猪痘病毒江西株(SWPV-JX01株)的分离鉴定

本试验利用PK15细胞从江西省某猪场疑似猪痘的保育猪皮肤痘痂中分离到1株病毒,该分离毒株在PK15单层细胞上能连续盲传培养,不产生明显的细胞病变,通过PCR扩增猪痘病毒P35基因,扩增序列与猪痘病毒参考株(AF410153.1)P35基因的核苷酸同源性为97.9%,表明该分离病毒为猪痘病毒,并命名为SWPV-JX01。将SWPV-JX01株F5代细胞培养液经肌肉和皮下注射感染兔和小鼠,人工感染80 h后,通过PCR检测不同组织的猪痘病毒P35基因,从兔的肾脏、脾脏、皮肤、心肌、淋巴结均能扩增到P35基因,且扩增序列与SWPV-JX01株同源性为100%。试验结果表明,SWPV-JX01株能在兔体内增殖,但不能在昆明鼠体内增殖。     

猪痘病毒江西株(SWPV-JXO1株)的分离鉴定

本试验利用PK15细胞从江西省某猪场疑似猪痘的保育猪皮肤痘痂中分离到1株病毒,该分离毒株在PK15单层细胞上能连续盲传培养,不产生明显的细胞病变,通过PCR扩增猪痘病毒P35基因,扩增序列与猪痘病毒参考株(AF410153.1)P35基因的核苷酸同源性为97.9％,表明该分离病毒为猪痘病毒,并命名为SWPV-JX01.将SWPV-JX01株F5代细胞培养液经肌肉和皮下注射感染兔和小鼠,人工感染80 h后,通过PCR检测不同组织的猪痘病毒P35基因,从兔的肾脏、脾脏、皮肤、心肌、淋巴结均能扩增到P35基因,且扩增序列与SWPV-JX01株同源性为100％.试验结果表明,SWPV-JX01株能在兔体内增殖,但不能在昆明鼠体内增殖.     

2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

检测了4株猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.zooepidem icus,SEZ)对猪、兔的致病性。SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏,前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+,后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株,作为对照,其毒力因子的表现型为MRP+EF*SLY+;SEZ-CY和SEZ-CN株均分离自发病猪并经鉴定。SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2~3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108cfu;对兔(2~3只/组)的最小致死量分别为100~1 000、1 000、100和105cfu;SS2-D株108cfu对猪不致死,对兔的最小致死量为108cfu,而SS2-006444对猪、兔无致病性。显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致,可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2~4只/组),并致死,SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10 m in即可检出细菌,此后2~4 h为无菌血症阶段,之后重新出现。     

不同PRRS弱毒苗免疫血清对FcγRIIb介导ADE效应的影响

为了研究蓝耳病不同毒株疫苗在ADE效应下的表现,将疫苗血清复合物(用105.0TCID50的HP-PRRSV田间分离株ZJ-2014,与不同弱毒疫苗CH-1R、R98、TJM-F92的免疫血清在不同的稀释梯度下混合作用24 h,获得血清复合物)接种于PAM细胞,进行蓝耳病病毒增殖试验,检测病毒RNA拷贝数。以兔抗猪FcγRIIb血清进行封闭构建对照组,而后接种PAM细胞。通过比较封闭前后PRRS病毒增殖数量的差异,确定不同疫苗血清兔抗猪FcγRIIb多抗对ADE的阻断作用。试验结果表明:TJM-F92株疫苗的血清抗原复合物对ADE效应的阻断效果最为明显,提示在未来蓝耳病疫苗研制及临床应用中,TJMF92株可以成为优选毒株。     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

猪链球菌病灭活疫苗（2型，HA9801株）的研制（Ⅲ）——疫苗安全性研究

本试验采用实验室研制的3批猪链球菌病灭活疫苗(2型,HA9801株),批号200501、200502、200503,分别用猪进行单次超剂量免疫、多次单剂量免疫、对不同日龄猪单剂量免疫、怀孕母猪单剂量单次免疫试验,以及用Bal/c小鼠和兔进行安全性试验,证实该疫苗对猪及Bal/c小鼠、兔是安全的。     

仔猪不同部位副猪嗜血杆菌分离株的血清抗性检测

本研究应用血清抗性试验,检测了从仔猪不同部位分离的66株副猪嗜血杆菌的毒力,对比菌株对仔猪、兔、豚鼠的血清敏感性差异.试验结果显示:66株菌株中,35株是高抗血清的强毒力菌株,7株是中等抗血清的中等毒力菌株,24株是对血清敏感的无毒力菌株.说明不同分离部位的副猪嗜血杆菌对血清分别呈现血清敏感性和血清抗性,在致病力方面也...     

猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验

２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查，各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒，而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒，据此，显然可见猪瘟兔化毒细胞苗在预防国内猪瘟上极有效力     

猪源马链球菌兽疫亚种感染动物模型的筛选

为筛选出可替代猪的猪源马链球菌兽医亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)感染动物模型,采用不同浓度SEZ强毒株C74-63分别感染兔和豚鼠,连续观察7～10 d,观察临床症状和病理变化,同时与本动物猪对比。C74-63株对豚鼠无致病力;对兔最小致死量为250CFU。感染兔出现神经症状,败血症,体温升高,部分急性死亡;剖解可见兔血液凝固不良,脑膜充血,肝、脾肿大,肺、肝、淋巴结出血等,临床症状随攻毒剂量的增加而加重。猪最小致死量为3 000 CFU,临床症状及病理变化与兔相似。SEZ感染兔发病呈现较好的规律性,可以取代猪SEZ的致病力,为该病动物疫苗的研发提供基础。     

猪肺炎支原体表面蛋白P46基因的克隆与序列比较

猪肺炎支原体(Mycoplasma Hyopneumoniae,Mhp)兔化弱毒株R659株、济南强毒株、强毒Z株、国际标准株232,通过A26培养基培养,提取DNA;利用PCR技术从四株猪肺炎支原体中均能扩增出目的条带.将该序列克隆到pGEM-T-Easy载体上测序.结果表明,克隆序列全长1 152 bp,编码383个氨基酸和一个终止子(TAA);该序列中含有3个TGA编码Trp,而不是终止密码子.比较兔化弱毒株与济南强毒株、国际标准株232及NCBI上发布的J株的P46基因序列,发现它们的同源性分别为98.6%、99.2%、99.2%;比较它们编码的氨基酸发现它们的同源性分别为98.7%、99.2%、99.2%.结果表明猪肺炎支原体的P46基因在猪肺炎支原体种内是很保守的,因此建立以P46蛋白为诊断抗原的ELISA具有潜在的意义.     

猪喘气病弱毒苗的研究：2.冻干大兔苗的研制和应用

自1985年以来,用猪肺炎霉形体兔化弱毒株(简称兔化弱毒株)接种大兔,用大兔肺研制猪喘气病弱毒冻干大兔苗15批,每批600—1200头份,在试验室接种猪62头,定期X光胸透观察60天,肺部呈阴性反应猪54头(87%),轻反应猪8头(12.9%),攻毒后保护49/62,保护率79%,12头健康对照猪全部发病(100%),15批苗安检、效检全部合格,在北京、河北等8省、市、自治区的30个猪场免疫接种不同月龄、不同品种猪10363头,观察2—3年,该苗安全,效果明显,免疫期8个月以上,在-20℃左右保存10个月。     

兔出血症病毒与几株动物细小病毒血清学关系的研究

采用免疫双扩散法及对流免疫电泳法研究了不同地区分离的兔出血症病毒及其与几株动物细小病毒之间的血清学关系。国内不同地区分离的兔出血症病毒同属一个血清型;兔出血症病毒与日本分离的兔细小病毒、小鼠细小病毒、犬细小病毒有一定的血清学关系;兔出血症病毒与大鼠细小病毒、猪细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒无抗原关系。这为我国分离的兔出血症病毒归属于动物细小病毒的分类地位提供了依据。     

禽波氏杆菌分离株的16S rRNA基因序列分析

采用PCR方法对本实验室分离保存的10株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株,扩增其16SrRNA基因的5′端片段（783bp）,并测定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析软件将所获得的序列与GenBank中的禽波氏杆菌序列进行比较,由此构建禽波氏杆菌菌株的系统发育树。结果显示,10株禽波氏杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列的同源性为82.0%～82.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌核苷酸序列的同源性均为99.2%～99.9%,其中P9（山鸡波氏杆菌）、P11（兔支气管败血波氏杆菌）与P14（猪支气管败血波氏杆菌）分别发生1个核苷酸的缺失。本试验结果表明,16SrRNA序列分析是鉴定禽波氏杆菌的一种快速而准确的方法。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝谱的研究

用家兔A型魏氏梭菌培养液处理的6株鸡传染性支气管炎病毒,以方阵试验分别与人O型红细胞及羊、猪、兔、鸡、鸭、鹌鹑、麻雀、小鼠等8种动物的红细胞作血凝试验,结果证明,鸡传染性支气管炎病毒H_(120)株和M_(41)株均能凝集人O型以及羊、猪、兔、鸡、鸭、鹌鹑、小鼠的红细胞,而不能凝集麻雀的红细胞;GIBV株和Connecticut株能凝集人O型以及免、鸡、鹌鹑、麻雀的红细胞,而不能凝集猪、羊、鸭、小鼠的红细胞;Gray株能凝集兔、鸡、鹤鹑的红细胞,不能凝集人O型以及猪、羊、鸭、麻雀、小鼠的红细胞;而经家兔A型魏氏梭菌培养液处理的T株和未经处理的6株病毒对人O型以及8种动物的红细胞都没有凝集性。试验还证明,M_(41)株和H_(120)株对人O型及8种动物的血凝活性水平有差异。     

高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响

为探讨高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗是否干扰猪瘟、口蹄疫疫苗的免疫效果,优化猪瘟、高致病性猪蓝耳病、口蹄疫免疫程序,科学指导动物疫病防控工作,笔者于2014年10月8日—11月12日在河南省正阳县某种猪场进行了高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响试验。结果表明:高致病性猪蓝耳病(TJM-F92株)弱毒疫苗对猪瘟兔化弱毒疫苗(ST传代细胞苗)、猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)免疫抗体水平无显著影响,三种疫苗单独或联合免疫效果都较确实。     

猪伪狂犬病灭活疫苗(HB-J株)对兔与猪免疫攻毒保护平行关系的研究试验

用研制的连续3批猪伪狂犬病灭活疫苗(HB-J株)分别以不同剂量免疫健康兔和断奶仔猪,检测其免疫28 d后的血清抗体,采用血清中和试验法测定血清中和指数,并对免疫28 d后的兔和断奶仔猪分别进行攻毒,统计各组兔和断奶仔猪免疫后攻毒保护率。结果表明,兔免疫28 d后的血清抗体中和指数为794～1258时保护率为60%～80%,血清抗体中和指数≥1479时可获得100%保护;仔猪免疫28 d后的血清抗体中和指数为229～269时保护率为60%～80%,血清抗体中和指数≥331时可获得100%保护。兔与仔猪对猪伪狂犬病灭活疫苗(HB-J株)均产生良好的免疫应答反应,抗体值较高者获得保护率相对较高,兔与猪免疫与攻毒保护呈现平行关系。     

猪伪狂犬病不同佐剂灭活疫苗对兔免疫原性初探

采用分离鉴定的猪伪狂犬病毒（HB—J株）以4种佐剂研制成4批灭活疫苗,以研究其对兔的免疫原性。疫苗分别免疫PRV抗体阴性兔后,用乳胶凝集试验法（LAT）和中和试验法（SNT）对试验兔进行血清抗体检测;于免疫后21、28d对试验兔分别进行攻毒,观察兔保护情况。试验结果表明,兔对不同佐剂的猪伪狂犬病疫苗均产生良好的免疫应答反应,且当兔免疫后血清凝集价≥1：32或血清抗体中和指数≥1479或中和价≥1：16时,可以抵抗10LD50剂量强毒的攻击;当兔免疫后血清凝集价≥1：64或血清抗体中和指数≥2187或中和价≥1：32时,可以抵抗100LD50剂量强毒的攻击;4种佐剂灭活疫苗均具有良好的免疫效果。     

猪痢疾密螺旋体的三个新血清群

猪痢疾密螺旋体(Treponema hyodysenteriae)可致使猪发生腹泻。目前,已鉴定的有6个血清群,即A~F血清群。1990年,澳大利亚学者Hpmpson,D.J.在澳大利亚感染猪只中分离到3株猪痢疾密螺旋体(Q_16、Vic_2和NSW_1)。从3株分离株提取脂多糖进行定型,结果在琼脂凝胶扩散沉淀试验中与A~F血清群的型抗血清不发生反应。所有3株分离株的兔抗血清,仅分别与该3株病原体的脂多糖起反应,不与已定型的病原体的脂多糖起反应。这3株病原     

饲粮中添加兔粪对育肥猪生长性能和肉质性状的影响

为探讨日粮中添加不同比例的兔粪对生长育肥猪生长性状和肉质性状的影响,我们选取60头生长育肥猪分为对照组和4个试验组进行试验.试验组日粮中分别添加10%、15%、20%、25%兔粪,经过61 d的饲养.结果表明:生长育肥猪饲粮中添加不同比例的兔粪对其生长性状、胴体性状、肉质性状影响不显著(P>0.05);从经济效益和饲料的利用效率方面考虑,在生长育肥猪饲粮中添加兔粪的比例以10%左右较为适宜.     

猪瘟活疫苗(传代细胞源)对我国不同猪瘟病毒流行毒株的免疫保护研究

为再评价猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫效力,采用近年在我国流行的不同临床致病力和不同基因亚型的9株猪瘟病毒流行毒株,进行免疫保护效力研究。结果表明,以C-株疫苗种毒生产的猪瘟活疫苗(传代细胞源)对我国目前流行的猪瘟病毒高、中、低致病力毒株及不同基因亚型(1.1、2.1、2.2)流行毒株均具有坚强的保护力,且免疫猪接种不同流行毒株毒后不排毒。研究结果为我国继续使用猪瘟兔化弱毒疫苗进行全面免疫提供了重要科学依据。