银杏内生链格孢菌GI009生物学特性研究

对银杏内生链格孢菌（Alternaria alternatavar．GI009）进行了生物学特性的研究。结果表明，温度、pH值、光照对其生长和产孢有一定的影响。链格孢菌最适宜的温度为25℃，4℃和37℃几乎不能生长。最适宜pH值为5．0-9．0。产孢量以25℃连续黑暗培养最多。10种供试碳源均能明显促进链格孢菌的生长，但对不同碳源利用上有一定差异。在10种供试氮源中，除L-谷氨酸外，9种氮源均能明显促进链格孢菌生长。硝酸钠组菌落生长直径最大，醋酸钠组菌落生长较差，对不同碳源利用有较大差异。     

小孢子链格孢的IGS-RFLP分析

用基因间隔区特异性引物对10个小孢子链格孢种和作为对照的1个大孢子链格孢种(茄链格孢)(Al-ternaria solani)进行扩增,小孢子链格孢种获得约3.0kb片段,而大孢子链格孢种获得约4.0kb片段,大孢子种和小孢子种可通过IGS扩增片段明确区分.分别用限制性核酸内切酶HaeⅢ和MspⅠ对小孢子链格孢的扩增产物进行限制性酶切,可产生不同的酶切图谱.根据酶切图谱可以把细链格孢和细极链格孢区分.IGS扩增产物表现出长度和序列结构上的多态性,是一个良好的遗传标记,对于一个种内的不同菌株具有一定鉴别意义,但是由于利用现有引物一些菌株难以扩增出PCR产物,该方法的利用受到一定限制.     

链格孢属小孢子种总DNA提取方法的比较

本研究采用液氮研磨法和石英砂研磨法对链格孢属小孢子种总DNA进行提取,并通过超微量分光光度计检测DNA的纯度和浓度及通过琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA的质量,以期筛选出适合链格孢属小孢子种总DNA提取的方法。结果表明,两种方法均可得到链格孢属小孢子种的DNA,并且两种方法提取基因组DNA的效果无明显的区别。其中,液氮研磨法需要较多的菌丝体、所需时间长、成本高、获取液氮不易,而石英砂研磨法简单快速、时间短、成本低、研磨充分,损失少、可以避免使用液氮等优点。因此,石英砂研磨法是链格孢属小孢子种用于病原种类研究所需总DNA提取的较为理想的方法。     

金银花中产绿原酸内生真菌的分离与鉴定

以不同产区金银花的不同部位为材料,采用组织块法对金银花内生真菌进行分离鉴定,并结合TLC法和HPLC法对菌株发酵液进行定性分析.结果表明,共分离得到内生真菌80株,分属于5目、5科、10属,筛选出3株产绿原酸的菌株,均属于链格孢属.金银花中存在着丰富的内生真菌,不同产区及不同部位间内生真菌的种类和数量均存在差异,河南新密产绿原酸活性菌株较多.     

银杏产黄酮内生真菌的分离与鉴定

为了保护银杏资源,寻找生产黄酮类物质的替代品,采用选择性培养基,从银杏Gingkgo biloba L.的根、茎和叶中分离7株内生真菌,经高效液相色谱分析,证实3株内生真菌可产生槲皮素和山萘素类黄酮物质,其中内生真菌Enf 7的黄酮产量最高,达到70mg·100g-1干菌丝,可作为生产银杏黄酮的候选菌株.根据真菌的孢子结构、菌丝形态、菌落生长速度等形态学特征,结合核糖体RNA基因的居间序列(internal transcribed spacer,ITS)的碱基差异,确定3株产黄酮内生真菌分别属于安培菌属的白粉菌寄生菌Anpelomyces humuli、茎点霉属的头状茎点霉Phoma glomerata和镰孢属的茄镰孢Fusarium solani.     

番红花链格孢菌的分离及其生物学特性研究

从番红花球茎中分离到一种新的内生真菌,经形态学和生长特性等研究初步鉴定其为半知菌类链格孢属链格孢Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissler.该菌能单独引起番红花球茎腐烂,与青霉菌互作时腐烂程度加重.环境和营养因子对该菌的生长繁殖影响较大:①在10～35℃时,菌丝能生长并形成孢子,最适生长繁殖温度为28℃,孢子的致死温度为65℃;②在pH为4.0～7.0时,菌丝生长、孢子形成和萌发均良好,最适pH值为6.0;③当空气相对湿度(RH)高于80%时,菌丝才能生长并形成孢子,RH高于85%,孢子才能萌发;④能直接利用葡萄糖和蔗糖,淀粉和甘油需分解后才能被良好利用;⑤氮源以有机态氮和硝态氮为佳,铵态氮对其生长繁殖有抑制作用.     

产黄酮银杏内生菌的分离与鉴定

从健康银杏植株中分离到126株内生菌,并通过HPLC-UV检测方法筛选到8株内生菌产黄酮类物质。用察氏平板培养基分离菌株,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定。初步鉴定结果分别属于匐柄霉、丛梗孢属、交链孢属、镰孢霉属、赤霉属、蜜孢霉、放线菌属和暗梗单孢霉属。     

银杏内生真菌的分离鉴定及抑菌试验

利用PDA培养基进行银杏内生真菌的分离、尖端菌丝挑取法对分离得到的内生真菌进行纯化,然后从形态学上对分离得到的内生真菌进行初步鉴定,最后采用杯碟法对所分离到的部分菌株进行抗病原性细菌试验。从银杏中分离到的内生真菌,经初步鉴定结果表明,从银杏分离得到的内生真菌属于11个属。部分内生真菌菌株对病原性细菌有不同程度的抑制作用,其中对革兰氏阳性菌,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用明显。     

小口枣黑斑病病原分离鉴定——链格孢属的初步研究

2012年从景泰县采集小口枣黑斑病病果样品,分别在PDA培养基、枣汁培养基、肉质胨培养基上对病原菌进行分离、纯化,统计和计算分离频率,观察菌落形态特征,共分离出三种菌:菌1,菌2,菌3。通过菌落形态、孢子形态的观察,鉴定出菌3为半知菌亚门链格孢属的Alternaria tenuis。进而测定菌3在PDA、肉质胨、枣汁培养基上的生长速率,以及菌3在不同培养基上的产孢量,从而得出菌3最适宜在PDA培养基上生长,同样在PDA培养基上产孢量最大。     

银杏内生真菌的分离鉴定及种群分布

采用组织分离法,从9个不同地区银杏(Ginkgo biloba L.)的根、茎、叶组织中分离内生真菌,再利用形态学特征与菌株ITS rDNA序列分析相结合的方法鉴定分离菌株。结果表明:从根、茎、叶组织中共分离出78株内生真菌,分属10个属。其中,Alternaria,Fusarium,Colletotrichum,Phomopsis为优势菌群,分别占总菌株数的24.3%、20.5%、16.7%和14.1%;优势菌群在银杏各部位均有分布,无明显的组织特异性。银杏根、茎、叶中均存在特有内生真菌种类,不同采集地银杏中内生真菌的优势菌群不同。     

银杏内生真菌T4抑菌活性及生物学特性的研究

采用组织法分别从银杏组织器官(根、茎、叶)中分离得到25株内生真菌。平板对峙试验结果表明,其中16株内生真菌对供试的6种植物病原真菌表现出明显的抑制作用,其中内生真菌T4活性尤为突出。菌丝生长速率法测定结果表明,T4菌株发酵液对番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum),苹果腐烂病菌(Cytospora mand-shurica),苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides),梨黑星病菌(Venturia pirina),小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)有较强抑制作用,特别是对苹果腐烂病菌(Cytospora mandshurica)的抑制作用达到92.31%。T4菌株生物学试验结果表明,该菌株的适宜生长温度为28~32℃,其生长最适碳源为葡萄糖和麦芽糖,最适氮源为胰蛋白胨。通过形态学观察,初步鉴定内生真菌T4属于镰孢属(Fusarium sp.)。     

银杏EST SSR引物开发

为了开发银杏SSR标记,从NCBI的dbEST数据库中共下载21 604条银杏EST序列,经过去冗余处理和SSR位点搜索,共得到2 122条EST SSR序列。比较发现,二核苷酸和三核苷酸重复基元所占比例较高。利用TRA1.5软件共成功设计1 926对引物,随机选取100对引物进行合成和筛选,共选出22对具有多态性扩增条带的引物。22对引物在50个银杏品种上共扩增出78个条带,其中多态性条带34条。     

广东地区果用银杏林的叶片营养诊断研究

【目的】对位于广东省梅州市的果用银杏基地的银杏Ginkgo biloba叶片进行营养诊断,以期为该地区果用银杏园的营养管理提供理论依据。【方法】基于挂果量对调查的9个果园进行聚类,得出高、中、低产园。采用诊断施肥综合法(DRIS指数法)求得9个果园银杏叶片N、P、K、Ca、Mg、B、Zn、Mn的需肥紧迫程度及养分不平衡指数(NII),并初步制定果用银杏营养元素DRIS指数的初级分级标准。【结果】果用银杏高产园与低产园的平均NII分别为90.92和206.08,高产园的平均需肥紧迫程度为NMnKPZnBCaMg,而低产园的平均需肥紧迫程度为MgNCaKMnPZnB。DRIS指数法初步分级结果显示,养分指数的平衡区N=-5.98±2.13、P=-0.97±4.43、 K=-1.44±2.17、 Mn=-1.70±11.82、 Zn=-0.74±17.61、 Ca=3.99±0.47、 Mg=33.12±58.39、 B=1.82±20.07。【结论】梅州市银杏果园中,银杏叶片的N、K、Ca、Mg缺乏严重,P、Mn含量偏低,而Zn、B含量过剩。通过需肥紧迫程度排序及制定的DRIS指数分级能直观地判断银杏各营养元素的平衡状况,可作为银杏平衡施肥的依据。     

绣线菊内生真菌的分离及对植物病原菌的抑制作用

采用组织分离法,以PDA培养基为分离培养基,从绣线菊的根、茎和叶中分离获得39株内生真菌。平板对峙结果表明, 21株活性菌株对6种植物病原菌（辣椒疫霉病原菌、番茄枯萎病原菌、苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、葡萄灰霉病原菌、小麦赤霉病原菌）有不同程度的抑制作用,其中菌株XXT10对苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、番茄枯萎病原菌、小麦赤霉病原菌的抑制率分别达到73.2%、72.5%、39.5%和42.7%。通过测得的ITS rDNA 序列与GenBank数据库中已知序列比对后该菌为链格孢属菌。生物学特性试验表明,该菌株在28～32℃时,选择PDA培养基,分别以乳糖和蛋白胨作为碳、氮源,酸碱度中性的条件下,菌落的生长状况最佳。     

银杏叶提取液浸泡处理对鲜切苹果的保鲜效果

以红富士苹果为试材,从颜色、硬度、可滴定酸、可溶性固形物含量、维生素C含量、质量损失率以及感官评定等方面研究不同含量的银杏叶提取液浸泡处理对鲜切红富士苹果的保鲜效果。结果表明,在4 ℃贮藏条件下,与对照（无菌蒸馏水浸泡处理）相比,银杏叶提取液处理能在一定程度上提高鲜切苹果的感官品质,抑制褐变,减少水分散失,延缓硬度下降,维持可溶性固形物、可滴定酸及维生素C等营养物质的含量,较好地保持鲜切苹果的品质,其中总黄酮含量为0.5 g/L的银杏叶提取液处理保鲜效果最佳。     

鱼腥草中产槲皮素内生真菌的分离鉴定

【目的】探索鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）中是否存在产槲皮素的内生真菌。【方法】采用组织块法对鱼腥草内生真菌进行分离培养,分离纯化后收集菌丝利用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）检测其代谢产物中的槲皮素,并分析其产量。采用形态学和内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析鉴定产槲皮素的内生真菌。【结果】从鱼腥草不同部位共分离得到9株内生真菌,其中由根中分离得到的菌株YXC-G1具有产生槲皮素的能力,为笋顶孢属（Acrostalagmus sp.）真菌,菌丝中槲皮素的含量为8.296 mg/g。【结论】从鱼腥草根部分离到1株产槲皮素的内生真菌YXC-G1,其可作为生产槲皮素的备选菌株。     

银杏叶提取物对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响

【目的】研究银杏叶提取物（EGB）对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响。【方法】将160头25日龄的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂在基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%和0.3% EGB的试验日粮。试验期为28 d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%,0.3% EGB可显著降低断奶仔猪血清甘油三酯含量（P＜0.05）,显著提高血清球蛋白含量（P＜0.05）;添加质量分数0.1%,0.2% EGB,总体上可显著提高断奶仔猪血清总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性和总抗氧化能力（P＜0.05）,显著降低血清丙二醛和一氧化氮含量（P＜0.05）。另外,与对照组相比,日粮中添加EGB使断奶仔猪血清高密度脂蛋白胆固醇和总蛋白含量呈增加趋势,血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量呈降低趋势。【结论】断奶仔猪日粮中添加质量分数0.2% EGB效果最佳,此时EGB可降低断奶仔猪血脂含量,提高血清球蛋白水平和抗氧化能力。     

银杏叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平的影响

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平的影响,为银杏叶的开发应用提供依据。【方法】将160头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪按公母各半、体质量接近的原则,随机分为4组,每组4个重复,每个重复10头,分别饲喂添加质量分数0%,0.1%,0.2%和0.3%EGB的基础日粮,试验期为28 d,测定断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平。【结果】日粮中添加质量分数0.2%和0.3%EGB可显著提高断奶仔猪平均日增质量(P<0.05),降低料质量比(P<0.05);显著降低断奶仔猪血清尿素氮和血糖浓度(P<0.05),提高血清碱性磷酸酶活性和血清生长激素、三碘甲腺原氨酸水平(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.2%和0.3%EGB,可改善断奶仔猪血清生化指标,提高生长相关激素水平,促进仔猪生长。     

苋菜AmSPL基因家族转录组鉴定及表达分析

为明确SPL(Squamosa Promoter Binding Protein Like)在苋菜中的功能,基于‘全红’苋菜转录组数据库筛选获得17个SPL家族成员,并进行生物信息学分析预测。结果表明,17 个AmSPL蛋白分别由186~777 个氨基酸组成,相对分子量从20.53~88.27 ku。构建AmSPL与拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)16个AtSPL成员系统进化树,并根据AtSPLs基因家族的分类标准将AmSPL成员分为6组。实时荧光定量PCR分析表明,在黑暗条件下,AmSPLs的表达量均高于蓝光下,推测AmSPLs的表达可能通过某种方式受到蓝光的负调控。预测分析其中的8 个AmSPL可能是miR156的靶基因。