鸡减蛋综合征的研究Ⅱ.鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０－１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素，凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集免红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡，成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化，产蛋率为８５～９４％，     

鸡减蛋综合症油乳剂灭活苗的试制与应用

采用鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）Ｋ－１１株细胞毒为种毒,通过鸭胚盲传５代,使其扩增,收获尿囊液作为基础种子毒。基础各 非免疫歪 增殖动态的试验表明,ＥＤＳ－７６病毒在羊水、尿囊膜（包含羊膜）、尿囊液中含量较高,增殖动态趋于一致;接种病毒后１２０ｈ为最佳收毒时间,突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法,使收 病毒材料由原来的每胚５．２ｍＬ增加到每胚４９．４ｍＬ,显著降低了研究费用和制苗成本。确定     

贵州省鸡减蛋综合征病毒分离株的生物学特性鉴定

从贵州省出现产蛋下降等症状的鸡群中分离出１株病毒，命名为ＨＳ－１。该病毒对鸭胚致死率达５５．６％－６６．７％；在尿囊液中产生高效价的红细胞凝集素，第７代鸭胚尿囊液的血凝效价达到２＾１５－１８。     

贵州省鸡产蛋下降综合征的调查

根据贵州省１９９３～１９９７年期间鸡产蛋下降综合征（ＥＤＳ）的发生情况,对其流行病学、血清学、病原学进行了广泛的调查研究。从出现产蛋下降等症状的鸡群中分离出１株病毒,命名为ＨＳ－１。该病毒能致死鸭胚,在尿囊液中产生高效价的红细胞凝集素,人工感染蛋鸡能复制出与自然病例相类似的临床症状。根据对病毒分离物血凝谱,理化特性和血清学关系的鉴定,证明贵州分离毒ＨＳ－１与国际标准毒ＡＶ－１２７属于同一血清型,是一株ＥＤＳ病毒。     

鸡减蛋综合征病毒的分离和初步鉴定

河北省秦皇岛旧１９９８年１０月至１９９９年３月间３０多个鸡场约２７万只鸡发生一起以产蛋率下降３０％以上,同时伴有软壳蛋、退色蛋的疾病,病程１．５￣２个月。采取输卵管、脾脏和肛拭粪样接种于鸭胚,分离到具有血凝性的病毒,用抗ＥＤＳ－７６Ｖ阳性血清与分离毒做ＨＩ试验,结果分离毒的血凝性可被抗ＥＤＳ－７６Ｖ的阳性血清所抑制。因此初步认为秦皇岛市也有ＥＤＳ－７６的发生。     

产蛋下降综合征病毒的分离鉴定

对我省几个暴发产蛋下降综合征的鸡群进行了流行病学调查。用９日龄的鸭胚从病鸡的输卵管和子宫内分泌到两株ＥＤＳ－７６病毒。该病毒对鸡红细胞的凝集作用可被ＥＤＳ－７６的标准阳性血清所抑制。用分离毒接种１８９日龄产蛋母鸡６只，６／６发病。接毒后５天，可从血中测出ＨＩ抗体，１５天时达最高峰，２５天后开始渐渐下降。卵黄ＨＩ抗体与血液ＨＩ抗体呈正相关，只是卵黄ＨＩ抗体价比血液的高一个滴度。接毒鸡所产的蛋，ＥＤＳ     

鸡减蛋综合征病毒GC2毒株稳定性测定

将ＥＤＳ７６ＧＣ２毒株接种于１０～１１日龄鸭胚尿囊腔内,连续传至第３０代,分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及其免疫原性。结果,该病毒不同代次胚液ＨＡ和ＥＩＤ５０分别在１∶２１５和１０５．０／０．１ｍＬ以上,免疫原性良好,对鸭胚致死性随传代次数增加而减弱,说明该病毒稳定性良好。于－２０℃和－５０℃可分别保存６和１２个月以上。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

改革鸡产蛋下降综合症灭活苗制备工艺的研究

选用鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ７６）的两个地方毒株为种毒感染９日龄的鸭胚，感染后１２０小时采取鸭胚的尿囊膜制成浸出液，经甲醛灭活后，用以１０号白油为主的油佐剂乳化制成ＥＤＳ７６灭活苗，简称改革法，下同。     

鸡新城疫,减蛋综合征,传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究…

用新城疫病毒克隆７９株，减蛋综合征病毒ＮＥ４株和传染支气管炎病毒Ｍ１株分别接种于鸡胚和鸭胚，并收取其鸡，鸭胚尿囊液毒，经甲醛灭活，按一定经例配比，以矿物油为佐剂制成三联油佐剂灭活苗。本苗接种于产蛋后备鸡，免疫后７天产生免疫应答，免疫后３０天保护率达９０％－１００％，免疫后六个月攻毒，ＮＤ和ＩＢ保护率１００％，ＥＤＳ７６为９５％。１９９２－１９９４上半年，本苗在江苏，安徽，山东等省的一些鸡场免疫十万     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

鸡减蛋综合征的人工感染试验

用鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）郑州分离株（Ｚ１６）人工感染不同日龄ＨＩ抗体阴性的褐壳蛋鸡，除１０日龄雏组外均表现良好的抗体反应。攻毒后二周，１０，４０，７０，１２０，２００，３６０日龄各组鸡的ＨＩ抗体依次为２．７、６．３、９．７、９．８、８．９、９．０（ｌｏｇ２），２００，３６０日龄组鸡感染后出现典型的ＥＤＳ－７６症状，产蛋率分别下降４５％和１５％，但３６０日龄组异常蛋数量较少，恢复也快些。１２０日龄组无明显症状，但开产期推迟，亦有软、破蛋现象、用２００日龄组（罗曼品种）感染后２０～５０天内下的蛋作喂饲试验；均可使３／４阴性鸡出现７～９（ｌｏｇ２）抗体反应。３００日龄来航鸡感染后不见产蛋下降和蛋壳异常．但可检出８（ｌｏｇ℃２）左右的阳性抗体。用其感染后５～１５天内下的蛋饲喂阴性鸡，仅能使１／４鸡出现短暂的低抗体反应，表明对ＥＤＳ－７６病毒敏感性存在着品种差异。     

鸡新城疫和减蛋综合征异源二联灭活疫苗研究

将鸭源新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ＿（１０）株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ＿２株于同一鸭胚同时增殖，用甲醛灭活后加入１０号白油制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６异源二联灭活疫苗，简化了生产工艺，降低了成本，克服了鸡胚苗潜伏带毒的危险。经２０余万只鸡试用，表明该疫苗可有效预防ＮＤ和ＤＥＳ－７６。     

鸡新城疫减蛋综合征异源二联灭活油苗的研究

鸡新城疫（ＮＤ）病毒和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒混合种接种在１２—１４日龄鹅胚上，在接种后１２０小时收获尿囊液，用０．４％甲醛溶液３７℃２４小时灭活，加入１０号白油，制成鸡新城疫减蛋综合征异源二联苗，经２０余万只鸡试用表明，该苗能有效地控制ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生     

鸡减蛋综合症病原分离鉴定

通过鸭胚传代，病毒中和试验，Ｈ１交叉试验，理化特性测定，血凝谱试验，琼脂免疫扩散试验，电镜观察证实，我们所分离的病原为减蛋综合症病毒（暂定为ＥＤＳＶ－Ｒ９３１），该病毒的鸭胚毒价为１０＾１４．４４ＥＩＤ５０／０．１ｍ１。     

鸡减蛋综合症病原分离鉴定

通过鸭胚传代、病毒中各试验、ＨＩ交叉试验、理化特性测定、血凝谱试验、琼脂免疫扩散试验、电镜观察证实．我们所分离的病原为减蛋综合症病毒（暂定为ＥＤＳＶ－Ｒ９３１），该病毒的鸭胚毒价为１０（１４．４４）ＥＩｄ（５０）／０．１ｍｌ。     

鸡减蛋综合征油乳剂灭活苗的研制

用鸡 减蛋综合征（ＥＤＳ）ＢＨ９１毒株接种鸭胚，收获鸭胚尿囊液，用一定浓度福尔马林灭活后加入吐温８０制成水相，司班８０和硬脂酸铝加入白油中制成油相，二者按一定比例乳化后制成ＥＤＳ油乳剂灭活苗，该苗接种开产前母鸡，可使接种鸡获得对ＥＤＳ强毒攻击坚强的抵抗力，该苗安全，稳定，４℃保存可达１２个月以上。     

鸡减蛋综合征的人工感染试验

用鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）郑州分离株（Ｚ１６）人工感染不同日龄ＨＩ抗体阴性的褐壳蛋鸡，除１０日龄雏组外均表现良好的抗体反应。攻毒后二周，１０，４０，７０，１２０，２００，３６０日龄各组鸡的ＨＩ抗体依次为２．７、６．３、９．７、９．８、８．９、９．０（ｌｏｇ２），２００，３６０日龄组鸡感染后出现典型的ＥＤＳ－７６症状，产蛋率分别下降４５％和１５％，但３６０日龄组异常蛋数量较少，恢复也快些。１２０     

影响产蛋下降综合征H_(91)疫苗株HA效价的因素

鸡产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）Ｈ９１－１疫苗株ＨＡ效价受接种种毒的浓度和收获时间、鸡红细胞浓度、ＨＡ反应温度、灭活用甲醛溶液浓度、灭活尿囊液存放时间等因素影响，分析了提高ＥＤＳ－７６Ｈ９１株ＨＡ效价的方法