宁夏玉米高效再生体系的建立及其影响因素

以4个宁夏玉米品种幼胚为材料,采用组织培养法,研究培养基类型、基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对玉米幼胚培养及再生的影响。结果表明,在愈伤组织诱导过程中,Ⅰ号和Ⅱ号培养基诱导率较高,宁玉12号和宁0816的胚性愈伤组织诱导率相对较高,达到85.3%和82.1%;6-BA对不同基因型愈伤组织分化率的影响不同,添加6-BA对愈伤组织的分化均有促进作用;此外,当Cef质量浓度高于500 mg/L时,愈伤组织分化明显受到抑制。最佳诱导培养基为基本元素N6+水解酪蛋白200 mg/L+脯氨酸690 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+肌醇100 mg/L+AgNO310 mg/L,最佳分化培养基为基本培养基N6+6-BA1.0 mg/L+蔗糖50 g/L。     

宁夏水稻成熟胚离体再生体系的建立

以34个宁夏粳稻品种的成熟胚为材料,N6和MS为基本培养基,研究了基因型、激素、分化,继代对宁夏粳稻成熟胚培养特性的影响.结果表明,基因型对宁夏粳稻成熟胚培养的影响较大,参试材料中优育28的培养特性最好;诱导愈伤组织中2,4-D质量浓度以2 mg/L较好;分化培养中参试品种均表现为KT 2mg/L+NAA 1 mg/L+IAA 0.5 mg/L处理的分化效果最好;成熟胚诱导的愈伤组织继代1～2次对分化没有显著的影响,继代3次以上,其分化能力明显减弱.通过本研究,初步建立了宁夏水稻成熟胚高频再生体系.     

籼稻遗传转化高频再生体系的建立

选用21个籼稻品种进行成熟胚离体培养试验,结果发现大多数品种可通过添加一定配比的外源植物激素使愈伤组织诱导率大大提高,继代培养基中添加KT NAA可明显改善愈伤组织的生长状况;连续继代可显著提高愈伤组织的再分化率;预分化培养后转入再分化培养可显著提高愈伤组织再分化率,建立了一套适于籼稻遗传转化的高频再生离体培养体系。     

玉米成熟胚高效苗再生体系的建立

本研究以6种玉米自交系的成熟胚为外植体,通过优化玉米成熟胚愈伤组织诱导、继代及分化等培养环节,建立了高效的苗再生体系。结果表明,使用切除胚芽和胚根的半胚为外植体,以MS(Murashige&Skoog)培养基作为基础培养基诱导形成的愈伤组织最好,初级愈伤组织率高达80%。在继代培养过程中添加0.5 mg/mL 2,4-D和18mg/mL Dicamba有利于提高胚性愈伤组织诱导率,将胚性愈伤组织诱导率提高到88.89%。添加20 g/L甘露醇可以将褐化率降低到19.44%。分化培养过程中加入2 mg/L Zeatin和6 mg/L TDZ可以将愈伤组织的绿苗分化率提高到48.88%。     

水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生

利用水稻成熟胚为外植体,接种在NB培养基上,分别附加不同的外源激素,以诱导愈伤组织并促其分化,最终获得水稻再生植株.结果表明:2,4-D对愈伤组织诱导起决定性作用,当它与低浓度的6-BA配比时更有利于前期愈伤组织的诱导,而高浓度的6-BA则有利于后期芽丛的分化.     

甘薯高效再生体系的建立

[目的]为甘薯品种的基因转化改良奠定基础。[方法]以郑9728-4甘薯苗的枝条为材料,探讨不同激素组合对其愈伤组织产生、分化、增殖及生根的影响。[结果]以甘薯顶芽下3～4节为外植体诱导无菌芽效果较好,外植体以0.1%的HgCl2灭菌6～7min效果较好;甘薯枝条腋芽诱导的最佳培养基为MS＋BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L;无菌芽各种外植体愈伤组织形成、分化和增殖的最佳培养基为BA1.0mg/L＋IAA0.1mg/L（成愈率为98.7%,分化率为91.2%,增殖倍数为4.5倍,且丛芽生长健壮）;再生芽生根的最佳培养基为1/2MS＋NAA1.0mg/L。[结论]建立了甘薯的高效再生体系。     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

以空间诱变水稻H4成熟胚为外植体,通过调节2,4-D浓度、激素组合和分化途径,建立适宜的再生体系.结果表明:诱导培养基以NMB为基本培养基,添加2.5 mg/L 2,4-D、1.0 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,26℃暗培养30 d,愈伤诱导率达91.63％;继代培养基中添加2 mg/L ABA,对胚性愈伤组织的形成及后续分化率有一定的促进作用;两步分化法可提高愈伤组织的分化效率,分化率达84.76％,植株再生率为77.67％.初步建立了H4成熟胚愈伤组织的再生体系,为后续的遗传转化研究奠定基础.     

花生高效离体再生体系的建立

建立了以花生胚轴为外植体,通过器官发生途径高效率诱导丛生芽发生的技术体系。该体系芽分化诱导率高达83%,外植体平均出芽数为6.8个,重复性好。同时建立了花生幼胚离体培养再生体系,通过胚状体发生途径获得理想的体胚,并再生出正常的植株。     

甜瓜叶片高效再生体系的建立

为了建立高效稳定的甜瓜植株再生体系,为甜瓜的转基因技术提供受体材料,以薄皮甜瓜品种"西甜一号"叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,研究了不同的激素组合、外植体放置方式、暗培养时间等条件对其再生的影响。结果表明,以新梢顶端展开的第2~3片叶在MS 6-BA1.0 mg/L的诱导培养基上,外植体远轴面向下接触培养基,直接转入正常光周期下培养再生频率可达100%,平均每个外植体上可诱导出11株健壮植株。在MS 6-BA 0.05 mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长。在1/2MS IAA 0.2 mg/L的生根培养基上无根苗生根,生根率可达100%。     

黄瓜子叶节再生体系优化研究

研究了TDZ和IBA浓度、苗态、外植体切割和接种方式及基因型对黄瓜子叶节再生体系建立的影响。结果表明,最佳芽诱导培养基为M S+0.005 m g/L TDZ+0.05 m g/L IBA;两片子叶脱离种壳且与下胚轴处于弯曲状态的子叶节再生频率最高;保留单片子叶、下胚轴纵切、切除此子叶的2/3且竖直插入为最佳切割和接种方式;农城3号为最佳基因型,每块外植体再生芽数可达1.89。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

Efficient regeneration system applicable to five Musa cultivars

Banana (Musa spp.) is an important staple food, economic crop, and nutritional fruit worldwide. Hybridization is seriously hampered by the long generation time, polyploidy, and sterility of most cultivars. Establishment of an efficient regeneration and transformation system for banana is critical for their genetic improvement. An efficient and reproducible transformation system for banana using direct organogenesis was developed. Media containing benzylaminopurine (BA) combined with one of four other growth regulators was evaluated for the regeneration efficiency of five Musa cultivars and the ability to induce/support development of new banana shoots. The result indicated that the greatest number of shoots per explant for all five Musa cultivars was obtained using MS medium supplemented with 8.9 mmol·L⁻¹ BA and 9.1 mmol·L⁻¹ thidiazuron (TDZ). In 240–270 d, one immature male flower could regenerate between 380 and 456, 310–372, 200–240, 130–156, and 100–130 well-developed shoots for Gongjiao, Red banana, Rose banana, Baxi, and Xinglongnaijiao, respectively. Such a system will facilitate molecular breeding and functional genomics of banana.     

加工番茄子叶和下胚轴离体植株再生的研究

以加工番茄BO 2和BO 4无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以M S为基本培养基,研究了不同浓度的ZT,6-BA与不同浓度的IAA组合对外植体芽诱导的影响。结果表明,在不同浓度的ZT和IAA组合中,对2个番茄品种的子叶和下胚轴外植体芽诱导均以M S+1.0 m g/L ZT+0.05 m g/L IAA培养基为最好,BO 2品种子叶和下胚轴的出芽率分别为32.7%和24.5%,BO 4品种的分别为37.3%和28.2%;在不同浓度的6-BA和IAA组合中,诱导BO 2外植体出芽率最高的培养基是M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率分别为27.3%和14.5%;诱导BO 4品种子叶和下胚轴出芽率最高的培养基分别为M S+1.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/LIAA和M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率均为28.2%;在M S+0.1 m g/L IAA培养基上,加工番茄BO 2再生芽1周左右就能长出根,形成完整的小植株。     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

通过室内盆栽模拟方法,研究不同基因型水稻品种(天优428、天优998)对酞酸酯胁迫的响应,为酞酸酯污染农田的水稻栽培提供依据。结果表明,酞酸酯对两种水稻生长前期的株高有增效作用,在开花期和成熟期对两个水稻品种株高的影响略有不同,天优998的株高随着PAEs浓度的增高有所增加;酞酸酯处理后水稻的分蘖数、有效穗数减少,产量显著降低。同时酞酸酯处理对水稻的光合速率、蒸腾速率、MDA含量和可溶性糖含量等有一定的影响。综合所得结果,天优998较适于在酞酸酯污染农田中种植。     

小麦成熟胚再生体系及基因枪转化的初步研究

以小麦品种晋麦2148的成熟胚为外植体,消毒后用解剖刀刨碎,接种于MS+VB5+11.2g·L-1葡萄糖+2mg·L-12,4D+8g·L-1琼脂糖的培养基中诱导愈伤组织,将诱导3周的成熟胚愈伤组织接种到胚状体成熟培养基(MS+VB5+11.2g·L-1葡萄糖+0.2mg·L-1IAA+8g·L-1琼脂糖)中培养4-8周,然后转接到再生培养基(1/2MS+VB5+30g·L-1蔗糖+8g·L-1琼脂糖)中进行再生成苗.接种1200块成熟胚,得到1123块愈伤组织,最终形成258株再生苗,再生率为21.5%.在建立了再生体系的基础上,用基因枪介导法将GUS基因导入成熟胚愈伤组织,Xgluc染色表明,GUS基因已经在小麦成熟胚愈伤组织中表达.将100块愈伤组织用Xgluc染色,29块愈伤组织出现肉眼可见的蓝色小点.     

鸡胚原壳体外培养研究

以种蛋原壳为鸡胚体外培养的孵化蛋壳,就开孔位置、开孔大小以及鸡胚胚龄对鸡胚体外培养效果的影响进行了研究。结果表明:(1)小头侧面开孔明显优于小头顶端开孔(P<0.01),小头侧面开孔的已孵化3 d鸡胚的孵化率为80.0%,而小头顶端开孔的则只有60.0%;(2)随着开孔直径的增加,鸡胚孵化率呈下降趋势,开孔直径为0.5,1.0和1.5 cm时的孵化率分别为80.0%,30.0%和16.7%;(3)在小头侧面开孔且孔直径为0.5cm时,X期鸡胚和已孵化3 d鸡胚的体外培养孵化率差异达极显著水平(P<0.01),已孵化3 d鸡胚的体外培养孵化率为80.0%,X期鸡胚的孵化率则为0。     

结球甘蓝外源基因转化再生时的激素条件研究

结球甘蓝(Brassicaoleracevar.capitataL.)转化时,子叶柄、下胚轴受农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)侵染后,芽再生的激素配比研究表明,中甘8号在激素配比为BA4.0mg·L-1+IAA(1.0～2.0)mg·L-1时,子叶柄和下胚轴芽的诱导率为100%;在BA1.0mg·L-1+ZT1.0mg·L-1+NAA(0.10～0.15)mg·L-1时,子叶柄芽的诱导率为60%左右;在BA1.0mg·L-1+ZT1.0mg·L-1+NAA(0.15～0.20)mg·L-1时,下胚轴芽的诱导率为100%。激素配比与品种间互作效应小,以因素主效应为主。与未侵染外植体芽诱导比较,认为结球甘蓝受农杆菌侵染后,离体芽诱导需要较高的生长素质量浓度。     

不同基因型对小麦成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的影响

以26种不同基因型小麦成熟胚为外植体,采用1种诱导培养基、3种分化培养基,研究了不同基因型间愈伤组织诱导及植株再生的遗传差异．结果表明,不同基因型间出愈率及植株再生率差异显著,豫麦21号在26个小麦品种中表现最佳,3种分化培养基的分化效果差异明显．