拮抗细菌Bacillus subtilis A30对水稻病原菌的抑制作用

由杭州郊区水稻叶围分离得到Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ａ３０菌株，平板检测表明它对Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ和Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ等多种水稻病原真菌、病原细菌均有很好的拮抗作用。以水稻白叶枯病、水稻纹枯病为代表进行小区试验，结果表明，Ａ３０菌株的防病效果分别为５８     

内生拮抗菌Bacillus subtilis QZ-7抗茄子黄萎病研究

从开花期茄子的根内分离到对茄子黄萎病菌具有强烈抑制活性的拮抗菌株Bacillus subtilis QZ-7,其抑菌带宽达26.60mm。定殖试验表明,QZ-7菌株能有效定殖于茄子根内,并能在茄子根际存活并保持较高菌量。对茄子种子萌发和幼苗生长影响试验表明,该菌株可促进种子萌发,并具有明显促进茎伸长生长的作用。室内盆栽试验表明,单个菌株对茄子黄萎病的防效可达86%,且持效期较长。这些结果表明,QZ-7具有进一步研究开发的价值。     

Bacillus subtilis fmbR抗菌物质的分离和鉴定

 【目的】对Bacillus subtilis fmbR产生的抗菌物质进行分离和鉴定研究，以确定抗菌物质的组成和结构。【方法】采用HPLC和TLC层析对Bacillus subtilis fmbR抗菌物质进行分离纯化，通过ESI-MS和MALDI-MS分析对抗菌物质的组成和结构进行初步鉴定。【结果】HPLC层析表明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有保留时间与surfactin相似的成分。TLC层析和原位酸解证明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有闭合肽键类的物质，其中之一为相对迁移率Rf与标样surfactin相近的组分。采用ESI-MS分析检测到Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有分子量与surfactinA相同的m/z1009.1、m/z1023.2 和m/z1037.0等3种同系物；通过MALDI-MS分析获得[M+H]+为m/z 3403.95抗菌物质，该物质分子量与Bacillus subtilis 168产生的细菌素subtilosin的m/z3403.3 相同。【结论】Bacillus subtilis fmbR抗菌物质由C13～C15的3种surfactinA同系物和一种羊毛硫抗生素subtilosin组成。     

培养条件对Bacillus cereus 357生长及产生拮抗物质的影响

为了了解Bacillus cereus 357菌株生长及产生拮抗物质的影响因子,对Bacillus cereus 357菌株在KMB、PDA、LB、Davis、SMA和淡薄培养基等6种培养基上的生长及产生的拮抗物质的生物活性进行检测和比较.结果发现在这六种培养基中,KMB培养基最适合该菌株的生长,所产生的拮抗物质生物活性最大;但相同菌量相应的拮抗物质生物活性却以Davis培养基为最高;同时研究发现利用液体培养基培养与固体培养基培养对拮抗物质的产生没有影响.另外,在不同温度、不同pH值等培养条件下对B.cereus 357菌株的生长及产生的拮抗物质活性进行测定,结果表明在37℃和pH 7.5的培养条件下,该菌株产生的拮抗物质抑菌活性最大.生长曲线分析表明该菌株在对数生长终期达到最大生物活性.为今后大量制备Bacillus cereus 357产生的拮抗物质和进行生长条件的深入分析提供了实验基础.     

温室条件下拮抗细菌Bacillus subtilis B5423-R对水稻纹枯病水平扩展和垂直扩展的抑制

BacillussubtilisB5 42 3对水稻纹枯病的抑制作用主要是通过其产生的拮抗素。在温室条件下 ,于水稻分蘖盛期接种纹枯病菌Rhizoctoniasolani,并采用 2d喷 1次、不同次数对单株喷雾B5 42 3 -R(B5 42 3的标记菌株 ,是利福平抗性的突变体 )的方法进行试验 (对纹枯病水平扩展的抑制 ) ;类似地 ,采用 2d喷 1次、不同次数对小区内所有稻株喷雾B5 42 3 -R的方法进行试验 (对纹枯病垂直扩展的抑制 )。结果表明 1～ 2次喷雾未能显著地降低蚊枯病病丛率和相对病斑高度 ,而连续 3次喷雾使B5 42 3 -R在稻株的群体数量于纹枯病侵染的早期即最初的 6～ 7d内维持在 1× 1 0 6cfu/g以上 ,显著地降低了病丛率和相对病斑高度。     

拮抗细菌对6种植物病原菌的抑菌作用

分别就拮抗细菌生防菌2[短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus)]和生防菌1[枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)]对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea)、芦笋茎枯病菌（Phomopsisi asparagi)、尖镰刀菌（Fusarium oxysporum)、玉米小斑菌（Bipolaria maydis)、百合灰霉病菌（Botrytis elliptica)和青枯病菌（Ralstonia solanacearum )6种植物病原菌的抑制作用进行了测定，结果发现，生防菌2发酵液50倍稀释液对稻瘟病菌分生孢子萌发的抑制率为62.6%，100倍稀释液则为55.3%，对分生孢子附着胞形成的抑制作用不明显；将稻瘟病菌和生防菌2发酵液同时接入燕麦培养基中，生防菌2对稻瘟病菌菌落的生长有明显的抑制作用；生防菌2对芦笋茎枯病菌、尖镰刀菌、玉米小斑菌和百合灰霉病菌分生孢子萌发的抑制作用不明显；生防菌1对青枯病菌生长有明显的抑制作用，而生防菌2对青枯菌抑制作用不明显。     

几种食用菌对植物病原菌的拮抗作用初探

将食用菌长根菇 (O .radiacate)、黄背木耳 (A .fuscosucciuea)、平菇 (P .ostreatus)、黑木耳 (A .auricular)、香菇(L .edodes)、姬松茸 (A .blazei)、草菇 (V .volvacea)、蘑菇 (A .bisporus)、茯苓 (P .cocos)和赤芝 (G .lucidum )与植物病原菌玉米小斑病菌 (B .maydis)、稻瘟病菌 (P .grisea)、核盘菌 (S .sclerotiorum)、禾谷镰刀菌 (F .graminearum)、串珠镰刀菌 (F .moniliforme)和立枯丝核菌 (R .solani)之间进行拮抗培养。试验结果表明 ,长根菇、黄背木耳、平菇和黑木耳对稻瘟病菌有很强的拮抗作用 ;长根菇和黄背木耳对玉米小斑病菌也有很强的拮抗作用。在此基础上 ,通过菌丝间的相互作用、对扣试验发现对植物病原菌没有抑制作用 ;而长根菇的PDB发酵液对玉米小斑病菌菌丝生长有极显著抑制作用     

5株拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的抑制作用

从香蕉园或者其他果园的土壤中分离获得5株对香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f．sp．Cubense）具有抑制作用的拮抗菌,并对其抑菌效果和和机制进行了测定。结果表明,测试的5株拮抗菌d4、d5、d6、B3和P与香蕉枯萎病菌对峙培养5d后,在平板上产生明显的抑菌带,抑菌带宽度为16．5～20．5mm：培养10d后,仍然保持稳定的抑菌效果;5株拮抗菌发酵原液对孢子萌发具有显著的抑制作用,抑制率为90．49％～97．18％;拮抗菌对病菌的作用机制表现为对菌丝的消融、菌丝细胞的泡囊化、抑制病菌分生孢子的萌发、孢子芽管的扭曲。     

水稻纹枯病的拮抗细菌筛选

从稻田土、田水、稻株和菌核上分离的２４８９株细菌中１５６株对稻纹枯病具有拮抗性，其中９０－７３１－１、９０－９１８－１５、９０－１０３０－６、９０－１２１０－７４个菌株能较强地抑制稻纹枯病菌菌丝的生长，在ＮＡ平板上抑菌带分别为１０ｍｍ，１２ｍｍ，１１ｍｍ和１２ｍｍ，用稀释５０倍的细菌培养液喷雾已接稻纹枯菌菌块的稻苗，病斑长度分别比对照减少２８．８ｍｍ，２５．４ｍｍ，２５．２ｍｍ，２５．６ｍｍ。     

杜仲内生细菌对植物病原菌的拮抗作用

为进一步丰富玉米病害的生防资源,通过平板稀释法,对健康杜仲组织进行内生细菌的分离纯化,共得到内生细菌55株, 55株内生细菌分别属于芽孢杆菌属（Bacillus）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus）、伯克霍尔德菌（Burkholderia）、贪铜菌属(Cupriavidus)和赖氨酸芽孢杆菌属（Lysinibacillus）等5个属。利用平板对峙方法,筛选出对玉米小斑病和玉米茎基腐均有较好的抑制作用的内生细菌DZSY21,其抑菌率分别达到61.30%和79.10%,显微观察显示,拮抗菌株 DZSY21可引起病原菌菌丝断裂、畸形等现象。随后,对内生细菌DZSY21开展了gyrB及趋化性研究,结果表明,DZSY21为枯草芽孢杆菌,且对玉米根系分泌物具有较好的趋化性。     

玉米内生拮抗细菌枯草芽孢杆菌A16对小斑病菌拮抗作用的研究

从甜玉米植株中分离获得90株内生细菌菌株,用平板对峙法获得对玉米小斑病菌有较强拮抗作用的菌株A16。抑菌谱测定表明,A16对多种病原真菌均有明显的拮抗作用。A16对甜玉米种子的萌发没有明显的抑制作用,且显示有一定的促生作用。苗期盆栽表明,经A16处理过的甜玉米植株的玉米小斑病的病情指数比对照低46.3。经形态学观察、生理生化反应及16SrDNA序列同源性分析,鉴定A16为枯草芽孢杆菌。最佳培养条件为:LM培养基、28～32℃、pH6.0、振荡培养36h。     

枯草芽孢杆菌生防菌株NJ-18的发酵条件优化

通过单因子试验筛选到了适合枯草芽孢杆菌NJ-18生防菌株生长及其拮抗物质产生的最佳碳源为玉米粉和麦芽糖,最佳氮源为豆粕,最佳金属离子是Ca2+。用正交试验法确定了该培养基各组分的最佳含量为:玉米粉10g.L-1、麦芽糖30g.L-1、豆粕30g.L-1、CaCO31.5g.L-1;在确定适合该菌株的培养基组分基础上,对其培养条件进行优化试验,结果表明:初始pH为6.8、培养温度为28℃、250mL摇瓶装液量为90mL、接种量为2%(体积分数)、培养时间为36h、转速为180r.min-1时为该菌株的最佳培养条件。     

水稻白叶枯病菌拮抗细菌B56菌株的拮抗活性研究

B56 菌株经30 ℃振荡培养去菌体,其上清液经2 m ol/L 硫酸铵沉淀获得对水稻白叶枯病菌有拮抗活性的初提液。该初提液具有耐热性,经一定强度热处理后仍保持强的抑菌能力;抑菌效果在pH3～9 之间无明显差异;用胰蛋白酶、蛋白酶K 等处理后拮抗活性无明显变化。利用PhenylSepharose CL-4B疏水色谱柱和DEAE-Sephacel阴离子交换柱分离B56 菌株初提液, 得到一个具有拮抗活性的洗脱峰。该洗脱峰经SDS-PAGE检测发现具有一条分子量约为36 kD 的蛋白带。质粒提取和检测发现B56菌株存在一个稳定的内源质粒。     

抗水稻纹枯病菌拮抗蛋白质的理化性质研究

Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ａ３０ 产生的拮抗蛋白质对多种植物病原真菌有较强的拮抗作用⒚它具有抗酸、抗碱、抗热和抗蛋白酶的性质,其分子量大于３０ ｋＤ⒚２０％ 饱合度的硫酸胺可使拮抗蛋白质基本沉淀⒚至少有一个拮抗蛋白质的活性部位存在于由小于 ３ ｋＤ 的肽段所构成的结构域中⒚     

枯草芽孢杆菌CS16发酵条件及其抑菌活性物质研究

对香蕉枯萎病病原菌有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌CS16进行发酵条件优化,通过单因素和正交试验得到CS16抑菌活性较强的培养基配方和发酵条件。结果显示:培养基配方为玉米粉0.5%,豆粕1.5%,K2HPO40.01%;发酵条件为pH 7.5,接种量4%,装瓶量50mL/250mL,培养时间24h,发酵温度30℃时,菌量达3.3×109cfu·mL-1,与优化前相比提高了42倍,抑菌活性提高了7%。抑菌活性物质测定结果表明CS16中抑菌活性物质可分为杀死病原菌和抑制病原菌菌丝生长2类物质。     

枯草芽孢杆菌Xi-55液体发酵条件的优化及防治稻曲病试验

通过单因素试验和正交试验,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Xi-55的液体发酵培养基和工艺条件进行了优化,确定了在500 mL锥形瓶中发酵培养基的最佳培养基为:蛋白胨3%,甘油1.0%,K2HPO40.05%,MgSO4.7H2O 0.15%;最适发酵条件为:时间36~48 h,温度28~30℃,初始pH为7,接种量2%,装液量100 mL/500 mL锥形瓶。20 L发酵罐扩大培养的初始pH为7.2,发酵温度28℃±0.5℃,通气量10 L/min,搅拌转速180 r/min,罐压0.05~0.06 MPa,发酵终止在44 h前,最佳放罐时间为40~44 h,此时发酵液中的细菌含量为5.06×1010cfu/mL。小区试验显示,枯草芽孢杆菌Xi-55发酵液对稻曲病的防治效果为63.22%。     

枯草杆菌B826的化学诱变及筛选研究

枯草杆菌Ｂ８２６（ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢ８２６）是一株对水稻白叶枯病菌有强烈拮抗作用的细菌．本研究测定了枯草杆菌Ｂ８２６的对数生长曲线并利用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）处理对数生长期的细胞,获得了１６０个存活的菌株,其中６个菌仍保留拮抗活性或拮抗活性有所提高,其余的均丧失拮抗活性．突变菌Ｎｏ．３５能稳定地保持高效的拮抗活性和遗传．     

大豆根腐病拮抗菌枯草芽孢杆菌8-32抗菌物质性质的初步研究

对致病菌—尖孢镰刀菌(Fusrium oxysporum)具有较强拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)8-32产生的理化性质进行了初步研究。结果表明,该抗菌物质80℃处理30 min,拮抗活性仍保持在90.00%,100℃以上会完全丧失活性;在p H 7.0~11.0范围内抑菌活性较稳定,最适p H为8.0;高浓度(25mmol/L)EDTA使其拮抗活性降低62%;该抗菌物质对Cu2+、Fe3+敏感,对蛋白酶K不敏感。枯草芽孢杆菌8-32产生的抗菌物质具有一定的耐热、耐碱(p H 11.0)、对蛋白酶不敏感等特性。     

枯草芽孢杆菌Czk1菌株对橡胶树根病菌的抑制作用及对炭疽病生防效果研究初报

【目的】测定枯草芽孢杆菌Czk1菌株对橡胶树根病菌的抑菌活性及对炭疽病的生防效果,为进一步开发应用该菌株奠定基础。【方法】通过室内平板对峙和离体叶片接种的方法,测定Czk1菌株对13个橡胶树根病菌和1个炭疽病菌的拮抗活性以及对炭疽病的生防效果。【结果】Czk1菌株对13个橡胶树根病菌和1个炭疽病菌具有强烈的拈抗作用,且持续接种20代后依然具有很强的抑菌活性;Czk1菌株对橡胶树炭疽病有较好的生防效果,其中在发病前期先喷洒拮抗菌液的效果最好。【结论】枯草芽孢杆菌Czk1菌株对橡胶树红根、褐根、紫根、白根、臭根和炭疽病菌等多种致病真菌都有强烈的拮抗作用,且有抗菌谱广、持久稳定等特点,具有较高的潜在生防利用价值。     

枯草芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性分析及初步分离

为了探讨芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性及确定其抑菌主要成分,利用管碟法和硫酸铵沉淀法研究了代谢物对玉米圆斑病菌抑菌能力的变化。结果表明:经p H 4~9处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在60%~100%之间变化;经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在70%~80%之间;但经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌能力变化不大,仍在95%以上;经40~90℃处理后,抑菌能力变化范围在67%~100%之间,随温度升高,抑菌能力有下降趋势,但当处理温度为100℃时,发酵液几乎没有抑菌效果;代谢物经30%~70%不同浓度的饱和硫酸铵沉淀后,蛋白类沉淀物均具有抑菌作用,其中以饱和度为60%的硫酸铵沉淀后的抑菌效果最好,抑菌半径可达1.0 cm。