玉米粉添加量对玉木耳室内栽培的影响

本研究采用室内挂袋出耳的模式,在玉木耳栽培配方中添加1%、2%、3%的玉米粉,分析了不同玉米粉添加量对菌包质量、一潮产量和玉木耳营养成分的影响,并探索了玉木耳室内栽培工艺流程及相关管理技术。结果表明:随着玉米粉添加量的增加,打孔后菌丝恢复能力、菌包质量、原基整齐度均有所改善、一潮菇产量逐步增加,其中添加3%玉米粉的配方A3较CK提高了11.39%,且未延长原基形成时间。添加2%玉米粉的配方A2在总糖、蛋白质、粗纤维、氨基酸总含量皆高于CK。玉木耳室内挂袋出耳从制种到一潮采收栽培周期为80~90 d,记录了不同时期管理所需温度、湿度、CO2浓度的环境参数,初步获得了玉木耳室内栽培工艺流程,为玉木耳工厂化栽培生产和研究提供参考。     

甜瓜枯萎病菌原生质体的制备及再生条件筛选

获得甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. melonis)具有再生功能的原生质体,是构建其高效遗传转化体系的重要途径之一。本研究采用单因素分析法分析了甜瓜枯萎病菌菌丝摇培时间、裂解酶浓度、酶解时间和温度、渗透压稳定剂的种类和浓度及p H对原生质体释放的影响,并对再生培养基种类和培养基琼脂浓度等再生条件进行优化,建立了高效制备甜瓜枯萎病菌原生质体的稳定体系。结果表明,将分生孢子培养18 h后收集菌丝体,以1.2 mol/L的KCl作为稳定剂,在pH 6.0的条件下,加入10 mg/m L的裂解酶,32℃酶解4 h,获得的原生质体产量最高,在琼脂浓度为0.5%(W/V)的SR固体培养基中进行原生质体再生,再生率最高,可达26.32%。本研究结果为甜瓜枯萎病菌的分子生物学研究和抗病育种提供技术支持。     

博落回叶肉组织原生质体的分离条件筛选

博落回(Macleaya cordata)是一种罂粟科博落回属的多年生草本植物,其体内的血根碱(sanguinarine,SAN)具有抗炎、调控肠道菌群和促进动物生长的作用,因此长期以此作为饲用抗生素的天然源替代品在全世界70个国家和地区广泛销售。随着全世界越来越多的国家限用甚至禁止饲用抗生素,博落回资源的需求逐年增加。因此,通过育种等方法来提高博落回中血根碱的含量具有十分重要的意义。而利用原生质体技术进行品种改良是一个快速高效的方法,其中制备原生质体是第一步。本研究以博落回无菌苗叶片为材料,进行了原生质体分离和纯化。在一定条件下,通过比较不同的酶解渗透压、温度、时间和pH值,得到最适甘露醇浓度为0.6 mol/L,最适温度为30℃,最适时间为6 h,最适酶液pH值为5.8,在该条件下的产量可达到6.03×10^5个/mL,活力为87.3%。该研究为未来博落回的种质资源创新提供了前期研究依据。     

穿心莲叶片原生质体制备方法的建立与优化

为优化穿心莲叶片原生质体制备方法,本研究运用酶解法考察不同酶组合、渗透压、MES浓度、液料比、植物生长情况等因素对穿心莲原生质体制备的影响。结果表明,穿心莲叶片原生质体制备的适宜材料为长约3 cm的新鲜穿心莲叶片;酶解液组成为1.5%纤维素酶R-10+0.75%离析酶R-10+0.6 mol/L D-甘露醇为渗透压调节剂+20mmol/LMES+5mmol/LCaCl_2+0.1%BSA作为质膜稳定剂,液料比为50∶1。本研究获得的穿心莲叶片原生质体制备优化方法,可为后续原生质体培养提供参考依据和为穿心莲种质创新提供新途径。     

甘蓝枯萎病菌原生质体的制备与再生条件的优化

建立甘蓝枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. conglutinans）高效遗传转化体系的途径之一是获得其具有再生功能的原生质体。本研究通过对甘蓝枯萎病菌菌丝摇培时间、菌丝的酶解时间、保护原生质体的渗透压稳定剂的种类和浓度等因素进行优化,建立了制备甘蓝枯萎病菌原生质体的高效、稳定体系,并在SR固体培养基上实现了甘蓝枯萎病菌原生质体的再生,再生率可达21.13%。该体系的获得将为下一步甘蓝枯萎病菌高效遗传转化体系的建立和致病机理的解析奠定基础。     

白灵菇原生质体制备条件的优化

以白灵菇单核菌丝为材料,利用溶壁酶进行原生质体的制备,考察各因素对原生质体产量的影响,采用单因素试验和正交试验确定最佳条件。结果表明：原生质体产量最高的条件是取菌龄为7天的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L甘露醇为稳渗剂,在酶解温度27℃、酶浓度2%的条件下酶解150 min。研究结果可为白灵菇原生质体融合及转基因研究提供理论依据。     

高粱原生质体的制备及转化方法研究

以高粱幼苗为材料,利用1%的纤维素酶Cellulose R10和0.75%的果胶酶Macerozyme R10处理高粱幼茎,对比不同的酶解时间,发现酶解7h原生质体浓度最高、质量最佳。以经过氯化铯密度梯度离心法获得的高纯度质粒对获得的原生质体进行转化,用激光共聚焦进行荧光观察,结果显示,GFP和YFP在全细胞表达。本研究首次建立了高粱以高粱幼茎为材料的原生质体制备及转化体系,其方法简单、高效,可以用于高粱基因功能研究。     

多年生黑麦草原生质体制备及瞬时表达体系的建立

本研究以10～12 d苗龄的多年生黑麦草品种NUI叶片为材料,通过正交实验确定原生质体分离的最佳条件.结果表明,在甘露醇浓度为0.5 mol/L、纤维素酶R10浓度为1％、离析酶R10浓度为0.3％的酶解液中,28℃黑暗条件下酶解4 h后分离的原生质体最为理想,原生质体浓度达到4.69×106个/mL,活性达到88.5...     

甘蓝原生质体制备体系优化及瞬时转化体系的建立

为研究甘露醇浓度、酶解时间、离心力大小和不同外植体对原生质体产量和活力的影响,采用正交试验方案对甘蓝原生质体制备体系进行了优化,并建立了甘蓝原生质体的瞬时转化体系,同时利用该体系对甘蓝CRISPR/Cas9基因编辑系统进行了初步研究。结果表明:以下胚轴为材料,酶液组成为1%纤维素酶+0.5%离析酶+0.6 mol/L甘露醇+10 mmol/L MES+1 mmol/L CaCl₂+0.1%BSA+5 mmol/Lβ-巯基乙醇,26℃,60 r/min,黑暗酶解6 h后,用2 115 r/min离心5 min收集细胞,可获得高质量的原生质体,原生质体产量约为3.0×10⁶个/g,活力约为90.9%;另外,在20%PEG4000介导下,将带有绿色荧光蛋白的载体(PYBA 1132)分别转入从甘蓝下胚轴、子叶、叶球分离获得的原生质体中,在荧光显微镜下观察到GFP绿色荧光信号,转化效率分别为43%,35%,19%,表明下胚轴分离获得的原生质体最适于瞬时转化。同时以下胚轴分离获得的原生质体为受体,分别转化线粒体特异表达载体COX和质体特异表达载体969...     

培养基及植物激素对烟草原生质体再生植株的影响

本文研究了不同基本培养基、培养方法及培养基中不同激素浓度配比对烟草叶肉细胞细胞原生质体再生植株的影响.结果表明,利用MS基本培养基进行琼脂糖固体平板培养,对烟草叶肉原生质体的发育速度、分裂频率及愈伤组织形成效果最佳;培养基(1/2 MS NAA 0.5 mg/L 2,4-D 1.0mg/L 6-BA0.5 mg/L 1.2%LMA) (1/2MS 2,4-D2.5mg/L KT0.5mg/L)的培养效果最好,再生细胞团的数目及愈伤组织最多;用1/2 MS IAA 2.0 mg/L KT 0.5 mg/L和1/2 MS IAA0.5 mg/L KT 2 mg/L两种培养基对愈伤组织诱导分化时出芽率高;在再生芽诱导生根时直接用不含任何激素的MS基本培养基效果最理想.     

莲子胚培养再生植株及原生质体分离的研究

以莲子胚为外植体建立江溪红莲离体培养再生体系,并以所得再生植株的展开叶片为材料,摸索原生质体分离的条件,为荷花体细胞杂交育种提供实验基础.结果表明,较理想的芽增殖培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;成苗阶段采用固液双层培养基最适宜.而最佳的叶片原生质体分离酶液组合为2％纤维素酶+1％离析酶+o.1％果胶酶.     

草菇原生质体制备、再生条件的响应面法优化及诱变效应

为了提高草菇原生质体在筛选耐低温突变筛选的诱变效率,建立基于草菇原生质体制备产量及再生率的响应面模型,优化草菇原生质体制备体系。本研究以草菇V23为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对参数菌龄、酶的浓度、酶解时间、酶解温度等进行了系统的优化研究。结果表明,溶壁酶的浓度为1.71%,酶解温度为31.4℃,菌丝体菌龄为3.42 d,酶解时间为3.21 h,草菇原生质体产量最高,达到2.57×107个/m L;用1.84%的溶壁酶在31.2℃条件下对菌龄为3.68 d的菌丝体酶解3.38 h,原生质体再生率最高,为14.1%。并利用紫外诱变和化学诱变技术对草菇原生质体进行了耐低温诱变初探,筛选获得5株抗冻能力提高的突变菌株。草菇V23原生质体产量和再生率的优化条件的建立,为提高草菇在遗传转化、基因组重排、基因编辑技术等后续分子遗传学操作实验打下了良好的基础。     

沙地云杉内生真菌拮抗菌株的筛选及鉴定

从194株沙地云杉内生真菌中筛选出对8种植物病原物具有拮抗效果的沙地云杉内生真菌。本研究初筛采用皿内对峙法筛选,复筛采用打孔法筛选。两种方法相结合筛选出了对8种植物病原真菌具有拮抗效果的沙地云杉内生真菌。初筛后具有25株沙地云杉内生真菌对8种植物病原真菌有抑制作用。复筛后具有4株沙地云杉内生真菌对8种植物病原真菌均有抑制效果。本研究通过以上两种筛选方法筛选出具有拮抗作用的沙地云杉内生真菌,为下一步深入研究代谢产物奠定了基础。     

烟草云85叶肉原生质体培养再生植株及影响因素的研究

以烟草云85无菌苗为材料，成功地将烟草叶肉原生质体培养出再生植株。并同时就烟草叶肉原生质体的酶解条件、基本培养基及培养基中的激素组成等因素对植株再生的影响进行了研究和探索。     

红花龙胆内生真菌多样性分析及抑菌活性菌株筛选

为了明确民族传统中药材红花龙胆(Gentiana rhodantha Franch.ex Hemsl)内生真菌群落结构及功能,本研究采用组织块分离法,对贵州省六盘水地区的野生红花龙胆内生菌进行分析,结合形态特征和ITS序列对分离的菌株进行鉴定,并阐述内生菌多样性;采用平板对峙法筛选能显著抑制红花龙胆菌核病菌(Scle-...     

甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3)。得到重组工程菌株BLC01。研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响,得到优化发酵条件:装液量为50ml/250ml三角瓶,当培养液OD值达0.8时,添加诱导剂IPTG至浓度为0.9mM,32℃诱导5h。此时,甜蛋白monellin表达量可高达细菌可溶性蛋白的45.2%。超声破碎细胞后,利用热处理和酸处理结合的方法有效去除宿主蛋白,透析后利用Sephadex G- 50进行柱层析,得到纯化重组甜蛋白monellin。monellin基因在重组大肠杆菌中的表达产物具有生物活性。     

苋菜原生质体和瞬时转化体系的建立及应用

为了建立稳定、高效的苋菜原生质体制备和瞬时转化体系,本研究以栽培苋菜(Amaranthus tricolor)品种‘京苋三号’无菌组培苗叶片为材料,通过反复试验确立了苋菜原生质体分离制备和瞬时转化体系,并利用该体系对一个苋菜甜菜红素合成调控相关的MYB转录因子进行了亚细胞定位分析。结果表明,以1.0%纤维素酶+0.25%离析酶组合,酶解3～4 h,能得到活力较高的叶肉细胞原生质体,可直接用于植物蛋白亚细胞定位等实验;苋菜甜菜红素合成调控相关的MYB转录因子定位在细胞核中。苋菜原生质体制备和瞬时转化体系的建立,为苋菜基因功能研究提供了重要的技术支撑。     

用于连续制备乳清蛋白ACE抑制肽的酶膜反应器运行条件优化

采用中空纤维膜连续型酶膜反应器制备血管紧张素转移酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制多肽。在传统酶解工艺条件的基础上,设计出能高效连续制备ACE抑制肽的酶膜反应器,并对此酶膜反应器的运行参数进行了优化,得到能高效制备ACE乳清蛋白源抑制肽的运行条件是:循环流速22.4 L/h,底物质量分数5%,跨膜压力0.07 MPa,酶膜反应器能稳定运行12 h以上,得到乳清蛋白酶解产物的ACE抑制率为30%￣50%。     

毛竹愈伤组织的诱导及培养条件优化

以当年生毛竹种子为材料,通过分析比较不同条件下愈伤组织的成活率,为毛竹快速繁殖提供理论依据。结果表明：诱导的培养基为MS+2,4-D 4 mg/L+ZT 0.1 mg/L,pH=8时愈伤组织诱导率为(34.88±2.81)%。用培养的愈伤组织进一步培养,得出适合毛竹愈伤组织继代培养条件为2,4-D 2 mg/L。进一步培养发现褐化是毛竹愈伤组织继代培养的主要障碍,本研究发现了红光培养和去除硝酸盐的培养基的条件下能将毛竹愈伤组织的褐化死亡率降至1.2%,同时促进愈伤组织的增殖生长和进一步分化。总之,本研究探索了毛竹愈伤组织的诱导和继代培养的条件,为毛竹的快速繁殖和基因工程育种提供了基础。