分析了子代早期表型性状和杂种优势,并对杂交子代进行了遗传鉴定。结果表明:GA杂交组与AG组的受精强度具有不对称性。幼虫浮游期间,表型性状的中亲杂种优势几乎为0,GA组生长与存活性状表现出积极的单亲杂种优势,而AG组则具有明显的远交衰退现象;幼虫早期表型性状受到母本效应影响,而后减弱。变态期间,GA组变态率较高,得到了大量杂交稚贝;而AG组变态率极低,仅获得了72个杂交稚贝。稚贝培育期间,稚贝表现出中亲生长劣势与存活优势;GA组具有明显的单亲生长与存活优势,而AG组则表现出生长劣势并具有一定程度的存活优势。利用复合COI及ITS2鉴定了种间杂交子结果表明:正反交组杂交子均为真正意义上的两性融合杂交子。实验获得了具有显著杂种优势的GA组杂交子,为现有牡蛎的遗传改良提供了新的方向。     

广西壮族自治区标准近江牡蛎水泥棒养殖技术规程

前言: 本规程于1989年4月17日经广西区标准计量局以DB推／45000B51001—89号文发布，实施日期从1989年5月1日起。     

防城港市近江牡蛎产业台风灾害风险防控建议

论述了台风灾害给防城港市近江牡蛎产业带来的风险,提出了养殖的防控建议。     

Cytogenetic mechanism for reversion of triploids to heteroploid mosaics in Crassostrea gigas (Thunberg) and Crassostrea ariakensis

Triploid oyster induction has been very successful. However, during field culture, a certain proportion of triploids apparently loses one set of chromosomes, ‘reverting’ to diploid–triploid mosaics. The revertants will lose their aquaculture advantages due to the recovery of reproductive ability. Mitotic chromosomes were observed in mosaics of Crassostrea gigas and Crassostrea Ariakensis to elucidate the cytogenetic mechanism of reversion. Most individuals showed a modal number of 30 in triploid cells and varying numbers of chromosomes in other cells. From all 15 mosaics of C. gigas and 16 mosaics of C. ariakensis individuals, high proportions of aneuploid cells with various numbers of chromosomes were observed. Most of the aneuploid cells were hypotriploid cells with 26–29 chromosomes. Notably, in 10 out of 15 C. gigas and 9 out of 16 C. ariakensis, some cells consisted of 20–26 well‐spread chromosomes and 3–10 chromosome ‘clumps’. Individuals with more chromosome clumps tended to have higher percentages of hypotriploid cells. The correlation between these two categories of cells was significant (P<0.05) in C. gigas and highly significant (P<0.01) in C. ariakensis. Thus, we conclude that some chromosomes are eliminated during mitotic divisions because they clump together and are thus unable to undergo normal segregation.     

湛江官渡近江牡蛎养殖水细菌群落的DGGE指纹分析

2011年3月-12月利用变性梯充凝胶电泳（denatured gradient gel elctrophoresis, DGGE）技术对湛江官渡地区近江特蛎（Crassostrea ariakensis）养殖水细菌群落花流水组成进行了监测研究。UPGAMA聚类分析显示3月-12月的样品细菌主要分属2大类群;多样性指数结果显示3月-7月细菌多样性高于8月-12月;系统发育分析显示牡蛎养殖区水体优势菌群主要由以下种群组成：未可培养的变形菌门（Proteobacteria）（α、γ、δ、ε）、未可培养的拟杆菌门（Bacterioidetes）、未可培养的疣微菌门（Verrucomicrobiae bacterium）、未可培养的放线菌门（Actinobacteria）和未可培养的蓝细菌门（Cyanobacter bacterium）。最优势菌群为α-变形菌纲和拟杆菌门的黄杆菌属（Flevobacterium）。     

豚鼠气单胞菌快速检测间接ELISA法的建立

应用从患败血症的鳗鲡中分离、纯化出的豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)菌株AB40511NA1,制备了兔抗血清,建立了快速检测豚鼠气单胞菌的间接ELISA方法.研究结果显示:AB40511NA1兔抗血清的效价为1:16000.该法对AB40511NA1最低检测量为6×104 cfu·mL-1;与水产养殖动物主要致病菌嗜水气单胞菌(A. hydrophila)、温和气单胞菌(A. sobria)、鳗弧菌(V. anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)及非O1-群霍乱弧菌(Non-O1 Vibrio cholerae)均无交叉反应,特异性强;能快速、准确、方便地检测出豚鼠气单胞菌.     

近江牡蛎冻干组织糖原含量近红外模型的建立

糖原直接影响牡蛎的风味和营养品质,常作为评价牡蛎品质质量的重要标准。近红外光谱(NIR)模型可以实现糖原含量的快速准确检测。本研究以近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)为研究对象,采用微量蒽酮法、近红外技术分别获取了外套膜、鳃、闭壳肌、肝胰腺、唇瓣、性腺等6个组织及全软体部混样共909份样品的糖原含量及光谱数据,结合最小二乘法建立了近江牡蛎6个组织及全软体部的糖原含量预测模型,并对该模型进行了外部验证和交叉验证。结果显示,所测样品光谱数据经一阶求导、乘法散射校正及平滑预处理后,建立的模型最优;所建立的7个模型的建模相关系数(RC)为0.971 6~0.996 3,其外部验证相关系数(REV)及交叉验证相关系数(RCV)分别为0.949 0~0.990 8和0.969 4~0.996 9,且模型交叉验证和外部验证的RPD值均大于2.5,表明所建立的模型能准确预测近江牡蛎相应组织样品的糖原含量。本研究建立的近江牡蛎糖原含量NIR分析模型,不仅丰富了牡蛎糖原含量检测方法的研究资料,还为实现近江牡蛎糖原成分的快速、准确测定提供了技术支撑,在近江牡蛎品质性状改良等领域具有重要的应用价值。     

酶联免疫吸附方法分析海水和贝类中的滴滴涕及代谢物

采用间接竞争酶联免疫吸附分析(Ind irect Competitive Enzym e-linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法测定海水样品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕及其主要代谢产物的含量。采用碳二亚胺法,将半抗原DDA分别与载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum album in,BSA)和卵清蛋白(Ovalbu-m in,OVA)偶联,得到包被抗原和免疫抗原。以DDA-OVA作为免疫抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,免疫数次后,测定血清中抗体效价。以DDA-BSA为包被抗原,免疫多克隆抗血清为多克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附方法分析检测海水样品和海洋贝类中的有机氯农药二氯二苯三氯乙烷(DDT)及其代谢产物2,2-双(4-氯苯基)乙酸(DDA)、2,2-双(4-氯苯基)-1,1-二氯乙烷(DDD)、2,2-双(4-氯苯基)-1,1-二氯乙烯(DDE)的方法。最低检出限分别为DDT:25 ng/m l,DDA:1.56 ng/m l,DDD:25 ng/m l,DDE:25 ng/m l。贝类样品DDA回收率为96.37%~100.88%,批内变异系数为2.28%~5.13%;贝类样品DDT回收率为93.86%~100.08%,批内变异系数为4.71%~7.68%;海水样品DDT回收率88.23%,批内变异系数6.60%。     

应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌

以感染嗜水气单胞菌的林蛙各组织脏器为抗原,以热灭活的嗜水气单胞菌为免疫原,免疫家兔制备兔抗嗜水气单胞菌血清为第一抗体,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立了间接荧光抗体试验方法.分别采用2.5%戊二醛5 min、甲醇10 min、冷丙酮1 h 3种固定方法固定抗原,然后滴加不同稀释倍数的兔抗嗜水气单胞菌血清、羊抗兔IgG-FITC,于荧光显微镜下观察.结果表明,2.5%戊二醛固定腹水5 min,兔抗血清抗体效价为 1:80,荧光二抗的最佳稀释倍数为1:4000.     

牡蛎养殖技术

太平洋牡蛎具有体型大、生长快、味美、产量高、适应性强等优点,是浅海养殖的优良品种之一。本文概述了太平洋牡蛎的人工养殖技术,同时介绍了一种牡蛎的室内控温育苗技术;旨在为牡蛎养殖单位的生产实践提供参考。     

施氏鲟病原嗜水气单胞菌ELISA快速检测方法的研究

以施氏鲟(Acipenser schrenchii)细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测施氏鲟细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌的ELISA技术。结果显示:采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107CFU/mL和1∶20000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达66.88%;交叉反应和阻断实验的结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了22份人工感染后的施氏鲟和健康施氏鲟,阳性检测率分别为90.9%和13.6%,表明该技术不仅能够检测已发病的施氏鲟,而且能够检测带菌的施氏鲟。     

太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类α-1,2-岩藻糖基转移酶的密码子优化与原核表达

牡蛎消化组织内存在的类A型血型组织抗原是其特异性富集诺如病毒的主要原因,FUT2(Fucosyltransferase 2,α-1,2-岩藻糖基转移酶)是A型血型组织抗原合成的关键酶.本研究在前期克隆了太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类FUT2基因cDNA全长的基础上,根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成了类FUT2基因,插入原核表达载体pRSET A构建pRSET-mof,将其转化大肠杆菌BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导.经SDS-PAGE分析显示,在37℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L的条件下,诱导4h后出现大小约为46 kDa的特异性目的条带.利用His亲和层析柱纯化及超滤管浓缩目的蛋白,得到单一条带,说明纯化效果良好.Western blot分析显示,目的蛋白与抗6×His标签单克隆抗体、抗人FUT2单克隆抗体均能发生特异性反应,表明优化后的太平洋牡蛎类FUT2基因在大肠杆菌系统中成功表达.本研究结果为今后研究太平洋牡蛎类FUT2基因的功能,进一步探索牡蛎特异性富集诺如病毒的分子机理奠定了基础.     

广西茅尾海的香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)在不同养殖区的性腺发育变化

为探究香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)的繁殖特性以及春季死亡原因,采用肉眼观察、活体镜检和组织切片方法研究了茅尾海沙井的香港巨牡蛎苗种吊养于大风江黄场的1龄牡蛎的性腺发育周年变化,并建立了快速判断香港巨牡蛎性腺发育程度的方法.对比分析了吊养在茅尾海沙井、大风江入海口内的黄场和入海口外的鑫丰场的2龄牡蛎性腺发育的启动和发展过程.结果显示,广西茅尾海的香港巨牡蛎每年只有1个繁殖周期,性腺发育过程可划分为未分化期(1-3月)、分化期(4月)、成熟排放期(5-10月)及休止期(11-12月)4个阶段;1龄和2龄牡蛎的性腺发育基本同步;大风江入海口外的牡蛎的性腺发育较入海口内的牡蛎提前约15d,而比茅尾海内海的牡蛎提前约30 d,入海口外的牡蛎的性腺4月即发育到成熟排放期,冬季饵料的丰富程度和温度、盐度等因素可能是造成这种差异的原因.研究还发现,高温少雨天气下,海水盐度高,抑制了牡蛎性细胞的排放,导致入海口外侧吊养牡蛎的大规模死亡,濒临死亡的牡蛎性腺处于退化和崩解状态.鉴于此,认为4月初即需密切监测吊养于入海口外的牡蛎性腺的发育状况和天气状况,及时收获性腺饱满的牡蛎,或将吊养牡蛎的蚝排放置在河流入海口内区域过冬.