大花萱草EMS离体诱变和抗叶枯病突变体的筛选

利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理大花萱草愈伤组织和分化芽,经过萱草叶枯病菌毒素离体筛选获得抗病愈伤组织和分化芽突变体。以不同浓度剂量EMS诱变处理大花萱草子房诱导的愈伤组织和分化芽,用经过毒力检测的萱草叶枯病菌毒素粗提液进行离体筛选,通过在继代培养基中添加毒素粗提液,对愈伤组织进行浓度递增法和分化芽一步筛选法,获得抗叶枯病突变体材料。结果表明,0.50%~0.75%EMS处理愈伤组织60 min,0.75%~1.00%EMS处理分化芽60 min,分别获得半致死剂量效应。对存活的愈伤组织进行病菌毒素浓度递增逐步筛选(10%30天~20%30天),分化芽用40%的毒素液一步法筛选21天。经定向筛选,初步获得抗叶枯病分化芽突变体103株,有待进一步进行抗病鉴定。愈伤组织未能获得抗病突变体再生植株。     

EMS离体诱变和抗大花萱草叶枯病突变体的筛选

利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变大花萱草‘红运’愈伤组织和分化芽,目的是获得抗叶枯病愈伤组织和分化芽突变体。结果表明：0.50%~0.75% EMS处理愈伤组织60 min;0.75%~1.00% EMS处理分化芽60min,分别获得“半致死剂量”效应。对存活的愈伤组织进行毒素浓度递增的多步筛选(10% 30 d—20% 30 d);分化芽80%毒素21d的一步筛选。经定向筛选,初步获得抗叶枯病分化芽突变体103株,有待进一步进行抗病鉴定。愈伤组织未能获得抗病突变体再生植株。     

云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌叶片高频再生体系的建立

本研究以云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌苗叶片为材料,研究云南杜鹃叶片直接和间接再生植株的方法。结果表明:ZT是理想的云南杜鹃无菌叶片直接分化不定芽和愈伤组织分化不定芽的细胞分裂素,其中以WPM+ZT 4 mg/L+NAA 0.01 mg/L效果最好,叶片分化不定芽率达74%,平均分化不定芽数6.91个,愈伤组织分化不定芽率达76.67%;附加TDZ诱导出的愈伤组织状态好,体积大,疏松,适宜的叶片诱导愈伤组织的培养基为WPM+TDZ 0.5mg/L+2,4-D 1~2 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L,愈伤组织诱导率达91.33%以上,较好的生根培养基为1/2 WPM+IAA 1.5 mg/L,生根率达89.33%以上。研究结果为云南杜鹃遗传转化研究奠定了基础。     

利用病原真菌毒素离体筛选茄子抗黄萎病突变体的研究

以茄子黄萎病菌毒素为选择剂,结合组织培养技术,离体筛选茄子抗黄萎病突变体,开拓一条体细胞抗病育种的新途径。结果表明,以茎段为外植体,在MS IAA 1 mg/kg NAA 1 mg/kg KT 0.2 mg/kg培养基上愈伤组织诱导率最高,下胚轴次之,子叶最差;15%的毒素浓度(v/v)可以作为突变体的筛选压力;逐步提高毒素浓度能够在一定程度上提高愈伤组织对毒素的抗性。     

直接诱导不定芽的矮牵牛再生体系的建立

以矮牵牛的叶片作为外植体,研究了不同浓度的激素配比对叶片直接诱导不定芽、诱导愈伤组织分化不定芽及生根的影响。得到了最适的直接诱导不定芽培养基的激素配6-BA1.5mg/L+IBA0.5mg/L、诱导愈伤组织分化不定芽的培养基的激素配比6-BA1.5 mg/L+NAA0.3~0.5 mg/L及生根培养基IBA0.03~0.05 mg/L。并在时间上,从芽的长势、芽的生根情况进行比较,结果表明：直接诱导的不定芽比诱导愈伤组织分化的不定芽所需的时间短、长势好、生根快。     

宁夏枣树花药离体培养再生体系的建立

采用宁夏3个特色枣树品种的花药为外植体,探索MS培养基中不同激素、激素的不同浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,细胞分裂素6-BA对宁夏枣树胚性愈伤组织诱导起重要作用,AgNO3对愈伤组织分化不定芽影响显著。经过正交试验分析得出,最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+IBA 0.4 mg/L;最佳分化培养基是：MS+6-BA 1.5 mg/L +IBA 0.6 mg/L +AgNO3 0.5 mg/L。在最佳诱导培养基中灵武长枣诱导率最高,达89.0%,在最佳分化培养基中同心圆枣分化率最高,达88.0%。     

小盐芥下胚轴再生体系的建立

以小盐芥下胚轴为外植体,研究了不同激素与不同浓度组合对愈伤诱导和不定芽分化的影响。结果表明,MS 6-BA 2,4-D组合能诱导出愈伤,诱导率为100%。MS 6-BA NAA组合既能诱导出愈伤又能分化不定芽,愈伤诱导率为100%,激素不同浓度不定芽分化率不同,最佳分化培养基为MS 2.5mg/L 6-BA 0.1mg/L NAA,不定芽分化率为43%。生根培养基为1/2MS,生根率为74%。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

杏叶片离体繁殖研究

杏叶片培养可以产生不定芽，ZT与2，4－D配合能诱导出愈伤组织，其培养基为MS＋ZT4．0mg/L 2,4-D 3.0mg／L，但只有在KT与NAA配合使用时才能从叶愈伤组织中分化出少量不定芽，30g/L山梨醇对叶片愈伤组织分化不定芽的作用比同浓度的蔗糖强，愈伤组织第11次继代培养中，在NAA浓度一定（5．0mg/L)的情况下，随着KT浓度的增加，新愈伤组织产生率逐步增加，且愈伤组织幼嫩，茂密，第13次继代培养时，只有MS＋NAA6．0mg/L KT2.0mg/L 山梨醇30g/L及MS＋NAA5．0mg/L KT4.0mg/L＋蔗糖30g/L的培养基可以产生不定芽，产生率分别为6．67％和13．33％，叶片正铺与反铺对愈伤组织的诱导率均达100％，不仅正铺所产生的愈伤组织比反铺的重量大，而且只有正铺才能诱导出不定芽。     

利用病菌培养液离体筛选水稻抗稻瘟病植株研究

以稻瘟病菌粗毒素提取液作为抗性筛选的选择压，对水稻体细胞系和花药及其愈伤组织进行抗病筛选。结果表明，毒素对体细胞和花药愈伤组织的诱导和植株再生有着明显的抑制作用，抑制程度随浓度的增加而增大，经过滤灭菌的粗毒素的毒性大于高压灭菌的毒性，花药的抑制程度大于种子胚愈伤组织，花药筛选系统的适宜毒素浓度低于体细胞筛选系统的毒素浓度。粗毒素液可以作为抗病筛选的选择压。     

12种杀菌剂对牡丹黄斑病的室内毒力测定

为筛选出可有效防治牡丹黄斑病的有效药剂,在实验室条件下,采用菌丝生长速率法比较分析12种药剂在10mg/L质量浓度下对牡丹黄斑病的相对抑制率,测定12种杀菌剂对牡丹黄斑病的室内毒力。结果表明：在10mg/L质量浓度下70%百菌清可湿性粉剂对牡丹黄斑病病菌的毒力最强,相对抑制率为(65.19±2.80)%;其次是80%代森锰锌可湿性粉剂,相对抑制率为(64.81±4.49)%;32%叶斑净对牡丹黄斑病病菌的毒力最弱,相对抑制率为(25.56±4.01)%。毒力测定结果表明50%嘧霉·多菌灵可湿性粉剂对牡丹黄斑病病菌的毒力最强,EC50值最小,为2.6268mg/L。其次是75%百菌清可湿性粉剂,EC50值次之,为2.9781mg/L。32%叶斑净可湿性粉剂对牡丹黄斑病的毒力最弱,EC50值最大,为26.3957mg/L。研究结果为牡丹黄斑病的大田防治提供药剂筛选依据。     

In vitro Selection for Fusaric Acid Resistant Barley Plants

Calli of two genotypes of barley,‘Dissa’and W 193, were used for selection of resistance against fusaric acid, a pathotoxin of Fusarium. Callus was initiated from 7- to 10 days old immature embryos. 1000 calli of the‘Dissa’and 500 of the W 193 genotypes were grown for 4 selection cycles on medium with 0.8 mM fusaric acid. In the first selection cycle, about 80 % of the calli were killed; after the 4 selection cycles, 8 to 11 % resistant calli were obtained and plants were regenerated. Resistant calli maintained on non-toxic medium showed retention of resistance ability after 3 months of sub-culturing. Plants could be regenerated from the surviving calli and testing by leaf bioassay revealed that many were resistant to the same toxin concentration employed for callus selection (100 %), while some were only resistant up to a concentration of 75 %.     

菊花‘金不凋’再生及遗传转化体系的构建

‘金不凋’属于典型的日中性菊花,可作为日中性菊花开花分子机理的理想研究材料,目前尚未建立‘金不凋’的再生及遗传转化体系。本研究以‘金不凋’叶片为外植体,分别对影响再生及转化体系的主要因素进行试验。结果表明‘:金不凋’叶盘愈伤组织的不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,不定芽分化率为90.0%,平均再生不定芽数达5.5556个;相关性分析表明褐化率与愈伤诱导率以及平均再生愈伤组织数之间存在显著的负相关关系;试管苗最佳生根培养基为MS,生根率为100%。在‘金不凋’再生体系建立的基础上,初步建立了其遗传转化体系:‘金不凋’叶盘经过24 h预培养,在菌液浓度OD600=0.6的农杆菌中侵染10 min,共培养2 d,延迟培养5 d,叶片不定芽分化潮霉素临界浓度为2 mg/L,生根筛选潮霉素临界浓度为5 mg/L时,转化效率最高。通过潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得3株PCR阳性菊花苗,转基因阳性苗频率为2.5%,本研究为‘金不凋’的基因工程育种提供了技术基础。     

禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性及再生R1、R2代植株的抗赤霉病性影响

研究了禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性的影响和再生R1、R2代植株的抗赤霉病性变异,结果表明,粗毒素对3个不同基因型幼胚的愈伤组织诱导、胚芽萌发及胚性愈伤组织形成和绿苗分化的影响有相同的趋势。①毒素浓度为6.0g/L时,愈伤组织生长受明显地抑制,但胚芽萌发生长受到促进,低于此浓度时,毒素对愈伤组织的生长有一定的促进作用;②毒素对胚性愈伤组织形成和苗分化均有较大的抑制作用,其中对前者的抑制作用最强;③适宜的粗毒素筛选浓度为1.5g/L~4.5g/L,在这一浓度范围内对愈伤组织形成无影响,而对胚性愈伤组织和苗分化有明显抑制,但又能使其保持有一定的分化能力。④经毒素筛选的抗耐毒素细胞系再生R1代植株中,抗病穗的比例明显提高,R2代再生植株的抗赤霉病性分离,并趋向于感病方的分离。     

抗稻瘟病细胞突变体筛选技术的研究进展

稻瘟病是发生在世界各稻区最严重的真菌性病害,做好对该病的防治对水稻高产与稳产至关重要。随着生物技术的迅速发展,组织培养的离体筛选技术作为一种获得抗病突变体的高效手段而被广泛应用于水稻抗病育种研究。综述了抗稻瘟病细胞突变体筛选中愈伤组织的诱导、粗毒素的制备及毒素对材料抗性筛选等3个主要技术环节,并对抗病突变体在抗病育种中的应用提出问题及展望。     

马铃薯耐热无性系离体筛选的初步研究

为了获得耐热性较高的马铃薯品种,本研究以马铃薯试管苗的愈伤组织为供试材料,采用羟脯氨酸(HYP)和热胁迫相结合的方法来进行马铃薯耐热无性系的离体筛选研究.研究结果表明,MS+1.5～3.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA的培养基均能够诱导全部供试马铃薯茎段产生愈伤组织,说明细胞分裂素6-BA对愈伤组织的形成有着非常重要的作用;同时确定了马铃薯愈伤组织耐羟脯氨酸筛选的适宜浓度为0.2～0.4 mg/mL.MS+1.0～5.0mg/L BA+0.1 mg/LNAA+5 mg/LGA的分化培养基能够诱导愈伤组织进行植株再生,但分化率较低,只有8%～25%.结果表明不同浓度的分化培养基均能诱导马铃薯愈伤组织分化成苗,本实验还筛选出热胁迫的适宜条件为42℃24 h,且经过羟脯氨酸与高温胁迫结合多次筛选获得了两个耐热无性系NKY1和NKY2.初步表明本筛选方法可以用于马岭铃薯耐热无性系的筛选.