鸡源大肠杆菌O38、O53及O75分离株外膜蛋白型的研究(英文)

[目的]研究鸡源大肠杆菌血清型O38、O53及O75分离株的外膜蛋白型。[方法]以8株不同血清型鸡致病性大肠杆菌为试验菌株,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠对其进行外膜蛋白(OMP)的提取,提取产物经SDS-PAGE电泳检测后,根据OMP型模式图确定其OMP型。[结果]3个血清型的8株大肠杆菌外膜蛋白共分为3个型。其中2株O75血清型大肠杆菌的外膜蛋白分别为OMP-I型和OMP-II型,1株O53血清型大肠杆菌的外膜蛋白为OMP-II型,5株O38血清型大肠杆菌的外膜蛋白分为OMP-I型和OMP-III型。[结论]该研究结果表明,同一血清型的大肠杆菌菌株外膜蛋白可能属于完全不同的OMP型,血清学上毫不相关的分离株之间的外膜蛋白却可具有相同的OMP型。同一血清型的分离株的外膜蛋白之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株的外膜蛋白之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

嗜水气单胞菌322A的外膜蛋白及其抗原性

用十二烷基肌氨酸钠抽提结合超速离心的方法提取一株日本鳗鲡致病性嗜水气单胞菌322A和其他4株气单胞菌标准菌株的外膜蛋白(Omp);通过SDS-PAGE分析比较这5株气单胞菌Omp的组成.结果表明,5株气单胞菌的Omp电泳可得到5-13条条带,其分子质量主要集中在20-50 ku之间,且28 ku的Omp为5株气单胞菌所共有.用罗非鱼感染322A全菌后的恢复期血清进行蛋白质印迹试验的结果显示,322A的Omp条带中有4条发生阳性反应,其分子质量分别为28、37、43和45 ku.用兔抗322A Omp的血清进行蛋白质印迹试验的结果显示,322A的Omp条带中有5条发生阳性反应,其分子质量分别为28、33、37、43和45 ku.不同抗血清的印迹结果提示了322A数条主要Omp具有免疫原性,有望成为疫苗研发的候选材料.     

鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) ORF25蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

利用PCR方法扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)ORF25基因的部分基因序列,并将扩增产物连接到原核表达载体pGEX-KG,成功构建了CyHV-2-ORF25-KG重组质粒。IPTG将其诱导后,SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表达,分子质量大小为42ku,且主要以包涵体形式存在;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,多次免疫后通过细胞融合,筛选出1株单抗5C6;经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,这株单抗可以识别CyHV-2ORF25蛋白。     

16省市禽源性大肠杆菌O18和O78的外膜蛋白型

经对我国16个省市、自治区分离到的110个禽病原性大肠杆菌O18和O78分离株的外膜蛋白型(OMP型)的测定,结果表明,这些分离株共产生了4个OMP型,56个O18分离株可分为3个OMP型,54个O78分离株出现了4个OMP型,其OMP1～3型为二者所共有.     

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白型的研究

对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）12个血清的外膜蛋白型进行了测定。用N-十二烷酰肌氨酸法提取其主要外膜蛋白（OMPs）,经SDS-PAGE电泳后,用考马斯亮兰法进行染色,结果APP 12个血清型的OMP可以分为6个OMP型,表明APP的OMP具有多样性。     

秀珍菇多肽的制备及其抗氧化活性

以多肽得率为指标,酶解秀珍菇蛋白质制备多肽,通过正交试验优化制备工艺.正交试验结果表明,酶解各因素对秀珍菇多肽得率影响程度的大小为：pH>时间>温度>酶浓度;确定的最佳酶解工艺参数为：pH 11、时间1.5 h、温度55℃、碱性蛋白酶浓度6 000 U·g^-1,制备的多肽得率为70.96%;体外抗氧化能力测定结果表明：2.5 mg·mL^-1秀珍菇多肽对DPPH、ABTS⁺和羟基自由基的清除率分别为81.57%、99.81%、98.84%;SDS-PAGE检测结果表明,秀珍菇多肽的分子质量约为5.8 ku;氨基酸分析结果表明,秀珍菇多肽含有8种必需氨基酸,占氨基酸总量的43.2%.综上,在最佳酶解工艺下制备的秀珍菇多肽具有分子质量低且抗氧化能力强的特点.     

禽致病性大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研究及其应用

本试验用提取的禽致病性大肠杆菌1型菌毛免疫BALB/c小鼠,筛选获得2株单克隆抗体;经MSHA试验和Western-blot试验证明,它们是1型菌毛,其凝集价分别为25～26、28～29,ELISA效价分别为103、104～105;对46株带有1型菌毛的禽致病性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测,结果表明该单克隆抗体都与之发生特异性反应。     

哈维氏弧菌的主要致病因子及其特性分析

从大黄鱼致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1株提取外膜蛋白(OMP)、脂多糖(LPS)和胞外产物(ECP),并进行毒性实验,以研究哈维氏弧菌的主要致病因子及其特征.结果表明:OMP、LPS致病性较弱,而ECP可导致鱼死亡,初步得出哈维氏弧菌GYC1108-1株的主要致病因子为胞外产物,其对鱼的半数致死量(LD50)为3.5 μg·g-1;该蛋白酶与底物偶氮酪蛋白(azocasein)作用的最适pH为8.0,最适温度28℃,对热敏感,分子质量为55 ku;该酶活性被碘乙酸抑制,也被SDS和HgCl2完全抑制,PMSF和ZnCl2能部分抑制该蛋白酶活性,而CuCl2、CaCl2、MgCl2对该酶活性影响不大,2-巯基乙醇、DTT、L-半胱氨酸、EDTA和EGTA对该酶活性有促进作用,表明其为半胱氨酸蛋白酶;研究发现ECP具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、卵磷脂酶和脂肪酶活性,无脲酶活性;免疫印迹结果发现GYC1108-1的ECP能与大黄鱼抗GYC1108-1血清发生免疫发应,分子质量为55 ku的半胱氨酸蛋白酶是具有免疫原性的物质.     

产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究

[目的]研究产色素温和气单胞菌的致病机理。[方法]从不同来源的病鳖和病鳗体内分离到4株产生棕色色素温和气单胞菌,并采用平板法进行检测。[结果]对鲫鱼胸基部注射9×108cfu/ml菌悬液0.4ml后,BA10、BA15和BA16株对鲫鱼的致死率在33.3%以上,M1株对鲫鱼无致死性。采用超声波破碎-SI法提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳结果显示,4株温和气单胞菌的外膜蛋白相对分子质量范围在20.1～66.2kDa,其中1个鳗鱼分离株M1株属OMP1型,由8条主要蛋白带组成;其余3个鳖源分离株BA10、BA15和BA16株属OMP2型,由9条主要蛋白带组成。[结论]产色素与致病性无相关;4株产色素温和气单胞菌之间存在共同抗原;产色素温和气单胞菌的OMP型可能与菌株来源有关。     

鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究

以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链（α1与α2）、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示：2种蛋白质的pH值稳定性相似;胶原蛋白的热稳定性不如小清蛋白,但比小清蛋白更耐胃蛋白酶消化;在高温高压处理下,胶原蛋白明显降解,小清蛋白则出现了降解与聚合2种情况.应用8份鱼类过敏患者血清的酶联免疫吸附测定实验结果显示,小清蛋白对6份血清有特异性IgE反应,胶原蛋白对3份血清有特异性IgE反应.Dot-blot实验结果显示,胶原蛋白与鱼类过敏患者血清出现了特异性的杂交显色斑点.与小清蛋白相似,鲤鱼胶原蛋白具有特异的IgE结合活性,提示其是一种潜在的过敏原.     

两种染色法测定禽源性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型

对江苏地区２５个禽源性大肠杆菌Ｏ＿１、Ｏ＿２和Ｏ＿（７８）分离株的外膜蛋白型（ＯＭＰ型）进行测定。用Ｎ－十二烷酰肌氨酸（Ｓａｒｋｏｓｙｌ）提取其外膜蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后，分别以考马斯亮蓝染色法和银染法测定其外膜蛋白型。８个Ｏ＿１分离株、９个Ｏ＿２分离株分属２个ＯＭＰ型，其中的１个为二者所共有，而８个Ｏ＿（７８）分离株的ＯＭＰ型亦与该型用同；两种染色法对ＯＭＰ型的测定结果一致。与银染法相比，考马斯亮蓝染色法具有简便和背景清晰的优点，因此，考马斯亮蓝染色法是禽源性大肠杆菌分离株ＯＭＰ型测定的更为理想的染色方法     

临床分离鸡源性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

[目的]了解禽致病性大肠杆菌分离株的遗传相关性。[方法]对分离自保定、秦皇岛和北京3个地区规模化养鸡场的病死鸡体内的38株大肠杆菌,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型。[结果]38株大肠杆菌共有3个Omp型,其中Omp-1型为O78、O88、O2、O18、O93、O766个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O76血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O93、O78、O88、O2分离株所共有。这表明同一血清型的菌株可能属于完全不同的Omp型,而血清学上毫不相关的分离株之间却可具有相同的Omp型。[结论]该研究证实了同一血清型的分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

毒性与无毒性织纹螺肌肉蛋白的差异分析

通过SDS-PAGE分析毒性和无毒性织纹螺肌肉蛋白的电泳图谱差异,综合比较蛋白条带的迁移率及浓度得出,毒性织纹螺肌浆蛋白的特征条带主要为23.6ku和35.0ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为22.8ku和31.2ku;毒性织纹螺肌原纤维的特征条带主要为38.0ku、50.8ku和135.0ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为36.9ku和125.8ku.结合优化样品制备、等电点聚焦程序等条件,初步建立了织纹螺肌肉蛋白的双向电泳条件,并通过双向电泳分析了毒性和无毒性织纹螺肌肉中存在的差异蛋白.     

鳜骨骼肌快肌和慢肌的组成特征比较

骨骼肌组成特征是鱼类肉质性状评价的重要基础。为全面了解鳜（Siniperca chuatsi）肉质性状的组成特征,通过制作骨骼肌石蜡切片,比较了鳜快肌和慢肌两种类型骨骼肌的组织学特征,快肌和慢肌在肌纤维细胞直径、形态上存在差异。利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析了鳜快肌和慢肌的蛋白质组成特征,它们在50～60 ku和10～15 ku大小的条带中存在差异。克隆了鳜快肌和慢肌肌球蛋白重链（MHC）S1结构域的序列,快肌和慢肌S1结构域cDNA序列长度分别为2 523 bp、2 520 bp,编码841、840个氨基酸,氨基酸序列的相似度为87.6%,以两个loop区的差异最大。研究结果表明,鳜快肌、慢肌在肌纤维细胞形态、蛋白质组成以及肌球蛋白重链分子结构上均存在较明显的差异,这些差异与其担负不同的运动功能相关。     

Observation on the modifying activity of the protein from Elytrzgia repens rhizome for ice crystal

In winter,spring and summer,the rhizome of wild Elytrzgia repens of Heilongjiang Province was selected to extract the soluble which whole protein and the apoplastic protein,and analyzed by SDS-PAGE.The result indicated that there were two specific polypeptides in two types protein from winter;their relative molecular weight were identified as 52 ku and 26 ku by analyzing software:the apoplastic protein from winter had the ability of modifing the growth of ice crystal which appeared hexagonal in shape observed with the phase-contrast photomicroscope.So the apoplastic protein from winter has the antifreeze characters and the 52 ku protein is more likely the antifreeze protein.     

奶牛乳房炎大肠杆菌分离株主要免疫原性蛋白纯化

应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原性蛋白。对其进行电洗脱纯化,得到单一条带的目的蛋白。     

猪链球菌及其血清型的PCR检测

从广东省部分地区猪场采集疑似猪链球菌病病猪的扁桃体棉拭病料202份,用PCR方法检测棉拭样本培养物中猪链球菌（Streptococcussuis）及其主要致病血清型（1、2、7和9型）．检出阳性样品147份,检出率为72．8％．其中检出S．suis血清2型21份,检出率为12．9％;检出血清9型6份,检出率为3．0％;未检出血清7型和1型．此外,不同地区和不同发育阶段的猪,S．suis检出率和各血清型检出情况也存在较大差异．从而证实广东地区猪群中广泛存在S．suis呈地域性流行,并且是多种血清型共存．     

猪肺炎支原体、鸡毒支原体膜蛋白免疫原性分析

通过分析猪肺炎支原体（Mhp）、鸡毒支原体（MG）膜蛋白的免疫原性及化学成分,为其致病机理的研究提供基础。分别采用SDS-PAGE、免疫印迹、高碘酸雪夫染色（PAS法）和高碘酸一硝酸银法对Mhp232株和MGFMF4株膜蛋白的分子量范围、种类和免疫原性进行分析,鉴定膜糖蛋白的数量与种类。Mhp膜蛋白分子量在30～250ku之间,有12条带;MG膜蛋白分子量在25～200ku之间,有29条带。免疫印迹表明,Mhp中46ku膜蛋白具有免疫原性;MG中56ku膜蛋白具有免疫原性。PAGE电泳表明,Mhp有5条带,MG有12条带。PAS法鉴定膜糖蛋白,Mhp有1条带,MG有2条带;高碘酸一硝酸银法鉴定膜糖蛋白,Mhp约在相同位置出现1条带,而MG显示7条带,表明此法的灵敏度高于PAS法。