以P33重组蛋白为诊断抗原建立牛瑟氏泰勒虫病乳胶凝集试验

本试验用P33重组蛋白建立了牛瑟氏泰勒虫病乳胶凝集试验。对81份被检血清的检测结果,阳性率为44.4%,明显高于血涂片镜检法的21.0%(P<0.01),而且在该病流行地区的不同牧场、不同性别和不同年龄牛的阳性率之间未见显著差异。试验表明,以P33重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、抗原易纯化和成本低等优点。     

乳胶凝集试验快速检测副猪嗜血杆菌

利用原核表达并经过纯化的副猪嗜血杆菌TbpB N端蛋白及人工合成的特异性多肽制备单克隆抗体,经碳化二亚胺(EDC)将纯化后的单克隆抗体IgG与羧化乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件进行合理选择,建立了快速检测副猪嗜血杆菌的乳胶凝集试验方法.利用LAT方法检测148株副猪嗜血杆菌疑似菌株,参考16 S rRNA-PCR方法的结果,符合率为83.1%,且致敏乳胶不与临床常见菌株发生凝集反应.结果表明,此检测方法具有操作简便、快速、特异性高的特点,便于在基层推广使用,为副猪嗜血杆菌的诊断和有效防治提供了参考和依据.     

乳胶凝集试验诊断猪囊虫病

采用新鲜痘猪囊内液体，离心，取上清作为抗原原液，加乳胶颗粒，经处理，制成致敏原。分别同患猪血清和脑脊液标本，应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验，检查赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取的371份患猪血清和138份脑脊液，诊断猪囊虫病。以待检血清出现“ ”以上凝集者，对照不凝集判为阳性。通过试验，两者的符合率为86.9%（血清），94.7%（脑脊液）。     

乳胶凝集试验检测牛、羊淋巴结中的沙门氏菌

用沙门氏菌多价血清致敏乳胶并制成乳胶抗体,建立沙门氏菌乳胶凝集试验检测方法（LAT）。用该方法和常规分离培养检测法检测38份牛淋巴结、101份羊淋巴结,结果乳胶凝集试验牛淋巴结阳性21份,羊淋巴结阳性44份;常规分离培养检测法牛淋巴结阳性22份,羊淋巴结阳性48份,两种方法的阳性符合率牛淋巴结为81.8%,羊淋巴结为81.3%。试验表明乳胶凝集试验操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测,是一种适合基层单位用来检测沙门氏菌的可靠方法。     

Serodiagnosis of canine leptospirosis by solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect antibodies to Leptospira interrogans serotype canicola in dogs was developed and evaluated. Comparison of the ELISA with the microscopic agglutination test (MAT) showed that, during the first two weeks after an experimental infection with serotype canicola, the ELISA detected antibody at higher dilutions than the MAT. After the second week post-infection both tests detected antibody at almost equal titres (r = 0.89). The outer envelope (OE) antigen of serotypes icterohaemorrhagiae, copenhageni and canicola was fairly serotype-specific, whereas the pellet (P) antigen showed more cross-reactivity. Both OE and P antigen of Leptospira biflexa strain Patoc I could be used as cross-reacting antigen in the ELISA. Compared to the MAT, the ELISA has some technical advantages. It is suggested that the ELISA would be useful as a screening test.     

乳胶凝集试验检测牛羊淋巴结中的沙门氏菌

采用沙门氏菌多价血清致敏乳胶并制成乳胶抗体,建立沙门氏菌乳胶凝集试验检测方法(LAT),分别用LAT法和常规分离培养检测法对38份牛淋巴结、101份羊淋巴结进行检测.结果:乳胶凝集试验牛淋巴结阳性21份,羊淋巴结阳性44份;常规分离培养检测法牛淋巴结阳性22份,羊淋巴结阳性48份,两种方法的阳性符合率均超过80%.试验表明乳胶凝集试验操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测,是一种适合基层单位检测沙门氏菌的可靠方法.     

乳胶凝集试验检测鸡新城疫病毒血清抗体的研究

用硫酸铵沉淀、透析浓缩的鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）抗原致敏乳胶,然后所鸡新城疫阳性血清进行方阵滴定,选择出最佳致敏条件并制成新城疫病毒乳胶抗原,由此建立超乳胶凝集试验（ＬＡＴ）,用来检测新城疫血清抗体;用所建立的乳胶凝集试验（ＬＡＴ）和血凝抑制试验（ＨＩ）同步检测６９份鸡血清,结果乳胶凝集试验阳性６２份,阴性７份;血凝抑制试验阳性６６份,阴性３份,两者的总符合率为９４．２％（６５／６９）,且两者的检出率基本一致。结果表明,乳胶凝集试验具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测等优点,是一种适合基层单位用来检测鸡新城疫病毒血清抗体的新方法。     

乳胶凝集试验检测番鸭呼肠孤病毒方法的建立

用纯化的抗番鸭呼肠孤病毒病抗体致敏乳胶成功地建立了检测番鸭呼肠呼病毒的方法。通过试验，确定了抗体致敏乳胶的最佳浓度1：10(0．4242mg/mL)，最佳致敏温度37℃，最佳致敏时间2个小时。人工攻毒雏番鸭30只，用所建立的方法检测粪便。结果表明，攻毒后的第3天粪便中即可检测到病毒，直至攻毒鸭全部死亡都可从粪便中检测到病毒抗原；同样攻毒1日龄雏番鸭30只，剖检取心、肝、脾按常规方法处理，用所建立的方法的检测。结果表明，首先是脾脏在攻毒后第4天3只中有2只检测结果阳性，第5天2只死亡鸭中有一只肝检测结果阳性，脾脏2只都呈阳性，此后的病死鸭脾和肝均为阳性，而心脏则未见有阳性。这对，临床上诊断与防治番鸭呼肠孤病毒感染具有重要的参考意义。     

用重组蛋白 NcSAG1t作为ELISA诊断抗原进行改良绒山羊Neospora caninum的血清学诊断

N caninum；NcSAG1t；ELISA；改良绒山羊；抗体     

番鸭小鹅瘟病胶乳凝集试验与病毒分离的比较研究

应用GPV胶乳凝集方法（LPA）和病毒分离（VI）检测人工感染病例9份、健康对照6份,临床疑似送检病鸭28份。其中人工感染样品检测LPA和VI符合率为93.3%（14/15）;临床疑似样品检测LPA和VI符合率为89.3%（25/28）;两者总符合率达90.7%（39/43）。LPA方法具有简便（肉眼可判定,不需仪器）、快速（检测抗原20min内）、特异、准确等优点,比VI更适合临床使用。     

牛布鲁菌单克隆抗体乳胶凝集试验方法的建立

建立了用纯化好的牛布鲁菌(B.abortus)单克隆抗体致敏乳胶的检测方法。通过试验确定了抗体致敏乳胶最佳偶联蛋白量为1.23 mg/mL,最佳致敏时间4 h,最佳的乳胶浓度为1%。水样模拟样本的制作,取含1.0×109cfu/mL灭活的B.abortus544A生理盐水菌悬液各1 mL,加入9 mL自来水中,充分混合均匀,各取1 mL,土样、奶样模拟样本制作同上。最低检出率水样为3×104cfu/mL~1.0×105cfu/mL,土样、奶样为5×104cfu/mL~1.0×105cfu/mL。     

乳胶凝集试验检测鸡传染性法氏囊病毒血清抗体的研究

以鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因工程抗原致敏乳胶微粒,用IBDV阳性血清进行方阵滴定,以最佳致敏系件制成乳胶抗源,建立乳胶凝集试验(LAT),用来检测血清中IBD抗体。对467份待测血清分别、同时作LAT和双向琼琼脂免疫扩散试验(DATA)。结果,LAT阳性419份,阴性48份;DAGT阳性425份,阴性42份.试验表明乳胶凝集试验操作简便、快速、敏感性高、特异性强,可用于现场检测,适合基层单位检测IBDV血清抗体。     

Serodiagnosis of bovine besnoitiosis by ELISA and immunofluorescence tests

Sera from non-infected cattle and cattle infected with Anaplasma, Babesia, Theileria and Sarcocystis were tested for antibodies to Besnoitia in ELISA and immunofluorescence tests (IFT) with Besnoitia besnoiti of blue wildebeest origin as antigen. Only 2 out of 86 sera gave false positive reactions in ELISA and none in the IFT, indicating a high specificity for the tests. Three-hundred-and-three bovine sera from 3 farms in an area endemic for besnoitiosis were similarly tested and the results were correlated with clinical findings based on visual inspection for typical symptoms and the presence of cysts in the scleral conjunctiva. Most of the positive tests were observed in cattle older than 1 year. Of the cases with scleral cysts, 68,7% were positive in the ELISA and 81,74% in the IFT. However, 45,74% (ELISA) and 49,47% (IFT) of the clinically negative cattle were clinically positive, indicating a high incidence of clinically inapparent infection. These results indicate a relatively low sensitivity for these serological tests. An unexpected finding was that the ELISA remained negative for at least 60 days after experimental infection of the cattle, the maximum period for which tests were done, whereas the IFT became positive. No antibodies against B. besnoiti could be found in human sera. Besnoitia jellisoni antigen gave positive results with B. besnoiti antibodies in ELISA, but not in the IFT.     

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖,待出现细胞病变后,反复冻融,收获病毒液,用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定,选择致敏乳胶的最佳条件,制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清,其中血凝抑制抗体阳性为161份,阴性为42份,阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份,阴性为53份,阳性率为73.89％,两种方法阳性符合率为93.16％,经统计学检验P＞0.05,两者差异不显著。结果表明,乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛,具有简便、准确的优点,在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。     

The Development and Application of the Latex Agglutination Test to Detect Serum Antibodies against Japanese Encephalitis Virus

The attenuated SA14-14-2 strain of Japanese encephalitis virus (JEV) was cultured in BHK-21 cells. The viral supernatant was purified and concentrated with PEG (MW 20 000). A suitable concentration of JEV antigen was used to sensitize latex to prepare the latex antigen. The specificity, sensitivity and stability of the antigen were assessed. A latex agglutination test (LAT) was developed for rapidly detecting antibody against JEV infection. The LAT and haemagglutination inhibition (HI) assay were compared by simultaneously testing 35 porcine serum samples from five farms. Ninety per cent (20/23) of the samples were seropositive by both assays. No significant difference was found between the two methods (p > 0.05). Furthermore, when 1613 porcine sera from 120 farms were tested by LAT, the number of positive sera was 652, while that of negative sera was 961, ranging from 20% to 50% positive throughout the year. These results indicate that LAT is an appropriate candidate method for epidemiological surveys for and diagnosis of Japanese encephalitis.     

乳胶凝集试验检测鸡传染性鼻炎血清抗体的研究

将Ａ型和Ｃ型鸡副嗜血杆菌培养后,菌落计数,离心计数,离心后用０．０１ＭｐＨ７．４磷酸盐缓冲液洗涤菌体２次。经过对致敏温度、致敏时间、致敏乳胶的菌体浓度及菌体的处理方式等条件的选择,建立了检测鸡传染性鼻炎血清抗体的乳胶凝集试验。与琼脂扩散试验相比,特异性一致,但更加敏感,且操作简便、快速。结果说明,该方法有较好的应用前景,尤其适用于本病的现场快速诊断。     

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用vero细胞增殖的IBDV抗原建立了间接ELISA，用于定量检测IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究，确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒，并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明，研制的试剂盒在-20℃保存至6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试刺盒对同样血清样品检测，符合率为86．7％。间接ELISA试剂盒与琼扩试验的符合率为92，5％。该试刺盒可对大量血清样品进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速，更适合于大型鸡场IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。     

禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感音接ELISA快速诊断技术试剂盒化，确定其外包装、规格、盒内组成，对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性，可重复性、符合率、与国外同类产品比较，保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由9种成套试剂组成，在－15℃至－20℃保存540天各项性能仍然很好。该试剂盒与离流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测，符合率为100％。拥有剂盒，只票面 准备生理盐水，即可对大量血清样品同时进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速、更适合于禽流感免疫技术的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒16个批次，已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院，农业公司、口岸检疫部门及鸡等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。