对北方果树冻害防治措施的探讨

由于经纬度、地势、天气状况等自然因素的不同,我国南方与北方种植的果树品种存在一定的差异,在果树生长与维护的过程中也会遇到不同的阻碍。北方地区纬度高、昼夜温差较大且四季分明,在种植果树时除病虫害外,果农面对的最大难题是低温冻害。从北方地区果树种植的实际情况出发,深入探讨了果树冻害的原因及受害部位,并提出相应的措施。     

首个仁果类果树主要病毒RT-PCR检测试剂盒的研制

以GF305、弗吉尼亚小苹果为带毒(阳性)和非带毒(阴性)试材,利用作者已建立的总RNA提取方法提取试材中的总RNA,根据三种病毒(ACLSV,ASGV和ASPV)外壳蛋白基因序列设计寡核苷酸引物,采用RT-PCR技术研制三种病毒检测试剂盒,达到最优化检测。并应用该试剂盒对果园中存在的病毒进行了检测。该试剂盒检测病毒速度快(6~7 h)、灵敏度高(较ELISA法高8 000倍)、专一性强、检测成本较低,是一种有推广价值的仁果类果树主要病毒检测方法。     

北京地方品种鸡禽白血病病毒的跟踪检测与PCR检测方法的建立

采用ELISA方法对京郊某种鸡场2群鸡从出雏到45周龄进行禽白血病病毒p27(ALV-p27)抗原检测,对血清进行ALV-AB及ALV-J抗体检测,按标准计算方法对检测数据进行分析.结果表明:A群鸡不同周龄直肠拭子中ALV-p27抗原检出率差异显著,出雏时为0.73%(2/273),8周龄最高,阳性率达45.06%(114/253);B群鸡不同周龄直肠拭子中ALV-p27抗原检出率差异显著,出雏时为0(0/182),14周龄时最高,达45.52%(66/145).A群鸡38,45周龄ALV-J抗体阳性率分别为35.71%(15/42),27.08%(13/48),B群鸡27,34,43周龄ALV-J抗体阳性率分别为4.00%(2/50),2.33%(1/43),9.30%(4/43).A群鸡45周龄ALV-AB抗体阳性率为8.33%(4/48),B群鸡34,43周龄ALV-AB抗体阳性率分别为6.98%(3/43),6.98%(3/43).同时建立PCR检测ALV的方法,分别扩增出大小为717 bp P27抗原片段和545 bp的ALV-J特异性片段,P27片段与ALV-J亚群毒株HPRS-103、NX0101的相应核苷酸序列同源性达91.3%和94.7%,ALV-J特异性片段与ALV-J亚群毒株HPRS-103、NX0101的相应核苷酸序列同源性达97.1%～97.3%和98.1%～98.6%.     

北方果树栽培管理措施及种植技术要点

我国作为农业大国,其果树资源十分丰富,果业的发展在我国有着十分广阔的空间和前景。近年来,我国北方果业发展迅速,据不完全统计,我国北方果树栽培面积达到1.3×10~4 hm^2以上,水果总产量达到15×10~4 t左右,给我国带来巨大的经济效益。随着我国北方果业规模的不断扩大和发展,果树栽培管理措施和种植技术上存在不足,导致出现一些问题,影响了北方果业的经济效益。基于此,主要针对北方果树栽培管理措施及种植技术要点进行了分析。     

磺胺甲噁唑残留检测阻断ELISA试剂盒的研制

在建立磺胺甲噁唑单克隆抗体(SMZmAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上,研制出SMZ残留快速检测试剂盒(SMZ-Kit),并对其性能进行了测定.结果表明,SMZ-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.990 1,检测范围为1.0～128.0 μg/L,灵敏度为0.73 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为11.5 μg/L,检测限为1.0μg/L;饲料样、牛奶样的平均添加回收率为83.9%,83.3%,平均批内和批间变异系数均<15%;SMZ-Kit与磺胺嘧啶的交叉反应(CR%)为2.88%,与其他磺胺类药物无交叉反应;试剂盒在4℃可保存6个月.     

马铃薯卷叶病毒(PLRV)检测及系统进化关系的研究进展

马铃薯卷叶病毒（PLRV）是导致马铃薯严重减产的世界性病毒病害，本文介绍了PLRV的研究状况，检测方法，不同分离物CP序列同源性进行了系统进化树比较并对这些研究进行了总结。     

口蹄疫病毒3D聚合酶B细胞表位的筛选鉴定

以口蹄疫病毒株AFT2 RNA为模板,反转录并扩增3D聚合酶基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRI酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF72 3D聚合酶的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析3D聚合酶的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位进行筛选鉴定,结果显示,表位3D2和3D4为病毒株AFT2 3D聚合酶的优势B细胞表位,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究奠定基础.     

口蹄疫病毒AF72株 3D聚合酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用RT—PCR方法扩增口蹄疫病毒（FMDV）AF72株的3D聚合酶基因,并将其克隆至pGEM—Teasy载体,测序分析结果表明,AF72 3D聚合酶基因与GenBank中公布的其他4个参考序列均具有较高的同源性。将目的基因插入原核表达载体pET-30a（＋）中,构建了重组表达质粒pET-3D,鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导,3D聚合酶基因在大肠杆菌中获得了正确表达,目的蛋白的分子量为46ku。Western blot检测结果显示,表达产物可以与抗A型FMDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。     

马铃薯纺锤块茎类病毒RT-PCR检测及全序列分析

根据马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)基因序列设计合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,经RT-PCR法扩增出全长的cDNA片段,结果从感病组织中扩增出与预期的360 bp大小的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将其克隆到质粒pGEM-T载体上,进行全序列分析.结果表明,与国内外的报道相比较,核苷酸同源率高达98%以上.PCR产物克隆作为RT-PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,为进一步进行抗PSTVd基因工程研究打下了良好基础.     

冬小麦黄矮病毒的分子生物学鉴定试验研究

本研究以检测冬小麦黄矮病毒(BYDV-PAV)的分子生物学特征为目的。首先,通过电击法将3种质粒(UV1304、UV1306、UV1304rtd)转化土壤农杆菌(EHA105、4404,GV3101等)。然后,通过机械损伤使含有上述质粒的农杆菌侵染小麦(西农749、小偃6号、张氏3个品种),并将侵染后的小麦放在室外进行处理,至表现出感染病毒的症状时提取病毒RNA并进行检测。经过一段时间的处理后,只有西农749表现出症状,RNA电泳也显示出提取物中存在RNA,但是经过RT-PCR反转录然后再PCR扩增c DNA后进行电泳出现负结果。3种质粒的c DNA电泳结果出现相似现象:以CP5′+MPR1为引物得到的c DNA电泳均无条带;其他引物得到的c DNA电泳均显示相似的条带,而且因引物不同条带位置也不同。     

盆栽果树制作与养护的主要技术环节

随着生活水平的不断提高,人们对盆栽果树的需求日益高涨。盆栽果树已成为家庭绿化的新亮点。本文将介绍盆栽果树制作与养护的主要技术环节。     

北方杂粮区主要农作物的几种间（混）作模式

张家口是我国北方主要杂粮区之一,主要杂粮有谷子、黍子、马铃薯、豆类等。当地农民有着丰富的粮豆、粮油、果粮、果豆等间作、套种、混作的经验。着重介绍了该区谷子间作豆类、马铃薯间作豆类、马铃薯混作菜籽、地膜花生间作玉米等种植形式和方法。     

为害幼龄果树及苗圃的几种主要害虫的生物学特性及其防治

发展果树,育苗及对幼树的管理是打好基础的第一步,其中防治害虫是一项重要工作。据在我省各地调查,在果树苗圃及幼树期为害最严重的害虫有:大灰象(Sympie-zomias lewisi Roelots),食芽象(Xylinophorusmongolichs Faust),小青象(Phyllobius pru-ni Mats),网目拟地(Opatrum subaratumFald),蒙古拟地(Gonocephalum mongolicum     

河南商品蛋鸡群中鸡马立克氏病的流行病学研究

2011-2012年,河南省大面积暴发商品蛋鸡群肿瘤病,临床剖检疑似马立克氏病(Marek’s disease,MD),为进一步确诊病因,根据马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)的meq、gB和pp38基因分别设计了3对特异性引物,利用PCR技术对送检的疑似病例鸡的肝脏和脾脏样品分别进行了检测和分析。结果显示,各地区随机抽取的5只病例鸡肝脏、脾脏样品中均扩增出3种不同大小的MDV特异性病毒基因PCR产物,这表明MDV在河南鸡群中广泛流行,并导致了商品蛋鸡群MD的暴发。研究结果填补了河南省MD流行病学空白,为今后MD的临床快速诊断及有效防控提供了重要参考依据。     

利用试剂盒快速检测苹果锈果类病毒的研究

为简化苹果锈果类病毒(Apple skin scar viroid, ASSVd)的常规RT-PCR检测步骤,找到更为快速准确的检测方法,本研究以感染ASSVd的田间苹果枝条为试验材料,根据基因库中ASSVd的基因序列设计合成特异性引物,选用国产试剂盒,对RT-PCR体系进行优化。结果表明,总RNA和反转录产物的用量分别为37.4~74.8 ng、1.0~3.0 μL,退火温度为63.8℃,可以获得良好的两步RT-PCR扩增;而总RNA用量为3.74~7.48 ng、退火温度在50.1~62.6℃范围内时,一步RT-PCR的扩增效果较好。采用优化的RT-PCR检测体系对山东采集的样品进行检测,2种检测体系的检测结果完全一致。本研究建立的两步和一步RT-PCR优化体系为ASSVd的批量快速检测奠定了基础。     

榆树,北方盆景的优良树种——北方榆树和榆树盆景调查

为了充分利用本地区树种资源,创作出具有一定特色的盆景艺术作品,我在对北方盆景资源进行调查研究中发现,榆树是北方制作盆景的优良树种。榆树品种较多,据资料介绍,"我国约有20余种,南北方均有分布",南方品种较多,北方也不少,有10多种。其共同特征是:落叶乔木或稀乔木,树冠圆形,树皮多纵裂,叶边锯齿明显,端尖,叶小节密。生长较快,对土质要求不严,抗寒抗干旱能力较强,但积水对其生长不利。在北方农村用途很广,也是北     

北方冬季牡丹催花失败的主要原因及对策

近年来,牡丹促成栽培技术日臻完善并被广大花农所掌握。供应元旦、春节市场的冬季催花牡丹是促成栽培中最主要的手段。在牡丹催花实践中,既有成功的经验,也有失败的教训。北方冬季牡丹催花失败,有单一原因,也有综合原因,而且大多数为综合因素导致的。笔者结合多年来的工作经验,将近年来北方冬季牡丹(以品种洛阳红为例)催花失败的主要原因及其对策总结如下,以期对广大花农有所帮助。     

猪伪狂犬病病毒及猪细小病毒复合PCR检测方法的建立

根据Genbank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了PRV和PPV的单项PCR诊断方法,通过优化PCR条件最终成功地建立了PRV和PPV的复合PCR诊断方法.敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10-10.5/100 μL TCID50、对PPV的检测可以达到109.5/100 μL TCID50.对20头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果5头份PRV阳性,3头份PPV阳性,其中3头份PRV和PPv同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性.结果表明,PRV和PPV复合PCR诊断方法具有高度特异性和敏感性,可用于兽医临床诊断.     

甘薯病毒多重RT-PCR检测方法的建立

为了快速进行甘薯病毒田间检测和脱毒苗诊断,该研究建立了一个能够同时检测SPCSV、SPLV和SPFMV这3种病毒的多重RT-PCR检测方法。根据GenBank公示的甘薯病毒基因序列来设计3种甘薯病毒的引物,分别对模板浓度、退火温度、Mg2+浓度和循环次数进行优化,同时对模板浓度进行10倍梯度稀释,检测多重RT-PCR灵敏度。结果显示,模板浓度为19 ng/μL、退火温度为52℃、Mg2+浓度为0 mmol/L、循环次数为40次时,可以同时扩增出大小为276 bp、570 bp、425 bp三种病毒的基因片段,多重RT-PCR检测灵敏度为10-4,单一RT-PCR检测灵敏度为10-3,多重RT-PCR检测灵敏度是单一RT-PCR的10倍。该研究使用优化的多重RT-PCR检测技术可获得稳定、灵敏、准确、高效地和同时地检测田间复合侵染的3种甘薯病毒。