小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒组装和初步应用

本试验旨在研制小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据小鹅瘟和鹅病毒性肠炎基因序列,设计合成一对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保存期进行研究,之后进行临床扩大试验。该二联PCR诊断试剂盒能扩增出预期的小鹅瘟375 bp核酸片段和鹅病毒性肠炎223 bp核酸片段,与鸭瘟病毒、鹅副黏病毒无交叉反应;最低能检测到小鹅瘟病毒10⁴ ELD₅₀/mL,雏鹅新型病毒性肠炎病毒2.5×10^-1ELD₅₀;不同批次的试剂盒对同一样品检测结果一致;常温下至少可保存5个月;临床应用效果显著。该二联PCR检测试剂盒能够对小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。     

小鹅瘟病毒荧光RPA恒温快速检测方法的建立与应用

旨在建立一种以重组酶聚合酶扩增技术（RPA）为基础的快速检测方法,用于小鹅瘟病毒的快速检测。小鹅瘟是一种常见的水禽传染病,严重危害我国养鹅业的健康发展。为了快速准确对小鹅瘟进行诊断,减少该病的危害,本研究以小鹅瘟病毒VP3基因保守片段为靶点,利用重组酶聚合酶扩增技术（RPA）建立了一种准确高效的小鹅瘟病毒RPA恒温快速检测方法,并对检测方法的灵敏度、特异性进行评价,并与传统PCR和传统RT-PCR方法进行比较。结果表明,该检测方法具有较高的灵敏度,可检测到10 copies/μL的病毒核酸;具有良好的特异性,只特异性地扩增鹅细小病毒,而与鹅副黏病毒、鹅源鸭瘟病毒、小鹅流行性感冒病毒、鹅副伤寒病毒、大肠杆菌和曲霉菌均未发生交叉反应;同时该方法重复性检测的变异系数低于6%,具有很好的重复性。阳性符合试验表明该检测方法与荧光定量PCR符合率为99%。该方法可以很好地应用于小鹅瘟的大规模临床样本检测,为小鹅瘟病毒的高通量检测和流行病学调查提供技术手段。     

利用琼脂免疫扩散试验检测小鹅瘟病毒抗原及抗体的研究

<正> 小鹅瘟自方定一(1956)在扬州发现以来,国内外已有大量报道。对小鹅瘟的研究也日益深入,但有关小鹅瘟病毒及抗体的实用、快速、有效的检测技术则尚少系统报道。一般都是应用鸭胚,鹅胚或鹅胚成纤维细胞进行中和试验,费时费事。Malkinson(1974)首先以琼扩试验检测小鹅瘟抗体,但敏感性不高。继后Бондарцнко(1982),R.H.Gough(1984),郑玉美(1986)也都先后报道了小鹅瘟的琼脂免疫扩散试验。我们在上述工作基础上,制备了小鹅瘟鸭胚组织尿囊液抗原与雏鹅组织抗原,并筛选出了配制凝胶板最适缓冲液及pH。成功地应用琼脂免疫扩散试验检测小鹅瘟抗体,并初步对四川省部份市县小鹅瘟疫情进行调查。现将实验方法及结果报道于后。     

鹅细小病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

利用已经分离得到的小鹅瘟病毒GPVSP株,设计合成1对特异性的引物和TaqMan探针,通过特异性试验、敏感性试验建立了GPVTaqMan荧光定量PCR检测方法。同时饲养产蛋种鹅,接种小鹅瘟病毒,在不同的时间段采取病料,并且利用荧光定量PCR检测病毒的存在与含量,得到了小鹅瘟病毒在产蛋种鹅体内的定植规律。     

小鹅瘟病毒PCR诊断方法的建立及初步应用

为了建立小鹅瘟病毒PCR诊断方法,试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株基因序列设计1对VP3基因的特异性引物进行PCR扩增。结果表明:该法能特异性地扩增出406 bp的小鹅瘟病毒VP3基因片段,而对其他病毒基因组DNA均没有扩增出条带;病料中小鹅瘟病毒基因组DNA的最小检测量为2.175 fg/μL;用该法对延边地区疑似小鹅瘟的44只病死雏鹅进行了检测,阳性检出率为91%。     

小鹅瘟的实验室诊断及生物制品研究进展

小鹅瘟的病原为小鹅瘟病毒,主要导致雏鹅发病,该病传播快,死亡率高,制约着鹅业养殖的健康发展。文章针对小鹅瘟病毒在小鹅瘟病原检测、病原的分子诊断、病原的血清学诊断、小鹅瘟疫苗、小鹅瘟抗体等几个方面对其诊断方法和生物制品研究现状进行了概述。     

应用改良琼脂免疫扩散试验检测小鹅瘟病毒的研究

应用改良琼脂免疫扩散试验检测小鹅瘟病毒的研究汤明（四川畜牧兽医学院，荣昌６３２４６０）廖德惠，谢镜怀（四川农业大学）自Ｍａｌｋｉｎｓｏｎ（１９７４）￣［１］首次应用琼脂免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对小鹅瘟进行血清学反应的研究以来，许多学者在这方面进行了大...     

基于VP1基因的小鹅瘟病毒PCR快速检测方法的建立和应用

根据Gen Bank公布的小鹅瘟病毒VP1基因保守序列设计了一对引物,建立了检测小鹅瘟病毒PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对小鹅瘟病毒扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对小鹅瘟病毒检测的灵敏性为1pg总DNA量。以上结果表明,该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于小鹅瘟的早期确诊和病毒鉴定。     

小鹅瘟套式PCR诊断方法的建立及初步应用

本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株基因序列,设计了两对VP3基因的特异性引物,进行PCR扩增,建立了小鹅瘟病毒套式PCR诊断方法,该方法能特异性地扩增出406 bp的小鹅瘟病毒VP3基因片段而对其他病毒基因组DNA均没有扩增出条带。本方法对病料中小鹅瘟病毒基因组DNA的最小检测量为0.02175 fg/μL。通过对延边地区疑似小鹅瘟的80只病死雏鹅进行了检测,阳性检出率为95%。结果表明,本试验建立的小鹅瘟病毒套式PCR诊断方法具有极高的敏感性和特异性且检出率极高,可作为一种有效的临床诊断方法。     

小鹅瘟病原学研究进展

小鹅瘟是严重影响雏鹅健康的一种烈性传染病,其病原为小鹅瘟病毒。文章针对小鹅瘟病毒的研究现状,在小鹅瘟的流行病学及小鹅瘟病毒理化特点、生物学特性、基因组学研究和蛋白质组学研究、致病分子机制等方面进行了概述,以期对小鹅瘟病原研究和防控起到积极的指导作用。     

琼脂扩散试验检测小鹅瘟病毒抗原及抗体的试验

近年来,养鹅业发展十分迅速,为了解决雏鹅来源,常从南方引入大量鹅雏,致使小鹅瘟在我省流行,从而造成了严重的经济损失。为了更好地防治本病,早期建立诊断是十分必要的,过去常以病毒分离和剖检的病理变化进行确诊,这样需要较长的时间,操作也较复杂。另外,检测小鹅瘟免疫抗体时,常需鹅胚中和试验或用雏鹅作保护试验,这样需要较长的时间,而且费用较高。为了解决这些问题,我们参照了国外应用琼脂扩散试验检查小鹅瘟病毒抗原或检测小鹅瘟免疫抗体等资     

小鹅瘟病毒的分离与鉴定

用接种鹅胚的病毒增殖法,从具有小鹅瘟典型症状和病理变化的病死雏鹅的脏器中分离到一株病毒,并进行了鹅胚致病性试验、鹅胚中和试验、雏鹅感染试验和琼脂扩散试验.结果表明,所分离的毒株为小鹅瘟病毒.     

我国发现一种新的雏鹅传染病

四川省科研人员几年前发现的一种雏鹅传染病，经过一系列试验，日前被确认为是一种世界上新发现的雏鹅传染病。据介绍，世界上已发现能引起雏鹅感染发病的病毒只有小鹅瘟病毒和鸭瘟病毒。但自１９９３年以来，四川省一些地区３０日龄以内的雏鹅发生一种在流行病学、临床症状和病理变化方面与小鹅瘟极其相似的传染病，特别是综合性病例，后期死亡雏鹅的病变及其组织学变化与小鹅瘟有许多相似之处，但种鹅在开产前注射多次小鹅瘟疫苗，其下一代于３日龄开始仍然发病和死亡，应用小鹅瘟超免疫血清进行预防和治疗也无效。该病的死亡率一般为２５…     

华南地区小鹅瘟和番鸭"三周病"分离野毒株部分VP基因的序列差异分析

为了研究华南地区小鹅瘟病毒(GPV)和番鸭"三周病"病毒(MDPV)分离野毒株部分VP基因的序列差异情况,试验从华南地区分离到疑似5株小鹅瘟病毒和2株番鸭"三周病"病毒野毒,并分析其变异情况.结果表明:华南地区小鹅瘟病毒分离野毒株的VP基因均与小鹅瘟病毒具有较近的亲缘关系,说明VP基因可能和致病性有关;番鸭"三周病"病毒分离野毒株的VP基因与小鹅瘟病毒的相似性相对较低,但均与GenBank注册登陆的小鹅瘟病毒处于同一较大分支上.     

小鹅瘟血清学和分子生物学诊断方法

小鹅瘟(goose plaque)又称鹅细小病毒感染(goose parvovirus infection,GPVI),是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)引起的主要侵害30日龄以内雏鹅的一种急性、高度接触性、败血性传染病,传染性强且死亡率高.小鹅瘟具有典型的临床特征和病理变化,临床上可根据病鹅的临床症状和病理变化作出初步诊断,但确诊需进行实验室确诊.目前,用于小鹅瘟病原或抗体检测的主要方法有病毒的分离与鉴定、中和试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝试验、免疫酶琼脂扩散试验、免疫荧光技术和聚合酶链式反应等.本文主要对近年来上述诊断方法的研究状况进行了综述,为临床小鹅瘟病的诊断提供了有益的参考.     

小鹅瘟病毒荧光PCR检测方法的建立

依据GenBank小鹅瘟病毒(GPV)的NS基因保守区设计一对特异性引物,利用PCR扩增NS区片段,克隆、测序,采取Taqman探针法,构建小鹅瘟病毒的荧光PCR检测方法.结果表明,该方法检测GPV具有很高的特异性和敏感性,可以用于小鹅瘟病毒的检测.     

小鹅瘟PCR诊断方法的建立和初步应用

根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列 ,设计合成了 1对寡聚核苷酸引物。以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板 ,筛选了 (PCR)最佳反应条件 ,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验。结果表明 ,在 4 0 μL体积中 ,PCR最佳系统组成为 2uTaq酶、0 5mol/LdNTP和 2 0 pmol引物 ;最佳反应参数为 96℃变性 4 0s ,5 4℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,30个循环。本方法可检出 2 5× 10 -1 5EID50 小鹅瘟病毒 ,并且仅能从小鹅瘟病毒的鹅胚培养物中扩增出与设计值大小相同的 375bp核苷酸片断 ,对照病毒扩增结果为阴性。通过对 6份临床病料的检查 ,2份呈阳性 ,其中 1份来自有典型小鹅瘟症状的雏鹅 ,1份来自无典型小鹅瘟症状的雏鹅。由此说明 ,本试验所建立的诊断小鹅瘟的PCR方法具有潜在的临床应用价值     

小鹅瘟诊断方法研究进展

一 病原学检查 病毒的分离培养：病毒的分离培养是该病最准确和经典诊断方法之一。1961年方定 一、1974年KISary等相继报道了小鹅瘟病毒（GPV）的分离鉴定方法，该方法虽准确、可靠，但检测要求有胚体接种、培养设备和电镜等专业设备，而且试验周期长，不能满足快速诊断小鹅瘟的需要。 二 血清学诊断 1 琼脂扩散试验 余永建、甘孟侯等先后报道了GPV的琼脂免疫扩散试验。1987年，李埃宝等报道了琼脂扩散试验对GPV检测的研究。2000年，霍峰等也报道了应用琼脂扩散法检测GPV抗原抗体。     

小鹅瘟免疫荧光抗体的制备及检测方法研究

本试验建立有效的小鹅瘟检测方法。通过利用鹅细小病毒免疫实验鹅,提取抗体（IgG）,并利用异硫氰酸荧光素（FITC）染色。利用制备的荧光抗体来对小鹅瘟病例进行直接免疫荧光诊断。经实验,制备出的鹅IgG荧光抗体敏感性较高、特异性较强,并建立较为高效的小鹅瘟直接免疫荧光检测方法。     

免疫酶琼脂扩散试验在小鹅瘟诊断中的应用

利用抗小鹅瘟病毒酶标单克隆抗体建立了一种新的诊断方法一免疫酶琼脂扩散试验.该方法在检测小鹅瘟病毒抗原时,灵敏度比常规琼脂扩散试验高256倍左右.可直接检出鹅胚尿囊液及病料组织中的小鹅瘟病毒.15例自然病例肝组织的检验结果与病毒分离结果一致.在检测血清抗小鹅瘟病毒抗体时,灵敏度比常规琼脂扩散试验提高256倍。该方法灵敏、简便、快速、准确,适用于小鹅瘟临床诊断及免疫鹅抗体水平的监测.