禽流感抗体检测中鸭血清非特异性凝集因子去除方法的研究

为探讨不同方法对血凝抑制试验中鸭血清非特异性凝集因子的去除效果,通过对同一批鸭血清分别经不同方法处理后进行一系列对比试验。结果发现,使用鸡红细胞吸附处理法比水浴前处理法（56℃,1min）,更能有效去除非特异反应。经20%、10%鸡红细胞悬液预处理同一批鸭血清,表明20%、10%鸡红细胞悬液吸附处理能明显降低血清中非特异凝集因子的影响,20%鸡红细胞吸附在去除非特异性凝集上整体效果最好。在消除非特异性凝集因子上,采用20%鸡红细胞能够获得理想效果。     

消除鹅禽流感血凝抑制试验中的非特异性凝集的方法探讨

将20份性状良好、抗体水平较高的皖西白鹅待检血清分成A、B、C三组，A组不作任何处理为对照组；B组56℃水浴30min；C组加入红细胞。试验结果是：对照组待检血清的抗体水平稍高于B、C组，但A组全部出现非特异性凝集，90％凝集达到第5孔；B组10％消除非特异性凝集，其余90％都凝集至第2孔；C组90％消除非特异性凝集，其余10％凝集至第1孔。     

用鸭红细胞悬液消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响

禽流感自1878年在意大利首次发生以来不断蔓延,近年来,在许多国家和地区出现暴发和流行,成为严重危害养禽业健康发展的一种主要家禽传染病。因此,加强禽流感的检测是预防和控制禽流感的重要措施。目前,基层单位大都采用微量红细胞血凝抑制试验(简称HI试验)来检测家禽禽流感血清     

鸭血清禽流感血凝抑制试验中非特异性因子去除方法研究

近年来,由于禽流感病毒的变异,水禽在病毒的传播过程中所扮演的角色已经发生改变,由不易感但带毒的贮存宿主演变为易感动物,所以鸭禽流感的监测工作具有了更加重要的意义.然而,在鸭禽流感血清抗体的日常监测工作中,经常遇到鸭血清对鸡红细胞悬液的非特异现象,它会造成在血凝抑制试验结果判定时,鸡红细胞不流淌或流淌不完全,给判定造成严重干扰.为寻求能有效去除非特异现象并便于应用的测定方法,试验选取了能够去除水禽血清中非特异性抑制因子的胰酶-高碘酸盐预处理法,选用可以去除血清中非特异性凝集因子的同源红细胞进行直接测定,同时将两种方法加以组合,现报道如下.     

禽流感血凝抑制试验中应注意的一些问题

禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验(HI)。由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制试验可以用于：①检涮血清中的抗体水平；②鉴定病毒；③辅助诊断病毒性疾病；④作为适时免疫的辅助手段，     

禽流感血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝抑制试验（HI试验）的原理是禽流感病毒在适宜的条件下对鸡的红细胞具有凝集作用,这种凝集作用可被特异性抗体所抑制,抗体与病毒结合后,可使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,红细胞将进行自然下落,利用这种特性检测血清中禽流感抗体的试验就叫禽流感血凝抑制试验。禽流感血凝抑制试验的方法是将受检血清与标定好的抗原发生充分反应,再加入红细胞作用,因为其快捷、成本较低、便于操作、能够处理大量的样品,所以成为基层动物疫病实验室对禽流感诊断及免疫状态监测的重要手段,但禽流感血凝抑制试验能否成功,影响因素很多,如果不加强质量控制,极易造成试验结果偏差,甚至误判,给禽流感的防止工作带来不便。笔者在长期的实验室检测中积累了一些经验,愿与大家分享探讨。 1试验器材的质量控制     

血凝抑制试验中两种鸭血清非特异性凝集因子去除方法的效果比较

非特异性凝集现象,是干扰血凝抑制试验的重要因素。本次试验因非特异性凝集而无法判定结果的比例占20%,采用红细胞沉淀吸附预处理法去除鸭血清中的非特异性血凝素及鸭血球直接测定法进行血凝抑制试验,均有较好去除非特异性凝集因子的效果,去非率达66%,且所得效价与常规检测法相比,无明显差异。     

关于禽流感微量红细胞凝集抑制实验的探讨

禽流感分为低致病性禽流感和高致病性禽流感。其中高致病性禽流感是一种人兽共患的急性传染病,被国际兽医局定为A类动物疫病,我国规定为一类动物传染病。近年来高致病性禽流感在一些国家和地区大规模暴发,不仅给养禽业造成了巨大的经济损失,而且还威胁到人类的生命健康,由于其重要的经济和公共卫生学意义,使得高致病性禽流感的预防与检测显得尤为重要。微量红细胞凝集抑制实验（HI）因其微量、快速、可靠、设备投入资金少、实验条件要求低、检验成本低、     

鸭禽流感免疫抗体血凝检测及其应用

鸭是禽流感传播链中的一个重要环节,能否有效防控鸭禽流感的关键之一是使用科学的检测方法.目前,是参照禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验标准(GB/T18936-2003)[1],但是,鸭体内含有非特异性抑制因子,血清中的唾液酸残基会模拟红细胞受体,同红细胞受体竞争与流感病毒血凝素的结合,因而会导致非特异性抑制结果(假阳性)的出现,用鸡红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象,出现前带和后带现象,有时能严重影响结果的判定.为此,本文采用不同种家禽的红细胞悬液做重复试验,探讨水禽血清的处理方法及不同种的家禽红细胞悬液对水禽禽流感血清抗体检测的影响, 在临床应用中,可为鸭禽流感免疫技术提供参考依据.     

乳胶凝集试验检测番鸭呼肠孤病毒方法的建立

用纯化的抗番鸭呼肠孤病毒病抗体致敏乳胶成功地建立了检测番鸭呼肠呼病毒的方法。通过试验，确定了抗体致敏乳胶的最佳浓度1：10(0．4242mg/mL)，最佳致敏温度37℃，最佳致敏时间2个小时。人工攻毒雏番鸭30只，用所建立的方法检测粪便。结果表明，攻毒后的第3天粪便中即可检测到病毒，直至攻毒鸭全部死亡都可从粪便中检测到病毒抗原；同样攻毒1日龄雏番鸭30只，剖检取心、肝、脾按常规方法处理，用所建立的方法的检测。结果表明，首先是脾脏在攻毒后第4天3只中有2只检测结果阳性，第5天2只死亡鸭中有一只肝检测结果阳性，脾脏2只都呈阳性，此后的病死鸭脾和肝均为阳性，而心脏则未见有阳性。这对，临床上诊断与防治番鸭呼肠孤病毒感染具有重要的参考意义。     

番鸭小鹅瘟病胶乳凝集试验与病毒分离的比较研究

应用GPV胶乳凝集方法（LPA）和病毒分离（VI）检测人工感染病例9份、健康对照6份,临床疑似送检病鸭28份。其中人工感染样品检测LPA和VI符合率为93.3%（14/15）;临床疑似样品检测LPA和VI符合率为89.3%（25/28）;两者总符合率达90.7%（39/43）。LPA方法具有简便（肉眼可判定,不需仪器）、快速（检测抗原20min内）、特异、准确等优点,比VI更适合临床使用。     

番鸭及半番鸭血脂性状间关系的研究

本试验对番鸭及三种半番鸭血液中的极低密度脂蛋白(VLDL)、磷脂(PL)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)的含量进行了测定.结果显示可以用VLDL作为遗传指标培育低脂番鸭;TG与VLDL有较强的相关性,TG可以作为VLDL选择的辅助指标.     

乳胶凝集试验检测鸡传染性鼻炎血清抗体的研究

将Ａ型和Ｃ型鸡副嗜血杆菌培养后,菌落计数,离心计数,离心后用０．０１ＭｐＨ７．４磷酸盐缓冲液洗涤菌体２次。经过对致敏温度、致敏时间、致敏乳胶的菌体浓度及菌体的处理方式等条件的选择,建立了检测鸡传染性鼻炎血清抗体的乳胶凝集试验。与琼脂扩散试验相比,特异性一致,但更加敏感,且操作简便、快速。结果说明,该方法有较好的应用前景,尤其适用于本病的现场快速诊断。     

鸭补体调节因子H的原核表达及多克隆抗体制备

为制备鸭补体调节因子H(CFH)的多克隆抗体,从健康雏鸭的肝脏组织中提取总RNA及反转录合成cDNA,PCR扩增补体调节因子H基因的2个片段H1和H2,插入到载体pMD19-T,测序正确后,将目的基因分别克隆至原核表达载体pCold-TF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达蛋白,重组蛋白经SDS-PAGE检测,镍柱亲和层析纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果表明,成功构建重组表达质粒pCold-TF-H1和pCold-TF-H2,SDS-PAGE检测重组蛋白为可溶性表达,TF-H1和TF-H2多克隆抗体效价均超过1∶10000。所制备的多克隆抗体可以为进一步研究鸭CFH的功能奠定基础。     

番鸭产蛋规律的研究

采用"泄殖腔外托蛋法"对番鸭产蛋规律跟踪测试,结果表明:①番鸭产蛋分为第一、二产蛋期,第一产蛋期持续22-25周,换羽期10-12周;换羽后进入第二产蛋期,经20-22周产蛋后即可淘汰。第一、二产蛋期平均产蛋频率分别为0.48和0.46,两者差异不显著(P>0.05),经测定番鸭(60周)平均产蛋量为156.57个,高产者达213个,少者仅73个。②番鸭冬季日产蛋高峰于凌晨4点,而夏季的高峰时间出现在凌晨5点,且夏季产蛋多、持续时间也较长。环境温度对番鸭产蛋性能有较大影响,冬、夏季平均产蛋率分别为27.48％和51.5％。③番鸭开产体重与开产日龄呈显著正相关,相关系数为0.198(P<0.05),但与第一产蛋期产蛋量呈弱负相关(r=-0.015);开产体重与第一产蛋期产蛋量呈极显著负相关(r=-0.272)(P<0.01)。     

北京鸭输卵管壁内血管分布的研究

采用大体和显微解剖学方法,观察了20羽北京鸭输卵管壁内血管分布。结果表明,出入北京鸭输卵管的血管均是从系膜缘进入输卵管壁内、外肌层间,形成肌间血管层;黏膜固有层深层动脉形成弓形吻合动脉,吻合动脉分出分支分布于黏膜层;黏膜上皮下微血管层的厚度和密度在各段存在差异,蛋白分泌部最厚而密集,其次是峡部、子宫部,漏斗部和阴道部仅形成单层毛细血管层。     

北京鸭/番鸭杂交体系肝脏组织基因表达差异的研究

以番鸭、北京鸭及其杂交后代半番鸭为研究对象,利用mRNA差异显示技术得到肝脏组织基因表达差异图谱。mRNA差异显示表明,肝脏组织的基因表达在纯种群和杂种群之间存在着显著的质和量的差异;5对引物组合显示出41条差异带;分属于7类10种基因表达模式,其中量的差异有3类4种,质的差异有4类6种。这些基因差异表达模式说明了杂种的基因表达调控方式发生了变化,可能是mRNA水平上杂种优势形成的分子遗传基础。     

鸭瘟诊断方法研究进展

鸭瘟是由疱疹病毒引起的鸭、鹅的一种烈性传染病。目前已有多种诊断方法用于鸭瘟的诊断。本文就鸭瘟诊断方法的研究进展作一综述。     

半番鸭羽色性状AFLP标记初步研究

本研究初步利用AFLP标记对半番鸭及其母本-北京鸭进行检测。结果显示,AFLP标记扩增带丰富,10对引物组合共检测到2046条扩增带,平均每对引物组合/每个池DNA可产生60.15条。半番鸭白羽性状特有的扩增带共有15条,分布在E AAC/M CTA、E AAC/M CTT、E AAG/M CAG、E ACA/M CTC、E ACT/M CTA和E ACT/M CTC等6对引物组合上,为半番鸭个体羽色与AFLP标记相关分析和验证提供了素材。