表生长因子对鼻咽癌细胞膜肌醇磷酯磷酸化的促进作用

用差速离心结合密度梯度离心法分离细胞膜,将EGF、〔γ-~(32)P〕ATP和膜制品一同温育进行磷酸化反应,抽提磷脂后进行硅胶H薄层层析放射自显影,结果:对PIP的生成,EGF1nmol/L时即有明显促进作用,     

表皮生长因子对鼻咽癌细胞体外生长和膜蛋白磷酸化的影响

本文以人低分化鼻咽癌CNE—2Z细胞系为对象,发现:(1)EGF低浓度时(0.01～0.17nmol/L)促进细胞生长,高浓度时(≥1.67nmol/L)抑制细胞生长。(2)EGF对CNE—2Z细胞体外生长的影响可被抗EGF受     

人表皮生长因子的基因克隆与原核表达

采用RT-PCR方法从人胎盘组织中扩增出hEGF基因,将其分别连入表达载体pGEX-4t-1(+)和pGEX-6p-1(+)质粒中,并转化入BL21-CodonplusTM中,解决了大肠杆菌密码子偏爱性问题,不需附加程序就可以编码稀有密码子的重组基因。SDS-PAGE结果证明,pGEX-4t-1(+)-hEGF和pGEX-6p-1(+)-hEGF分别在大肠杆菌BL21(DE3)-CodonplusTM-RP和BL21(DE3)-CodonplusTM-RIL中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白的30%左右。     

表皮生长因子的作用机理及对体外受精的影响

表皮生长因子(EGF)是一种重要的多肽类生长因子,它对卵母细胞的体外成熟和早期胚胎的发育具有明显的促进作用。大量研究表明:EGF能够以旁分泌(Paracrine)或自分泌(Autocrine)的形式作用于胚胎组织中的EGFR,刺激内细胞团(ICM)和滋养外胚层的增殖,从而调节早期胚胎的发育。     

表皮生长因子在哺乳动物体外受精中的作用

哺乳动物体外受精(In Vitro Fertilization,简称IVF)研究已有百余年的历史.早在1878年,德国科学家Schenk就开始进行了哺乳动物体外受精的尝试.此后,许多学者为了哺乳动物的体外受精进行了不懈努力.20世纪60年代,IVF技术在世界上得到了迅速发展,而在家畜,到了80年代才真正开展起来.IVF技术对于揭示配子发育、成熟、受精和早期胚胎细胞分化等生命现象的奥秘具有重要的意义.     

谷氨酰胺·表皮生长因子对牛体外受精胚胎发育的影响

[目的]研究谷氨酰胺、表皮生长因子对体外受精胚8细胞以后发育的影响。[方法]通过对牛进行体外受精和受精卵体外培养,研究谷氨酰胺、EGF对牛胚胎体外发育的影响。[结果]添加谷氨酰胺的4~8细胞发育率和桑囊率(52.52%、30.22%),都比对照组高,但差异不显著(P>0.05)。联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子的4~8细胞发育率(55.03%)比对照组高,但差异不显著(P>0.05);桑囊率(32.39%)比对照组(27.46%)高4.93百分点,且二者之间差异显著(P<0.05)。联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子组比单独添加谷氨酰胺组的4~8细胞发育率和桑囊率都高,但差异不显著(P>0.05)。[结论]单独添加谷氨酰胺对早期胚胎的体外发育有一定的促进作用,联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子对帮助牛胚胎通过体外发育阻滞期有良好的促进作用。     

表皮生长因子及其受体、转化生长因子-α在实验性胃溃疡愈合中的作用

目的探讨胃黏膜表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)、转化生长因子-α(transforming growth factor-alpha,TGF-α)在大鼠胃溃疡愈合中的变化及意义。方法胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法检测溃疡组(42只)和正常组(6只)大鼠胃黏膜EGF、EGFR、TGF-α的表达,测量各指标的积分光密度值。结果 EGF、TGF-α以胞浆表达为主,EGFR以胞膜表达为主,三者均可见壁细胞、内分泌细胞阳性表达,阳性信号以靠近黏膜肌层为主。EGF、EGFR阳性细胞在溃疡术后1d即有增多(P<0.05或P<0.01),TGF-α于溃疡术后2d增多较为明显(P<0.01),之后均呈渐强趋势,EGFR阳性细胞在溃疡术后6d表达最强,EGF、TGF-α阳性细胞于溃疡术后10d积分光密度值达到高峰,溃疡愈合后期三种指标积分光密度值均有降低,但仍显著高于正常组(P<0.01)。结论大鼠胃溃疡自愈时期胃黏膜能特异性表达内源性EGF、EGFR、TGF-α,三者共同参与了胃溃疡愈合过程。     

重组人表皮生长因子治疗儿童复发性口腔溃疡的疗效观察

目的:观察重组人表皮生长因子(金因肽,rhEGF)治疗儿童复发性口腔溃疡(RAU)的疗效.方法:109例复发性口腔溃疡患儿随机分为实验组57例,用金因肽喷于溃疡表面,3次/d;对照组52例用西瓜霜喷于溃疡表面,3次/d;比较两组溃疡愈合情况.结果:疼痛消失的时间实验组(3.92±1.53)天,对照组(5.09±2.07)天,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);溃疡愈合时间实验组(4.97±2.21)天,对照组(6.22±2.90)天,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:金因肽治疗儿童复发性口腔溃疡可缩短疼痛和治愈时间,值得临床推广.     

鼻咽癌放疗患者恶性肿瘤特异性生长因子含量的动态观察

目的 :探讨血清恶性肿瘤特异性生长因子 (TSGF)含量对鼻咽癌放疗的监测作用。方法 :用 TSGF诊断试剂盒检测 ,对 34例鼻咽癌患者血清 TSGF放疗前后的含量作了动态观察。结果 :鼻咽癌患者血清 TSGF含量为 (86 .6 6± 9.72 ) U/ m L,与正常人差异有显著性 (P<0 .0 0 1) ,且 TSGF含量随病情的发展而显著增高 (P<0 .0 5 )。放疗后血清 TSGF水平明显下降 ,于第 8周降至正常水平。结论 :血清 TSGF水平检测可作为鼻咽癌病情变化、进展的一个监测指标。     

转人表皮生长因子基因红花研究

【目的】制备转人表皮生长因子(Human epidermal growth factor,hEGF)基因红花植株,为利用植物生物反应器规模化生产hEGF奠定基础。【方法】利用分子生物学方法将植物偏好的双基因hEGF克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-hEGF-hEGF,采用冻融法将质粒pOP-hEGF-hEGF转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导方法转化红花,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因红花阳性植株。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-hEGF-hEGF,通过转化红花子叶,共获得了30株转基因红花植株,其中3株鉴定为阳性,转化率为10%;对转化植株进行分子生物学检测,从DNA水平检测结果可知,hEGF基因已整合进红花基因组中。【结论】获得了转hEGF基因的红花株系。     

表皮生长因子受体在妊娠滋养细胞疾病的表达及其意义

目的：研究表皮生长因子受体(EGFR)在妊娠滋养细胞疾病的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法，检测石蜡包埋的l05例妊娠滋养细胞疾病和20例正常早孕绒毛组织EGFR蛋白表达水平。结果：EGFR蛋白在妊娠滋养细胞疾病和正常早孕绒毛中均有不同程度的表达，在合体滋养层中，妊娠滋养细胞疾病和正常早孕绒毛组织均强烈表达EGFR蛋白，它们之间的表达差异无显著性。在细胞滋养层，正常早孕绒毛EGFR蛋白表达显著高于葡萄胎(P＜0．01)，葡萄胎EGFR蛋白表达显著高于侵蚀性葡萄胎和绒癌(P＜0．01)，EGFR蛋白表达在侵蚀性葡萄胎和绒癌之间差异无显著性(P＞0．05)。EGFR蛋白表达水平与滋养细胞肿瘤临床指标无关。结论：EGFR表达降低反映了在妊娠滋养细胞疾病发生发展过程中EGFR起重要作用。     

EGF对人鼻咽癌细胞体外生长和膜蛋白磷酸化与肌醇磷脂磷酸化的影响

本文观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）与人低分化鼻咽癌上皮细胞系 　ＣＮＥ－２ Ｚ在软琼脂培养基上集落形成能力及膜蛋白、膜肌醇磷脂磷酸化的关系。 结果表明：（１）ＥＧＦ经受体介导，低浓度时（０．０１～０．１７ｎｍｏｌ／Ｌ）促进细胞生 长，高浓度时（≥１．６７ｎｍｏｌ／Ｌ）抑制细胞生长；（２） ＥＧＦ促进膜蛋白磷酸化反 应；（３） ＥＧＦ促进膜肌醇磷脂转换。提示了ＥＧＦ对ＣＮＥ－ ２ Ｚ细胞体外生长的影 响与其促进膜蛋白磷酸化和膜肌醇磷脂转换有关。本文根据实验结果探讨了ＥＧＦ 与人鼻咽癌的关系。     

烟草瞬时表达人表皮细胞生长因子(hEGF)

构建人表皮细胞生长因子(hEGF)病毒表达载体,为实现h EGF在烟草中瞬时表达提供理论和实验依据。PCR扩增获得hEGF基因,将其连接到马铃薯病毒表达载体pGR107上,利用农杆菌介导法感染烟草叶片,对其进行转录水平和翻译水平检测。根据GFP的表达确定收获hEGF时间为病毒侵染叶片后第7天;RT-PCR检测的结果表明hEGF基因在转录水平有表达;Western blotting、ELISA和MTT结果表明感染烟草叶片中有hEGF蛋白表达,表达量为总可溶蛋白的0.0103%,且具有生物活性。     

G15对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体表达的影响

【目的】研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。【方法】间情期小鼠腹腔注射GPER抑制剂G15,按注射剂量0.3,1.5和7.5nmol/只设3个注射组,另设腹腔注射等体积生理盐水的对照组;药物注射后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠的卵巢,用免疫组织化学SP法和RT-PCR法分别检测各组小鼠发情周期不同阶段卵巢EGFR及其mRNA的表达。【结果】EGFR免疫组化阳性产物主要分布于卵巢的各级卵泡中,阳性染色随卵泡发育而逐渐增强,其中颗粒细胞越靠近卵母细胞染色越强,发情周期卵巢EGFR相对表达量表现为发情期发情前期间情期发情后期。小鼠注射G15后,各情期卵巢中EGFR的表达呈G15剂量依赖性减弱,除发情后期外,均极显著下降(P0.01);1.5和7.5nmol/只G15注射组各情期EGFR的相对表达量无显著差异(P0.05),但均极显著低于0.3nmol/只G15注射组(P0.01)。EGFR mRNA的变化规律与EGFR相对表达量的变化趋势完全一致。【结论】G15可在一定程度上通过GPER下调发情周期小鼠卵巢中EGFR的表达,从而影响发情周期卵巢的功能。     

人良、恶性鼻咽组织中表皮生长因子受体的表达

表皮生长因子受体(EGFR)是一种分子量为170kd位于细胞膜表面的糖蛋白,能与生长因子结合而致细胞增生和分化。目前,对EGFR在人良、恶性组织中的表达,报道不一。本实验以抗EGFR的单克隆抗体     

激素和表皮生长因子对牛卵母细胞体外受精的影响

[目的]研究激素和表皮生长因子(EGF)对牛卵母细胞体外受精的影响。[方法]通过对牛进行体外受精和受精卵体外培养,研究了不同血清、激素及EGF对卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育的影响。[结果]单独添加ECS组卵母细胞的成熟率、卵裂率、桑囊率均最高,分别为81.39%5、6.05%、30.94%,且卵裂率、桑囊率与添加NBS组的差异显著。在培养液中添加EGF和激素能促进卵母细胞的成熟和卵裂的发生,其成熟率、卵裂率分别为82.50%、83.33%和61.43%、62.21%,均比未添加EGF组的高,差异显著,并且EGF与激素间有协同作用。[结论]单独添加10%ECS对卵母细胞的作用最理想,EGF对牛卵母细胞体外成熟及卵裂有良好的促进作用。     

重组毕赤酵母高密度发酵表达猪表皮生长因子及其纯化鉴定

采用高密度发酵法在5.5 L发酵罐中对pPIC9-pEGF/GS115重组毕赤酵母Pichia pastoris菌株进行发酵,在培养至酵母菌体密度(D600nm)约150时,以甲醇诱导目的蛋白表达,48 h后菌体密度达315,目的蛋白表达产量约300 mg/L.发酵上清液经0.45μm和截留相对分子质量30 000的超...     

人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备

根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物，上游引物5′端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGF cDNA；测序表明，克隆的hEGF cDNA与已发表的序列完全相同；经Signalp V1．1软件分析，山羊β-乳球蛋白信号肽序列与hEGF cDNA能在预计位点切割。将此cDNA克隆到GEX-6P-1中，经IPTG诱导，在BL21(DE3)大肠杆菌中表达约32ku的GST-hEGF融合蛋白。将此cDAN插到pcDNA-3中，用此重组质粒免疫青紫蓝兔，经6次免疫后获得抗hEGF的多克隆抗体，该抗体能识别GST-hEGF融合蛋白。     

表皮生长因子、成熟时间和牛卵泡液对山羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞的体外成熟受多种因素的影响,成熟效率仍有待提高。本实验研究了表皮生长因子(EGF)、成熟时间和牛卵泡液(bFF)对山羊卵母细胞核成熟的影响。培养液中添加10-30 ng/m l的EGF对山羊卵母细胞第一极体(PB1)排出率无显著影响;体外成熟17h时第一极体排出率与成熟19h无显著差异,而明显低于其他组(P<0.05),在成熟19-25h间第一极体排出率没有显著变化;10?F在胎牛血清(FBS)有无的条件下对山羊卵母细胞第一极体排出率均无显著影响。结果表明:不同的成熟时间对极体的排除率有一定的影响;而添加一定剂量的EGF、bFF对黄淮山羊卵母细胞的核成熟无明显影响。     

猪表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

采用RT-PCR方法从猪肾脏皮质组织中扩增出pEGF基因，将其连接到克隆载体pMD18-T上，经测序鉴定正确后，再克隆到原核表达载体pET-41a（＋）上，构建重组表达质粒pET-EGF．用重组质粒转化Ecoli BL21（DE3）宿主菌，经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳和Western-blotting对GST—EGF融合蛋白进行分析，结果表明37℃诱导表达的融合蛋白含量较高，占菌体总蛋白的20．2％；30℃诱导表达的可溶性融合蛋白含量较高，占菌体总蛋白的7．7％．