猪瘟病毒囊膜糖蛋白DNA疫苗的研制

构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白（Ｅ２）基因的重组真核表达质粒ｐＲＣＳＥ２。将ｐＲＣＳＥ２和空载体ｐＲＣ分别免疫小鼠,ＥＬＩＳＡ检测结果表明：仅ｐＲＣＳＥ２免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。ＤＮＡ疫苗在许多传染病研究中已取得可喜成果,因此猪瘟病毒ＤＮＡ疫苗可能会成为防制猪瘟的一条新的途径。     

兽用DNA疫苗的研究进展及应用

本文主要介绍了DNA疫苗的特点、组成、免疫途径、免疫反应的机制、DNA疫苗的捕捉、细胞活素／共同刺激分子和兽用DNA疫苗的研究进展以及应用。     

双顺反子表达质粒在DNA疫苗研究中的应用

简述了DNA疫苗的研究概况，介绍了真核双表达质粒的结构特点及其在基因佐剂和二价DNA疫苗中的应用情况，总结分析了双表达质粒的优点和存在的问题，并对其今后在DNA疫苗中的研究方向和前景进行了展望。     

基因疫苗的研究近况

本文综述了基因疫苗的概念、基因免疫的发现、基因疫苗的载体、基因疫苗的免疫学机理、基因疫苗的优越性以及基因疫苗的应用研究概况。并提出了目前基因疫苗在实验研究过程中存在的问题和展望，从而为动物疫病防治提出了新思路。     

自杀性DNA疫苗

基因疫苗与传统疫苗相比,具有许多优势:比较稳定,便于保存和运输;将抗原以天然的形式提供给免疫系统,可同时引起全面的体液免疫和细胞免疫应答;对不同亚型的病原体有交叉抵抗作用,没有减毒活疫苗毒力回复的危险性等。基因疫苗一出现,就受到普遍关注,迅速成为疫苗研究领域的一大     

DNA疫苗在动物医学上的研究进展

DNA疫苗,又称核酸疫苗或基因疫苗,是指将编码引起保护性免疫应答的目的基因片段插入质粒载体,然后将重组质粒直接导入机体,通过宿主细胞的转录系统表达目的抗原,进而诱生保护性免疫应答的一种生物制剂。目前在动物医学领域,DNA疫苗已经在许多动物身上进行了研究,并取得了一定的     

猪瘟疫苗种类及使用

用早期我国研制成功的猪瘟结晶紫疫苗预防猪瘟效果良好，但灭活疫苗产生免疫力慢．免疫期短，生产成本高，还要繁殖强毒制苗．存在散布病原的危险。自1946年开始．国外相继有Raker、Kopramskc和Hadson等培育兔化弱毒，但对猪仍保持一定的毒力而诱发严重反应．甚至导致流产和死胎。这些弱毒株不能单独注射．要与抗猪瘟血清共同注射，难以推广应用。     

猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2.用BamH Ⅰ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2.对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定.用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10 μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平.结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达.免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应.     

猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)株的构建及生物学特性研究

采用磷酸钙转染系统，将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA215株DNA与PP63LacZE2 DNA共转染Vero细胞，获得SA215（A）1、SA215（A）2和SA215（A）3等12个重组病毒株。以光生物素标记的HCV E2基因为探针进行初步鉴定后，挑选SA215（A）1株作BamHI酶切和southern转印杂交鉴定，结果表明构建是成功的，将其命名为SA215（A）。直接荧光抗体检测、SDS-PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCV E2基因在重组病毒内获得表达，产生大小约51 ku的囊膜糖蛋白。对SA215（A）株进行部分生物学特性研究，培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK21和鸡胚成纤维细胞等多种细胞，但对不同细胞系表现有一定的差异。SA215（A）株10^5 PFU／mL接种21日龄健康仔猪（伪狂犬病和猪瘟检测阴性），接种后28d用10^6 PFU的PRV Fa强毒株滴鼻攻毒，42d用猪瘟SM株血毒1mL（10^5 MLD／mL）肌肉注射攻击，结果表明接种猪能抵御2次病毒攻击，表明SA215（A）株具有良好免疫原性，是一株优秀的猪瘟、伪狂犬病二价疫苗候选株。     

用于DNA疫苗的质粒大规模纯化研究进展

DNA疫苗就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内,使外源基因在活体内表达.     

猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

利用RT—PCR技术，用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因，克隆于DNA复制子载体pSCAl中，获得重组质粒pSCA／1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞，RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示，猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明，自杀性DNA疫苗pSCA／1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。     

传染性支气管炎病毒S1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性,以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因,引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游,构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ,以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠,于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明,ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体,具有良好的免疫原性。     

猪瘟疫苗研究进展

猪瘟是猪的一种高度接触性传染病 ,由于其造成巨大的经济损失 ,故而为清除本病作了很多工作。猪瘟疫苗的接种是控制猪瘟的重要手段。猪瘟疫苗包括灭活苗、弱毒苗及基因工程疫苗。猪瘟兔化弱毒苗因其优良的免疫原性是目前猪瘟防治应用最为广泛的疫苗之一。基因工程疫苗是目前猪瘟疫苗研究的热点领域 ,其包括亚单位疫苗、合成肽苗、活载体苗、核酸疫苗等。值得一提的是猪瘟病毒标记疫苗研究近年来发展迅速 ,目前已出现商品化的亚单位标记疫苗 ,可使猪瘟疫苗接种和自然感染区别更为简单、快捷。本文就猪瘟疫苗的发展及应用作了简要介绍     

牛病毒性腹泻病毒在猪瘟疫苗中的污染情况及其检测方法的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)同属黄病毒科瘟病毒属,猪瘟疫苗中污染BVDV可引起免疫失败。但由于两者在病毒粒子结构、基因组结构和抗原特性等方面均很接近,在血清学上存在交叉反应,因此难以检测猪瘟疫苗中污染的BVDV。文章对BVDV在猪瘟疫苗中的污染情况和检测方法进行了论述,旨在为猪瘟疫苗污染BVDV的检测提供理论基础。     

我国猪瘟类制品知识产权现状调查研究

猪瘟在我国被列为一类动物传染病,是危害养猪业生产的主要传染病之一。猪瘟疫苗及诊断技术是做好猪瘟防控的主要手段。目前,我国兽药知识产权的保护,主要为专利保护及行政许可保护。通过对我国猪瘟疫苗、诊断试剂等猪瘟类制品的知识产权相关数据统计,以及生产现状情况分析,提出了应加强对猪瘟种毒资源及相关知识产权的保护。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗，是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗，具有能够激发机体体液和细胞免疫反应，核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点，被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用，是近年来研究的一个热点。抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型。DNA疫苗不仅有预防疾病的作用，同时还具有治疗疾病的作用。在不久的将来，DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗,是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗,具有能够激发机体体液和细胞免疫反应,核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点,被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用,是近年来研究的一个热点.抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型.DNA疫苗不仅有预防疾病的作用,同时还具有治疗疾病的作用.在不久的将来,DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段.     

免疫增强剂对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为查明免疫增强剂是否能够提高猪瘟疫苗免疫抗体水平,选用猪用转移因子与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗的方法进行猪瘟疫苗免疫试验。与对照组相比,猪用转移因子直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组S/P平均值首免后10 d提高127.27%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高156.60%,差异极显著（P＜0.01）;整个试验期提高57.05%。与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组相比,S/P平均值首免后10 d提高131.48%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高91.55%,差异显著（P＜0.05）;整个试验期提高31.84%。证明猪用转移因子直接稀释猪瘟疫苗可提高猪瘟疫苗的免疫抗体水平;同时也揭示采用断奶前后首免、60日龄左右二免的猪瘟疫苗免疫程序,仔猪在首免后10～30 d免疫抗体S/P值低,阳性率在60%以下,易感染猪瘟野毒。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。     

猪瘟猪伪狂犬病二联苗对仔猪免疫效果观察

本文探讨了猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)活苗不同时间对仔猪免疫效果的相互影响。结果表明:同时免疫两种活疫苗(二联苗组),PR会干扰CSF前期抗体的产生。二联苗组猪瘟抗体3周后才达到阳性,而猪伪狂犬病抗体在7日时就达到阳性,两种抗体均在49日达到峰值,峰值均比单一免疫、分时免疫的峰值略低。分时免疫两种疫苗产生的抗体均比单一免疫时的抗体要低,且相互干扰不明显。