蓝莓bZIP转录因子基因预测及其在根中表达分析

利用生物信息学方法对蓝莓bZIP转录因子基因家族进行鉴定分析,分析基因家族的基本结构、保守域以及与拟南芥bZIP基因家族之间的同源进化关系.共鉴定到131个蓝莓bZIP转录因子基因,调取blastp和HMMER检索到的序列ID,根据ID人工去冗余,后进行CDD(conserve domain database)分析,保...     

水稻HSF基因OsHsf-like的生物信息学和转录表达分析

植物热激转录因子主要调控植物热激蛋白基因的转录表达,对植物的耐热性起着重要的作用.我们利用生物信息学技术鉴定出1个新的水稻HSF基因OsHsf-like,该基因编码1条719个氨基酸的预测肽链,肽链中包含1个HSF DNA结合域和1个由2个疏水的七肽重复序列(HR-A/B)构成的寡聚域.OsHsf-like的DNA结合域具有典型的HSF DNA结合域的次级结构和三级结构.对寡聚域的结构分析和系统进化分析将OsHsf-like归于B类HSFs.OsHsf-like在水稻穗部低水平转录表达.表达水平不受热激影响.     

家禽MSTN基因转录子的克隆及真核表达

为了确定家禽中MSTN基因转录子的种类、序列及表达差异,对1日龄海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡腿肌MSTN基因进行RT-PCR扩增、TA克隆、测序及SDS-PAGE分析。结果表明,海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡鸡腿肌中均存在3种不同大小的MSTN cDNA;cMSTN-1由1 128 bp组成,海兰鸡与白羽鸡的cMSTN的序列相同,寿光鸡在第1 115碱基处由G变为A;cMSTN-2由985 bp组成,缺失了cMSTN-1的374～517 bp处序列;海兰鸡和白羽鸡的cMSTN-2与寿光鸡的cMSTN-2相比,均有5处碱基不同,而海兰鸡和白羽鸡只存在2处碱基不同;cMSTN-2在388～390 bp处出现UAA终止密码子;cMSTN-3由754 bp组成,缺失了374～748处的374个核苷酸,在上述三种家禽中cMSTN-3序列相同。转染成纤维细胞48 h后,pEGFP-N1-cMSTN-2表达蛋白质分子质量约为15 ku,而pEGFP-N1-cMSTN-3不表达。这是首次发现三个品种的鸡体内同时存在三种不同大小的MSTN基因转录子,该结果可为进一步确定MSTN基因的作用机理提供试验依据。     

中生菌素对水稻悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶基因转录表达的影响

 用白叶枯菌（HB84-17）、10?g·ml-1中生菌素和10?g·ml-1中生菌素+白叶枯菌处理水稻抗、感白叶枯病近等位基因系CBB4和沈农1033悬浮细胞，采用斑点杂交的方法研究了中生菌素对水稻悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶基因转录表达的影响。结果表明，白叶枯菌、中生菌素和中生菌素+白叶枯菌处理都能诱导悬浮细胞中苯丙氨酸解氨酶基因的转录表达。对于CBB4，白叶枯菌处理3 h时苯丙氨酸解氨酶基因开始诱导转录表达，6 h达到高峰，诱导表达时间持续至48 h；中生菌素处理3 h时开始大量表达，大量表达持续至48 h。对于沈农1033，白叶枯菌处理12 h时苯丙氨酸解氨酶基因才开始诱导转录表达，诱导表达持续至24 h；中生菌素处理，3 h就开始大量转录表达，并持续至48 h。中生菌素+白叶枯菌处理的感、抗品种苯丙氨酸解氨酶基因的诱导转录表达强度和模式与单用中生菌素处理相同。     

青花菜转录因子基因BoWRKY3的克隆与表达分析

以青花菜为材料,从叶片中分离WRKY转录因子基因BoWRKY3(登录号:JN120758),并进行序列分析;利用逆转录聚合酶链式反应(RT‐PCR)对霜霉菌侵染前后叶片BoWRKY3的表达模式进行分析.测序结果表明:BoWRKY3的基因组DNA全长为1136bp,有3个内含子,长度分别为81、101和96bp;编码区全长为858bp,编码285个氨基酸,具WRKYGQK保守区和CX5CX23HX1H锌指结构.RT‐PCR结果表明,BoWRKY3的表达受霜霉菌诱导,表达量在接种6~36h时最高,暗示该基因与青花菜霜霉病抗性相关.序列比对结果表明,BoWRKY3与十字花科同源基因的差异最小,而与禾本科作物的序列差异最大,关系最远.     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ－２－ＵＫ分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

干旱处理下2个梨品种转录组差异表达基因分析

【目的】以转录组数据为基础挖掘梨抗旱关键基因,为培育梨抗旱品种提供理论基础。【方法】以正常浇水和干旱处理下黄冠梨Pyrus bretschneideri‘Xuehuali’×P.pyrifolia‘Shinsseiki’和黄金梨P.pyrifolia‘Niitaka’×P.pyrifolia‘Nijisseiki’的叶片进行Illumina Hi Seq TM 2000高通量转录组测序分析,利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析2个梨品种中的差异表达基因(DEGs)。【结果】2个梨品种间在正常浇水和干旱处理下分别发现了4 377和3 841个DEGs,其中只在干旱处理下的DEGs有1 340个。这些DEGs在GO数据库的3个本体生物过程、分子功能和细胞成分中富集到的数量分别是1 387、922和1 253个,与植物抗旱相关的代谢过程、应激反应和生物膜等条目分别富集到349、139和151个DEGs。仅在干旱处理下的1 340个DEGs被比对到102个KEGG代谢通路上,其中与植物内源激素相关的代谢通路有3个。将1 340个DEGs进行转录因子分析发现,被注释为转录因子的有37个,分布在17个转录因子家族中,其中乙烯应答转录因子(ERF)家族所拥有的DEGs最多,为11个。【结论】本研究发现了与梨抗旱相关的内源激素代谢基因和转录因子,干旱胁迫下这些基因在2个梨品种中差异表达,这可能与2个品种的抗旱性差异存在密切关系,为下一步梨抗旱分子机理研究奠定了基础。     

转录因子DREB1A基因的克隆及植物表达载体的构建

研究转录因子DREB1A在植物抗渗透胁迫反应中的作用。根据GenBank中登录的DREB1A基因的序列设计引物,用PCR方法从拟南芥中克隆DREB1A基因,利用基因重组技术成功构建了植物表达载体pCAMB1A1300-DREB1A。该结果为进一步利用DREB1A基因做遗传转化研究奠定了基础。     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

Pin1真核表达载体的构建及鼻咽癌稳定表达细胞的鉴定

目的 构建Pin1真核表达载体并筛选鼻咽癌稳定表达细胞株.方法 提取HEK293细胞RNA行逆转录,扩增Pin1基因编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA6B中,菌液PCR鉴定并测序;将成功克隆的质粒转染至CNE1细胞,杀稻瘟素筛选和Western Blot鉴定稳定表达Pinl细胞.结果 成功扩增Pin1编码区,并克隆至真核表达载体pcDNA6B中;Pin1过表达载体转染至CNE1细胞并筛选稳定表达细胞后,Western Blotting检测结果显示Pinl表达水平明显增加.结论 成功构建Pin1过表达载体并筛选出鼻咽癌稳定表达细胞,可用于后续研究.     

pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤鼻咽癌肿瘤血管的体内研究

目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

鼻咽癌组织中WWOX基因和蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨WWOX基因和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征关系.方法 收集52例鼻咽癌和25例正常鼻咽组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色分别检测WWOX mRNA、蛋白表达.结果 鼻咽癌组织中WWOX基因、蛋白表达显著低于正常鼻咽组织（P＜0.05）.癌组织中WWOX基因、蛋白表达与分化程度、TNM分期有关（P＜0.05）.结论 检测WWOX表达可能有助于鼻咽癌诊断及预后判断.     

湖南地区汉族人群mir-499基因多态性与鼻咽癌发生发展的关联性研究

目的研究mir-499(rs3746444)位点多态性与鼻咽癌发病风险及临床病理因素的关系。方法采用病例-对照研究方法,用PCR-RFLP检测152例湖南地区汉族鼻咽癌患者(病例组)及性别、年龄匹配的197例正常人(对照组)mir-499(rs3746444)多态性分布,分析其与鼻咽癌风险及临床病理因素的关系。结果 mir-499基因多态性位点rs3746444的基因型和等位基因分布在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05)。T3、T4期鼻咽癌患者携带CC基因型的比例低于T1、T2期患者(P=0.027)。结论 mir-499基因多态性与湖南地区汉族人鼻咽癌的疾病发生无关,与鼻咽癌的疾病进展有关。     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。     

3种耳后野放疗方案治疗鼻咽癌的疗效比较

目的：比较3种不同的耳后野照射方案治疗鼻咽癌的疗效。方法：90例茎突后间隙受犯的鼻咽癌初治患者，第l段放疗采用面颈联合野放疗，第2段放疗采用耳前野加耳后野放疗。按第2段放疗耳后野不同照射时间、分次剂量随机分为3组：常规剂量组(n＝30)、低剂量组(n＝31)和后加量组(n＝29)。常规剂量组耳后野剂量为每次2Gy，与耳前野相隔6h后照射；低剂量组耳后野剂量为每次lGy，与耳前野相隔6h后照射；后加量组为耳前野照射结束后耳后野照射，每次剂量为2Gy；3组耳后野放疗剂量为10--20Gy，放疗总剂量为肿瘤量(DT)68—80Gy。结果：常规剂量组、低剂量组和后加量治疗3个月后完全缓解率(CR)分别为83．3％、90．3％和82．8％，差异无显著性(P＞0．05)；而中耳炎发生字分别为71．9％、47．4％和44．4％．Ⅲ-Ⅳ级口腔粘腰反应发生率分别为53．3％、28．8％和17．2％，常规剂量组与低剂量组或后加量组比较，差异均有显著性(P值均为＜0．05)、但低剂量组与后加量组比较差异无显著性(P＞0．05)。结论：耳后野低剂量或后加量放射治疗方案的疗效稳定且毒副反应较低。     

鼻咽癌细胞株CNE1转染EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)后对放射敏感性的影响

目的：研究EB病参LMP1对鼻咽癌高分化细胞株CNE1放射敏感性的影响。方法：用电转染技术将带有EB病毒LMP1基因的真核表达质粒导入鼻咽癌高分化细胞株CNEl，用免疫组化法及Western blot检测LMPl的表达；LMP1对CNEl细胞放射敏感性的影响采用^60钴治疗仪照射后集落形成实验进行观察。结果：CNE1细胞抹转染LMP1基因后LMPl蛋白呈阳性表达，对照放射敏感性比未转染株的细胞存活事低(P＜0．01)。结论：LMPl能增加鼻咽癌细胞的放射敏感性，这种作用可能与LMP1的促细胞转化，抑分化有关。     

异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响

目的 观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用.方法 采用不同质量浓度(10、20、40、80 mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化.结果 异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈...     

上腹部手术患者手术和麻醉对中性粒细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的：研究手术与麻醉对上腹部手术患者的中性粒细胞(PMN)凋亡及Bcl—2基因表达的影响。方法：分离围术期上腹部手术患者外周血中性粒细胞，采用流式细胞仪分析培养24h中性粒细胞凋亡及bcl-2基因表达的情况。结果：与健康人相比，手术患者术前中性粒细胞调亡被明显抑制(P＜0．01)，bcl—2基因表达明显上调(P＜0．01)。而与手术患者自身术前相比，硬外麻醉后中性检细胞凋亡抑制及bcl-2表达上调变化不明显，但手术切皮后3h、术后24h、72h变化有显著的差异(P＜0．01)，且以术后24h达峰值。结论：外科创伤可导致明显的PMN凋亡抑制，而bcl—2基因表达上调可能是创伤后PMN凋亡抑制的分子机制之一，硬膜外麻醉对PMN凋亡及bcl—2基因表达影响不大。