甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律

【目的】研究甘加型藏绵羊发情周期下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)分泌的动态变化及其对藏羊生殖活动的调控.【方法】选取发情周期不同阶段的甘加型藏绵羊48只,采集藏羊发情期、发情后期、间情期、发情前期的血浆.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各个时期血浆中GnRH的含量,比较研究其动态变化规律.【结果】甘加藏绵羊发情周期不同阶段血浆中GnRH分泌呈现一定的规律:在发情期和发情后期呈脉冲式分泌,间情期和发情前期既有脉冲式又有波动式分泌.分泌特点为发情前期血浆中GnRH(57.409pg/mL)开始升高,至达到最大值(73.389pg/mL),发情后期(62.058pg/mL)和间情期(55.687pg/mL)分泌量降低,其中发情期分泌量最多,且与其他3个时期差异显著(P0.05).在整个发情周期中GnRH先后出现4个明显分泌峰,第1个峰出现在发情期4h,第2个峰出现在发情后期60h,第1个峰略高于第2个;第3个峰出现在间情期第9天早上,第4个峰出现在发情前期第14天早上,第3个峰较第4个低.【结论】了解甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律,以及GnRH在甘加型藏绵羊发情周期中的调控作用.     

甘加藏羊发情周期不同阶段血浆生殖激素分泌规律

为研究甘加藏羊发情周期血浆中生殖激素的分泌变化规律,选取24只处于发情周期内的甘加藏羊,采集甘加藏羊发情周期不同阶段的血液,采用酶联免疫分析法(ELISA)检测甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮(P)和雌激素(E)的分泌变化。结果显示,FSH含量在发情期最高,为3.406 m IU/m L,发情后期降低至2.492 m IU/m L,间情期又开始升高,至发情前期达2.727 m IU/m L,发情期含量极显著高于发情后期、间情期和发情前期;LH含量在间情期最高,为4.377 m IU/m L,发情后期显著低于间情期和发情前期;P含量在发情前期最高,为18.039 ng/m L,发情期降至16.196 ng/m L,发情后期缓慢升高,间情期达17.127 ng/m L,发情前期极显著高于发情期与发情后期;E含量在发情前期最低,为29.625 pg/m L,发情期升高(36.035 pg/m L),发情后期达到最高,为38.573 pg/m L,间情期又降低(35.531 pg/m L),发情后期极显著高于发情期、间情期以及发情前期,发情期与间情期极显著高于发情前期。     

济宁青山羊发情周期内促性腺激素和性激素分泌规律的研究

本试验对处于繁殖季节的济宁青山羊进行颈静脉采血,用放射免疫分析法测定了血浆内促性腺激素(FSH、LH)和性激素(E2、P)的含量。结果表明:整个发情周期中FSH、LH和E2均先后出现4个分泌峰,FSH的4个分泌峰分别晚于LH峰2 d出现。E2的分泌峰除第3个分泌峰出现在第10天之外,其余3个峰均与LH峰同时出现。P在发情周期的第5天开始逐渐升高,间情期(第7~17天)维持在一个较高的水平(P>0.05),发情前一天(第18天)骤然下降。在发情期和间情期,FSH和LH分泌方式均呈脉冲式,E2和P为波动式分泌。发情期FSH的脉冲频率较间情期低(P>0.05),而LH的脉冲频率则高于间情期(P>0.05)。     

新疆哈萨克绵羊在乏情期和发情期生殖激素的变化规律

旨在通过检测乏情期和发情期的发情绵羊外周血液中4种重要生殖激素孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,解析绵羊乏情期和发情期哈萨克绵羊发情时生殖激素的变化规律,以期阐明哈萨克绵羊发情时生殖激素变化规律,为调控绵羊的季节性发情提高激素方面的理论。采用ELISA方法测定4种生殖激素浓度,结果表明:哈萨克绵羊P4和E2在发情周期内呈现波动式变化,LH和FSH在发情周期内呈现脉冲式变化,且乏情期和发情期4种激素浓度变化显著(P0.05)。     

G15对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体表达的影响

【目的】研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。【方法】间情期小鼠腹腔注射GPER抑制剂G15,按注射剂量0.3,1.5和7.5nmol/只设3个注射组,另设腹腔注射等体积生理盐水的对照组;药物注射后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠的卵巢,用免疫组织化学SP法和RT-PCR法分别检测各组小鼠发情周期不同阶段卵巢EGFR及其mRNA的表达。【结果】EGFR免疫组化阳性产物主要分布于卵巢的各级卵泡中,阳性染色随卵泡发育而逐渐增强,其中颗粒细胞越靠近卵母细胞染色越强,发情周期卵巢EGFR相对表达量表现为发情期发情前期间情期发情后期。小鼠注射G15后,各情期卵巢中EGFR的表达呈G15剂量依赖性减弱,除发情后期外,均极显著下降(P0.01);1.5和7.5nmol/只G15注射组各情期EGFR的相对表达量无显著差异(P0.05),但均极显著低于0.3nmol/只G15注射组(P0.01)。EGFR mRNA的变化规律与EGFR相对表达量的变化趋势完全一致。【结论】G15可在一定程度上通过GPER下调发情周期小鼠卵巢中EGFR的表达,从而影响发情周期卵巢的功能。     

KiSS-1/GPR54系统在不同发情周期母羊下丘脑中的表达规律

【目的】研究发情周期各阶段KiSS-1/GPR54系统在母羊下丘脑中的表达规律。【方法】将12只雌性小尾寒羊随机分为4组,每组3只,分别于发情前期、发情期、发情后期和间情期,颈动脉放血致死后采集其下丘脑,采用实时荧光定量PCR技术研究母羊发情周期不同阶段下丘脑中KiSS-1和GPR54基因的表达规律。【结果】母羊发情周期各阶段下丘脑上均有KiSS-1和GPR54基因表达;发情期母羊下丘脑KiSS-1基因的表达量极显著高于发情后期、间情期和发情前期(P<0.01),而发情后期、间情期和发情前期之间差异不显著;发情周期的不同阶段,GPR54基因在母羊下丘脑中的表达量无显著差异(P>0.05)。【结论】发情期母羊下丘脑KiSS-1基因的表达量极显著高于发情周期其他阶段(P<0.01),GPR54基因在母羊发情周期各阶段的表达量无显著差异。     

雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化

 【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERα mRNA和 PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERα mRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降（P＜0.05）,发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中ERα mRNA和PR mRNA的表达在发情期较高,发情后期显著下降（P＜0.05）,间情期降到最低,发情前期显著回升（P＜0.05）,且达到最高值;ERα和PR蛋白发情期表达最强,间情期最弱,但其间无显著差异（P＞0.05）。【结论】ERα和PR在牦牛子宫内膜和肌层中随发情周期不同呈周期性变化,参与调节发情周期不同阶段牦牛子宫内膜及肌层功能的发挥。     

Nesfatin-1对初情期雌性大鼠促性腺激素及其mRNA表达的影响

为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加(P0.05),60min不产生影响(P0.05)。侧脑室注射Nesfatin-1后15和60min均能提高血清LH水平,15min时提高更明显(P0.05),但对FSH水平的影响不尽相同。在成年的雌性大鼠中,Nesfatin-1对LH和FSH的分泌不产生影响(P0.05)。Nesfatin-1可通过下丘脑诱导和增强初情期过渡阶段雌性大鼠LH和FSH的释放及LH、FSH mRNA的表达。     

热应激对雌性小鼠发情周期及生殖激素分泌的影响

全球气候变暖导致许多动物生育力下降.本研究旨在探索热应激对小鼠发情周期及各发情阶段生殖激素的影响.本研究选择48只12周龄雌性小鼠随机分为热应激组和对照组饲养7 d,阴道外观和涂片法记录小鼠发情周期,利用ELISA方法检测各发情阶段血清中FSH、LH、E_2和P_4的变化.结果显示,热应激导致小鼠发情后期和总发情周期显著延长(P0.05),发情期LH浓度和E_2浓度极显著降低(P0.01),发情后期P_4浓度显著降低(P0.05).暗示热应激可能通过抑制不同发情阶段生殖激素的水平和延长小鼠发情周期来影响小鼠的生育力.     

福清山羊和戴云山羊发情周期内生殖激素分泌规律研究

为了研究福清山羊和戴云山羊发情周期内生殖激素的分泌变化规律,采用Elisa方法检测了2个品种经产母羊整个发情周期内外周血中4种生殖激素(雌二醇、孕酮、促卵泡激素、促黄体激素)的浓度。结果表明,2个品种发情周期内血浆FSH、LH均呈现周期性波动式分泌,福清山羊在发情周期中出现了4次波峰而戴云山羊为5次。2个品种血浆E_2的分泌水平呈现明显的高、低2个分泌时期,2个分泌时期血浆E_2浓度差异达到极显著水平(P0.01),戴云山羊高分泌期的E_2浓度显著高于福清山羊(P0.05)。2个品种血浆P浓度在发情期、发情前后2~3d较低,到发情周期的第6d开始分泌量迅速增加,在发情周期第8~9d达到整个发情周期的最大峰值,极显著高于发情期血浆P浓度(P0.01),随后在较高浓度范围内呈波动分泌至发情周期第16d,之后迅速下降至发情期的低分泌水平。     

成年公兔血清FSH、LH和T水平的研究

通过外科手术连续收集活体公兔外周血样 ,用放射免疫法测定血清促卵泡素 ( FSH)、促黄体生成素 ( LH)和睾酮 ( T)水平。 5只健康成年公兔分别安置颈静脉导管 ,以 2 0 min间隔连续采样 1 0次。结果表明 ,血清 FSH、LH和 T含量分别为 ( 2 4 4.95± 4 5.4 9) IU/ L、( 443.64± 1 88.4 4) IU/ L和 ( 1 32 .4 6± 99.2 4 ) nmol/L;LH和 T均呈波动式释放 ,而 FSH的波动性不明显     

Studies of GnRH-AActive Immunization Effects on LH and FSH Secretion and Histostructure of the Ovary and Uterus in Rabbits

The objective of the study is to investigate the effects of active immunization against gonadotropin releasing hormone agonist (GnRH-A) on secretion of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) in the pituitary,and to observe the histological structures and development about ovaries and uteri in female rabbits.24 female rabbits (Oryctolagus cuniculus) were divided randomly into 4 groups (n=6),namely,experimental group Ⅰ (EG-I),experimental Ⅱ(EG- Ⅱ),experimental Ⅲ (EG-Ⅲ),and control group (CG).Rabbits were subcutaneously injected with 1.0 mL GnRH-A (alarelin)antigen respectively at concentrations of 100,100 and 50 μg mL-1 respectively,in EG-Ⅰ,EG-Ⅱ and EG-Ⅲ.Alarelin antigen was re-injected in EG-Ⅱ and EG-Ⅲ with the same dosage on 20 d.CG was a blank.The ovarian and uterine samples were collected aseptically at the end of the experiment of 70 d.The tissue slices were observed under light and electron microscopes.Serum concentrations of LH and FSH were measured with ELISA.The results showed that serum LH concentrations in EG-Ⅱ and EG-Ⅲ reached the peak levels on 50 and 40 d respectively,and LH level in EG-Ⅱ exceeded other 3 groups on 50 d (P＜0.05).FSH level in EG-Ⅱ was higher than those in EG-Ⅰ,CG (P＜0.01) and EG-Ⅲ (P＜0.05) on 40 d.GnRHA could increase the number of primary follicles,enlarge the primary follicle vertical diameter (PFV) and primary follicle transverse diameter (PFT),and promote growth and maturation of follicles.The endometrial epithelium thickness (EET) and uterine wall thickness (UWT) in three EGs were less than that in CG (P＜0.05).GnRH-A can increase the quantities of mitochondrial cristaes,cortex granules in cytoplasm,broaden and lengthen zona pellucidas and microvilli of oocytes.It also enlarged nuclei of ooxytes and mitochondria,thereby it promoted the development of oocytes.Re-injection of 100 μg alarelin antigen enhanced the secretion of LH and FSH.GnRH-A promoted the growth and maturation of ovaries and follicles,suppressed uterine development,and also influenced histostructure of ovaries and uteri in female rabbits.     

不同山羊品种促黄体素分泌状况对繁殖性能的影响

为了解促黄体素(LH)分泌状况对不同品种山羊繁殖性能的影响,选择河北中部地方山羊(冀中山羊)发情正常、健康的经产羊和青年羊为试验组,太行山羊为对照组。放射免疫法跟踪测定发情周期内血液LH含量。比较不同群体和繁殖状况山羊的LH含量的相对波动周期、振幅变化,并对LH含量变化与排卵数进行相关分析。在发情周期内,冀中山羊LH含量的波动振幅显著高于太行山羊,经产冀中山羊LH含量的相对波动周期显著长于其他群体,LH的波动频率与排卵数呈负相关。结果表明:(1)在繁殖周期内LH含量波动振幅和相对波长是影响山羊排卵数的主要因素;(2)经产冀中山羊长的LH作用时间和高的LH浓度振幅,可使优势卵泡数目增多,也保证了LH等促性腺激素启动卵泡成熟排卵的足够时间;(3)繁殖性能发育成熟过程和LH对繁殖性能的作用机制存在种群差异。     

芋芽继代培养中激素、水解乳蛋白、碳源的调节研究

在继代培养中,为提高芋组培苗的增殖效果,降低组培苗生产成本,获得健壮的芋头组培苗。实验从激素、水解乳蛋白、碳源三个方面研究了其对芋组培芽继代培养的调节作用。结果表明:BA 4.0 mg/L NAA 0.1~0.2 mg/L的激素配比有利于芋芽的增殖,但当NAA的浓度为0.1 mg/L时,可大大抑制多次继代后根的发生。不同浓度水解乳蛋白(LH)对芋芽的分化率无显著差异,但添加LH可提高芋芽的生长速度,当LH为500 mg/L时,芋苗最高。蔗糖、食用白糖、葡萄糖对芋芽的增殖和生根效果较好,麦芽糖稍差;从降低生产成本度考虑,可选用食用白糖作为芋芽继代培养的碳源。     

配种后梅花鹿血液中LH和FSH变化的研究

为了探索梅花鹿配种后的血液中LH和FSH变化规律,本试验采集了4头配种后梅花鹿的血样,采用RIA方法对血清中LH和FSH的含量进行了测定。研究结果表明:在配种后(第2d～第38d)LH含量缓慢的降低,处于较低的水平,平均为29.97±32.70 mIU/ml;FSH的含量稳步上升,平均为1.60±0.66 mIU/ml。     

FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞cyclin D1 mRNA和 cyclin E1 mRNA表达的影响

【目的】确定FSH是否能调节支持细胞cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达及可能的机制。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR 检测cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的相对表达量。【结果】不同浓度的FSH（0—100 ng•mL-1）均可促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,在FSH浓度为50 ng•mL-1时两种基因的表达量最大（P＜0.05）;FSH（50 ng•mL-1）也以时间依赖的方式促进了cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,在作用30 min时其表达量达到高峰（P＜0.05）。不同浓度的Foskolin （0—20 μmol•L-1）均可以促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,但均低于FSH单独作用时两种基因的表达量;Rp-cAMP（0—40 μmol•L-1）、H-89（0—30 μmol•L-1）和Verapamil（0—100 μg•mL-1）以剂量依赖的方式抑制了FSH诱导的cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,而且Rp-cAMP和Verapamil联合作用对FSH的抑制效果高于单独的抑制效果（P＜0.05）,但低于两者之和。此外,不同浓度的U0126（0—10 μmol•L-1）降低了FSH诱导的cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,而Rp-cAMP、H-89、Verapamil和U0126单独作用时,cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达与对照相比没有显著差异（P＞0.05）。【结论】FSH以剂量依赖和时间依赖的方式诱导了cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达;cAMP-PKA、Ca2+和ERK1/2参与了FSH对cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA表达的调节。     

绵羊LHβ基因生物信息学分析

利用生物基因组学数据库，对绵羊促黄体生成都（Luteinizinghormonebeta，￡邵）基因进行生物信息学分析。结果表明，绵羊LHβ基因含有1个426bp的开放阅读框，编码141个氨基酸；LHβ蛋白分子质量为15．2KD，理论等电点为7．47；工邵编码产物的二级结构主要以β折叠和无规则卷曲为主，主要位于细胞质中，作为一种激素参与机体的生殖调控。     

促卵泡素(FSH)对山羊卵巢卵泡群生长发育的影响

试验研究了促卵泡素对山羊卵巢卵泡群生长发育的影响。６只母羊在发情周期的１３～１６ｄ用激素处理,处理前摘取左卵巢,处理后３ｄ摘取右卵巢,组织切片,检测卵泡数。结果显示：当卵母细胞由２层卵泡细胞包围时,开始形成透明带;当达５层以上时,开始形成腔隙。超排和未超排（对照）卵巢上小卵泡数差异不显著（Ｐ＞０．０５）,分别为３７２１±１１２个和３６８５±１５６个;而带有５层以上卵泡细胞的卵泡数差异显著（Ｐ＜０．０５）,分别为１４０±２０．３个和１１０．０±９．１个;卵泡腔形成后的卵泡数差异非常显著（Ｐ＜０．０１）,分别为７５．０±２０．２个和３２．０±１０．１个。带有１～２层卵泡细胞时期的卵泡直径大约３１．６±１．７μｍ,带有３～４层卵泡细胞的卵泡直径大约为５２．３±５．０μｍ,带有５层以上卵泡细胞的卵泡直径为１５１．２±７２．１μｍ,卵泡腔形成后的卵泡直径为０．４～３ｍｍ。