茶多酚对小鼠辐射损伤的防护效应

用ＮＩＨ小鼠作动物整体试验,测定茶多酚（ＴＰ）对６０Ｃｏ－γ射线辐照损伤的防护和治疗效应。实验共分５组,即正常对照组、６０Ｃｏ－γ辐照组、辐照前给ＴＰ组、辐照后给ＴＰ组、阳性药对照组。其中给药组分别以１／５ＬＤ５０和１／１０ＬＤ５０二个剂量的ＴＰ水溶液灌胃（ｉｇ）、阳性药组用生白宝ｉｇ,其他各组ｉｇ生理盐水。６０Ｃｏ－γ射线照射总剂量为４．５Ｇｙ,剂量率为０．９８Ｇｙ／ｍｉｎ,辐照后第１０天观察各组小鼠的死亡率、体重、血象、白细胞分类计数、脾指数、胸腺指数、ＣＦＵ－Ｓ、网织红细胞数、骨髓有核细胞数、粒细胞有丝分裂指数和ＰＣＥ的微核细胞率等。结果表明：辐照前给ＴＰ组小鼠的血像、免疫器官指数、ＣＦＵ－Ｓ及粒细胞ＭＩ等明显高于６０Ｃｏ－γ辐照组,并能抑制骨髓ＰＣＥ的ＭＮＣＦ;在辐照后给ＴＰ组中测得的造血及免疫系统的有关数据与６０Ｃｏ－γ组比较也明显提高,说明ＴＰ对机体造血和免疫系统受到电离辐射损伤时不仅具有明显的防护效应,而且对辐射损伤具有一定的修复治疗作用。     

橡胶树HMG-CoA还原酶基因结构序列分析

橡胶树ＨＭＧ－ＣＯＡ还原酶ｃＤＮＡ序列分析结果表明，该ｃＤＮＡ长段为１３８３ｂｐ，由此推导的氨基酸序列含有４６１个氨基酸残基。ＰＣＧＥＮＥ￣（ＴＭ）分析该ｃＤＮＡ克隆与拟南芥ＨＭＧ－ＣｏＡ还原酶ｃＤＮＡ序列同源性为７９．７％，氨基酸序列同源性为８０．２％，与苍鼠氨基酸序列同源性为５１％，与血吸虫氨基酸序列同源性为４８％。（１）发现ＨＭＧ－ｏｎＡ还原酶的一级结构在动物与植物之间存在较大的差异。（２）分析ＨＭＧ－ＣｏＡ还原酶的疏水性氨基酸图谱，发现橡胶树和拟南芥这两种植物权有１个跨膜势能区域（Ｄｏｍａｉｎ），而血吸虫、苍鼠、果蝇等几种动物却有７个跨膜势能区域，这说明该酶的二级结构在动植物之间也存在着较大的差异。（３）由于所分析的几种动植物ＨＭＧ－ＣｏＡ还原酶的羧基一端未见有疏水性区域，故推测具有疏水性区域Ｎ－端蛋白质与膜相结合，而酶的羧基端由于具有亲水性则起到酶的催化中心位点。（４）比较橡胶树ＨＭＧ－ＣｏＡ还原酶和拟南芥ＨＭＧ－ＣｏＡ还原酶氨基酸同源性，发现蛋白质（酶）的Ｎ－端氨基酸同源性较低，而靠近Ｃ－端同源性较高，这说明Ｃ－端部分较为保守，估计与酶的活性中心区域有关，而Ｎ－端同源性较差，估计跟酶与结合的膜不     

茶儿茶素类和生物碱成分的HPLC分析

建立了以恒组成溶液为流动相的ＨＰＬＣ同时分析茶中５种儿茶素类（Ｃ、ＥＣＧ、ＥＣ、ＥＧＣ、ＥＧＣＧ）和３种生物碱（Ｃａｆ、Ｔｐ、Ｔｂ）的定量方法，色谱条件为：ＯＤＳ（１０μｍ）柱，以０．０４ｍｏｌ·Ｌ柠檬酸水溶液─Ｎ，Ｎ─二甲基甲酰胺─四氢呋喃（９０：１６：４：）为流动相，ＵＶ检测器（２７８ｎｍ），以二氯磺胺为内标。讨论了这些成分的提取方法和分离测定条件，此法分离效果好，操作简便，重现性好，分析结果准确。     

遗传工程水稻GER－1试种结果初报

遗传工程水稻ＧＥＲ－１试种结果初报遗传工程水稻研究课题组（湖南农业大学长沙，４１０１２８）遗传工程水稻ＧＥＲ－１是湖南农业大学万文举等人，运用“外源ＤＮＡ浸胚导入法”将玉米ＤＮＡ片段导入水稻，并对其变异后代进行多年定向选育而成。为了探明ＧＥＲ－１的生...     

茶在防治胃癌中的作用

本文以九十年代有关研究为主,就胃癌形成的可能途径和原因进行了分析,从大量试验资料及流行病学研究的结果,综述了茶和其有效成分（ＥＧＣＧ）在防治胃癌中的作用。     

番茄LE-ACC_2合酶基因5′端前导序列分离方法的研究

通过ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件对 Ｒｏｔｔｍａｎｎ等人发表的番茄 ＬＥ－ＡＣＣ２合酶的 ５’端 ２．０ Ｋｂ的前导序列作分析,设计了４对特异引物;以番茄果实、叶片的总ＤＮＡ为模板,采用特异ＰＣＲ扩增技术获得了 ２．０, １．８７, １．５８, １．２８ Ｋｂ ４个特异片段,用 Ｔ－Ｖｅｃｔｏｒ技术构建了１个克隆（２．０ Ｋｂ）、３个亚克隆（１．８７,１．５８,１．２８ Ｋｂ）,对４个克隆产物进行了 ＤＮＡ序列测定,借助 ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件对所获得的各克隆序列进行综合处理与分析,获得了番茄 ＬＥ－ＡＣＣ２ ５’端前导序列的同源率为９９．９％,但第－９７９位的 Ｃ和第－１０７６位的 Ｔ分别为 Ｔ和 Ｃ所替代。对利用 ＰＣＲ技术分离大片段ＤＮＡ的各环节作了较详细的研究。     

提取条件对茶多酚制品儿茶素组成的影响

提取条件对茶多酚制品儿茶素组成的影响严明潮徐向群单夏锋（中国农业科学院茶叶研究所，杭州３１０００８）关键词：茶多酚儿茶素组成提取条件ＥＧＣＧＧＣＧＫｅｙｗｏｒｄｓ：ＴｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓＣａｔｅｃｈｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｎｇ...     

60Co-γ射线对苦荞干种子的辐射效应

用不同剂量（0－500Gy）的^60Co-γ射线辐照3个不同品种的苦荞干种子，结果显示经过射线辐照的干种子其萌发情况受到不同程度的延缓，但对最终萌发率的影响不大；幼苗的苗高、根长及鲜重随剂量的增大受到不同程度抑制，剂量越大，抑制程度越严重，与存活率呈显著的负相关，适宜的辐照剂量为100－200Gy。     

辐射损伤修复抑制剂对大豆油菜幼苗膜脂过氧化的影响

研究辐射损伤修复抑制剂Ｃａｆ和ＥＤＴＡ后处理对不同辐射敏感性油料作物大豆和油菜幼苗下胚轴内脂质过氧化作用的影响．结果表明．随着辐照剂量的增大，细胞膜透性（电解渗透率Ｓｒ）、丙二醛（ＭＤＡ）和脯氨酸（Ｐｒｏ）含量以及过氧化物酶（ＰＯＤ）活性均增大．大豆的Ｓｒ、ＭＤＡ含量各处理均高于油菜，而ＰＯＤ活性则低于油菜，Ｐｒｏ含量两者无显著差异。Ｃａｆ、ＥＤＴＡ后处理不同程度的降低了两者Ｓｒ、ＭＤＡ和Ｐｒｏ含量，提高了ＰＯＤ活性，从而减轻了辐射对膜的损伤。     

激光与~(60)Co-γ射线对当代花生的生物效应研究

露白花生种子分别经He－Ne、N2、YAG、CO24种激光和60Co－γ射线辐照后，其当代花生根尖细胞染色体均能产生畸变，畸变率随辐照剂量的增大而上升，但激光诱变的畸变类型与60－γ射线有差异。不同辐照处理对当代花生的生长发育的影响亦有差异，CO2激光能够同时引发植株矮化、总果数和饱果数增加等有益的农艺性状变异。     

EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG形成的EGCG甲基化衍生物分析

研究了EGCG3′′Me、EGCG4′′Me和EGCG3′Me在正离子模式下的质谱裂解规律,并在此基础上分析了EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG形成的反应产物。结果表明,EGCG-O-甲基转移酶催化EGCG后反应体系中生成了10余种不同的EGCG甲基化衍生物,主要包括EGCG3′′Me、EGCG4′′Me、EGCG3′Me、EGCG5′Me、EGCG3′′,4′′-diMe、EGCG3′′,5′′-diMe、EGCG3′,5′-diMe、EGCG3′,5′′-diMe、EGCG3′,3′′,5′′-triMe,以及EGCG5′,3′′,5′′-triMe等。     

EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件研究

以EGCG-O-甲基转移酶催化EGCG生成EGCG3′′Me、EGCG4′′Me和EGCG3′Me等3种主要的EGCG甲基化衍生物的生成量为主要指标,考察了EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件。结果表明,EGCG甲基化衍生物的酶促合成最佳反应条件为：温度35℃,pH7.5,DTT和Mg²⁺的浓度为2mmol/L;在该反应条件下,反应体系中EGCG3′′Me、EGCG4′′Me以及EGCG3′Me的生成量分别可达到386.39μg/mL、23.40μg/mL和107.01μg/mL。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卡莫司汀处理后张氏肝细胞DNA损伤的保护作用

采用MTT法、Cometassay(彗星实验)和流式细胞分析法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤的保护作用及其机制。结果表明:EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43.31μg/ml,当用无毒浓度25μg/ml和50μg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52.46μg/ml和46.65μg/ml。彗星分析结果表明EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9.07±5.48降为联用时的6.02±2.46。EGCG还能减小卡莫司汀所致张氏肝细胞的早期凋亡率,25μg/ml的EGCG和20μg/ml的卡莫司汀联合处理4、6h和24h时,早期凋亡率分别从4.53±0.64(%)、6.01±0.14(%)、2.27±0.32(%)降至3.04±0.47(%)、5.61±0.10(%)、1.14±0.23(%)。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的杀伤,其机理是它能减少这类药物引起的细胞DNA损伤,降低卡莫司汀所致细胞早期凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强卡莫司汀抗肿瘤作用的体外研究

采用MTT法及Comet assay(彗星实验分析方法)研究了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与卡莫司汀联用对人肺癌细胞A549的生长抑制率及DNA损伤的影响,结果表明：联合应用EGCG能降低卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀。卡莫司汀单用对人肺癌细胞A549的IC₅₀为187.46βμg/ml,当用无毒浓度25βμg/ml和50βμg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀分别下降为139.56βμg/ml和154.02βμg/ml。EGCG还能增强卡莫司汀引起的人肺癌细胞A549 DNA的损伤,彗星尾矩值由单用时的19.02±14.60上升为联用时的33.07±10.47。结果说明EGCG能增强卡莫司汀对人肺癌细胞A549造成的DNA损伤,从而增强其抗肿瘤活性。     

EGCG和GCG清除单线态氧效果的ESR鉴别

利用ESR技术研究了EGCG及其对应体GCG对单线态氧的作用效果。结果表明 ,高浓度下 ,两者对单线态氧均有较强的清除作用 ,无显著差异 ;小于 0 1mmol L浓度时 ,GCG的清除能力强于EGCG ;浓度越低 ,差异越明显。造成这种差异的主要原因是两种儿茶素的空间构象不同 ,GCG比EGCG更稳定。     

茶黄素与EGCG抑制体内外β-淀粉样蛋白1-42水平及其诱导的神经细胞氧化损伤

通过模拟生理条件体外实验,将β-淀粉样蛋白1-42(Aβ42)与EGCG和4种茶黄素单体分别按照1︰1和1︰5比例进行孵育,采用硫黄素T荧光检测β-折叠结构的生成量,结果表明,EGCG与茶黄素均能明显降低β-折叠结构生成,从而抑制Aβ42聚集;此外,通过建立20μmol·L~(-1) Aβ42诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤模型,将不同浓度的EGCG或茶黄素(10、50、100μmol·L~(-1))处理后,MTT法检测细胞存活率,同时,检测细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)等抗氧化指标,结果表明,EGCG与茶黄素可抑制因Aβ42诱导SH-SY5Y细胞活力下降及氧化损伤。体内实验中,通过10mg·kg~(-1)·d~(-1)的EGCG或茶黄素处理快速老化模型小鼠(SAMP8),10周后检测小鼠血清Aβ42及晚期糖基化终末产物(AGEs)含量,结果表明,EGCG和茶黄素可显著降低SAMP8小鼠血清中Aβ42及AGEs含量。本研究表明了茶黄素和EGCG可抑制Aβ42聚集纤维化及Aβ42导致的神经氧化损伤,从而对阿尔茨海默病具有一定保护作用。     

TF1与EGCG在Caco-2细胞中的吸收规律研究

为了探究茶黄素单体（TF₁）与表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在生物体中的吸收规律,本实验建立了体外Caco-2单层细胞模型,模拟小肠对TF₁与EGCG的吸收,并研究了浓度和时间对吸收的影响。结果表明,在10~100βµmol·L^-1范围内,TF₁与EGCG在Caco-2单层细胞模型中的吸收呈现表观渗透系数Papp随浓度增加而上升的规律。但两者的外排率也呈现同样的规律,并且外排率上升的幅度均大于二者吸收率上升的幅度。由于TF₁与EGCG在细胞单层模型中的Papp均小于1×10^-6βcm·s ^-1,说明两者都属于难吸收的药物,但是TF₁在Caco-2细胞模型中的吸收率高于EGCG。因其外排比均大于2,说明两者在细胞模型上的外排是被动转运。从吸收时间看,TF₁的外排规律与EGCG一致。     

氧化应激对Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用

研究了氧化应激对肾细胞Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用。用MTT、吖啶橙染色和DNA凝胶电泳等方法研究了H2O2和Cr6+应激对Vero细胞的损伤,及EGCG对凋亡细胞的保护作用及其机理。结果表明,H2O2和Cr6+剂量效应地抑制Vero细胞活性,IC50分别为175.6和9.8mgL-1;其中50 mgL-1 H2O2和400 mgL-1/2h Cr6+可诱导Vero细胞凋亡。0~60 mgL-1 EGCG有效抑制H2O2和Cr6+应激引起的细胞活性下降,且40 mgL-1 EGCG显著抑制细胞凋亡。对于Cr6+所诱导的细胞凋亡,EGCG的保护作用与EDTA和Vc的协同作用效果相当,表明清除活性氧和络合金属离子都有助于减轻Cr6+应激损伤。可见,EGCG通过清除活性氧和络合离子有效地保护了肾细胞免受应激损伤,这对易遭受活性氧损伤的肾脏无疑具有一定的临床价值。     

茶叶中EGCG3″Me的分析方法研究

采用制备HPLC系统进行分离纯化并进一步结合NMR、LC/MS进行结构鉴定,从茶叶中分离纯化出了EGCG3″Me;研究了不同提取条件对茶叶中EGCG3″Me含量的影响,初步建立了用反相高效液相色谱测定茶叶中EGCG3″Me含量的分析方法。结果表明,该方法重现性好,适用于常规定量分析,平均加样回收率为95.48%,RSD为3.31%;采用蒸馏水在90℃的水浴浸提5min,茶汤中EGCG3"Me的浓度可以达到最高值。     

EGCG抑制波罗的海希瓦氏菌生物被膜和腐败活性的研究

以海产品腐败菌波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)为对象,评价了儿茶素单体抑制生物被膜的效果,并分析效果最佳的单体对该菌生物被膜和腐败活性的影响。结果表明,5种儿茶素单体均能抑制S.baltica生物被膜形成,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)抑制率最高,其最小抑菌质量浓度为40μg·m L-1,亚抑菌质量浓度10~30μg·m L-1的EGCG对细菌生长无显著影响。在30μg·m L-1 EGCG作用下,群体感应(Quorum sensing,QS)信号分子呋喃酮酰硼酸二酯(Autoinducer-2,AI-2)、二酮哌嗪类化合物(Diketopiperazine,DKPs)cyclo-(L-Pro-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe)活性显著下降(P0.05),其抑制率分别为63.95%、27.43%和21.94%。亚抑菌浓度EGCG能显著抑制S.baltica生物被膜形成、泳动能力和蛋白酶活性(P0.05),呈现浓度依赖性,在30μg·m L-1时抑制率分别为55.18%,66.71%和46.67%。因此,EGCG在亚抑菌浓度下能够干扰S.baltica的QS系统,有效抑制生物被膜形成,减弱致腐能力,研究为EGCG作为新型的QS抑制剂调控食品腐败菌奠定基础。